高效液相色谱法测定番茄酱中苏丹红Ⅰ的方法

建立优化番茄酱中苏丹红Ⅰ的高效液相色谱检测法,选择市售番茄酱为基质,使用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱进行分离,流速为1.0 mL/min,流动相A为0.1%甲酸水-乙腈(85:15),流动相B为0.1%甲酸乙腈-丙酮(80:20),采用梯度洗脱方式。验证过程中,检测低限LOD为7.4μg/kg,LOQ为24.7μg/kg,苏丹红I的平均回收率为92.61%,相对标准偏差小于2.0%。表明此方法稳定可靠,可用于日常番茄酱中苏丹红Ⅰ非法添加染料的测定和筛查。

UPLC-MS/MS同位素内标法测定食品中对位红、苏丹红Ⅰ～Ⅳ的研究

建立了食品中对位红、苏丹红I～Ⅳ的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定方法，并采用氘代苏丹红作为同位素内标进行定量。样品经提取、液液萃取和固相萃取（Waters OasisMAX）净化，用超高效液相色谱分离后，采用电喷雾串联质谱进行定性和定量检测。线性范围为O～100μg·L^-1，线性相关系数r大于0．99，方法的定性检出限均小于1μg·kg^-1（S／N=10），高、中、低3个浓度水平的加标回收率为78％～112．4％。

唇用化妆品中苏丹Ⅰ～Ⅳ及对位红的高效液相色谱测定法

目的应用高效液相色谱(HPLC)法测定口红、唇彩等化妆品中苏丹Ⅰ～Ⅳ及对位红。方法样品经乙腈提取、超声波萃取,提取液经冷冻、离心、过滤后,再用高效液相色谱紫外-可见光检测器测定,外标法定量。结果该方法在添加1.0mg/kg标准物质时,5种待测成分的平均加标回收率(n=7)为93%～97%,RSD小于4.6%,方法的检出限均为0.05mg/kg。线性范围为0.2～5.0mg/kg,r值为0.9985～0.9998。结论该法操作简便、快速、灵敏,能满足唇用化妆品中苏丹Ⅰ～Ⅳ和对位红检测的需要。

气相色谱-质谱联用法测定调味品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ色素

应用气相色谱-质谱联用方法的选择离子监测技术（GC-MS-SIM），测定了调味品辣椒粉和腌料中的苏丹红Ⅰ、Ⅱ色素。分别在0．58-18．9mg·L^-1及0．31-19．8mg·L^-1浓度范围内，方法具有良好的线性关系。样品的平均回收率为85．5％～95．4％（直接萃取法）及80．7％～88．1％（氧化铝柱净化法），RSD（n=5）为3．64％～7．14％。样品称量为5．0g时，苏丹红Ⅰ、Ⅱ的检出限分别为0．0058，0．0076mg·kg^-1。

苏丹红Ⅰ号的太赫兹光谱研究

采用太赫兹时域光谱（THz-TDS）技术测量了苏丹红Ⅰ号在0.5~2.0THz波段的光谱特性,得到了样品在室温氮气环境下的吸收谱和折射率谱,同时利用密度泛函理论计算了该分子在0.5~2.0THz的振动吸收谱。研究发现,苏丹红Ⅰ号在该波段范围存在THz光谱响应,且实验谱和计算谱之间能较好地进行相互印证,说明THz-TDS技术可以用来探测该样品分子的结构和振动情况。本文还给出了与光谱特征吸收对应的分子振动模型,用以认识分子对THz波的响应机制。该研究结果为将THz-TDS技术应用于食品质量安全检测提供了依据。

苏丹Ⅰ替代番茄红素和β-胡萝卜素标准品的研究

番茄红素是一种具有多种生理功能的类胡萝卜素,由于含有数目众多的双键,极易发生氧化和顺反异构化,而在HPLC检测中需要使用番茄红素标准品以确定保留时间和计算样品中番茄红素的含量,但番茄红素标准品价格昂贵,且本身稳定性差,不宜长期保存。文中根据苏丹Ⅰ在450nm处和番茄红素、β胡萝卜素具有相同的吸收特性,研究用苏丹Ⅰ替代番茄红素和β胡萝卜素标准品,检测误差不超过2%;说明苏丹Ⅰ可用作标品进行番茄红素和β胡萝卜素的检测。得到了番茄红素和β胡萝卜素的计算公式。

苏丹红Ⅰ单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测

重氮法合成苏丹红Ⅰ的结构类似物,通过活性酯法将苏丹红Ⅰ的结构类似物偶联到载体蛋白上制备人工抗原,用所制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合的方法制备苏丹红Ⅰ单克隆抗体,结果成功筛选到一株抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体,经鉴定为IgG2a型,并建立间接竞争ELISA检测方法,线性范围为0.5～10ng/mL,检测下限为0.1ng/mL,加标回收率为52.3%～110%,变异系数为3.2%～8.9%。

食品中苏丹红Ⅰ和辣椒红的表面增强拉曼散射(SERS)光谱与激发-发射矩阵荧光光谱鉴别

利用表面增强拉曼散射(SERS)光谱及激发-发射矩阵(EEM)荧光光谱对食品中非法添加剂苏丹红Ⅰ和合法食品添加剂辣椒红进行了定性分析和检测.SERS光谱结果表明,苏丹红Ⅰ在低波数区域分子的扭转振动信号增强比较明显;而辣椒红在1521和1158 cm-1处拉曼信号增强效果比较明显;EEM荧光光谱结果表明,苏丹红Ⅰ的乙醇溶液在P1(λex=285 nm,λem=345 nm)和P2(λex=335 nm,λem=548 nm)处有2个明显的荧光特征峰;而辣椒红的乙醇溶液有3个特征荧光峰,分别为P1(λex=545 nm,λem=580 nm),P2(λex=560 nm,λem=665 nm)和P3(λex=608 nm,λem=672 nm).

苏丹红Ⅰ直接竞争ELISA检测试剂盒的研制

直接包被多克隆抗体建立了苏丹红ⅠELISA检测技术,研制苏丹红ⅠELISA检测试剂盒。结果表明,制备的多克隆抗体对苏丹红Ⅰ亲合力强、特异性高,试剂盒标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1.55～100μg/L,50%抑制率(IC50)为13.52μg/L,灵敏度(IC10)为1.95μg/L,平均批内与批间变异系数分别为7.6%与10.6%,与苏丹红Ⅱ、Ⅲ的交叉反应率分别为4.40%和1.70%,与苏丹红Ⅳ及其他违禁食品染色剂交叉反应率低于0.01%;干辣椒、辣椒粉、辣椒油与辣椒酱等4种样品的苏丹红平均添加回收率分别为88.1%、91.4%、78.2%和84.3%,最低检测限分别为1.82、1.71、2.19和2.12μg/kg;与HPLC检测方法具有较高的相符性,4种样品相关系数分别为0.95,0.94,0.86和0.87;该试剂盒在4℃下至少可保存180d,可用于辣椒及其制品中苏丹红Ⅰ的批量快速低成本筛查。

化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ

为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156~5 ng/m L,最低检测限为0.078 9 ng/m L,IC50为0.679 ng/m L。CLEIA回收率为75.08%~112.18%,变异系数为8.89%~15.61%;通过与酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。

核-壳型苏丹红Ⅰ印迹聚合物微球制备及应用研究

以苏丹红Ⅰ为模板分子,苯基-三甲氧基硅烷(PTMOS)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGD-MA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,采用表面分子印迹技术,在自制的SiO2微球表面成功合成了对苏丹红Ⅰ具有良好选择识别性能的核-壳型印迹聚合物。采用红外光谱和扫描电子显微镜对分子印迹微球进行表征,结果表明该印迹聚合材料壳层厚度约为150 nm;采用静态吸附实验研究印迹材料对模板聚合物的吸附性能和选择特性,结果表明以PTMOS为功能单体的印迹聚合物对苏丹红Ⅰ具有优异的选择吸附性,其分离选择因子为2.62。在吸附过程中,模板分子苏丹红Ⅰ与印迹聚合物形成2种结合位点,2种结合位点的解离常数分别为2.30、10.78 mmol/L,最大表观结合量分别为27.40、128.53μmol/g。将该印迹聚合物作为固相萃取材料,对样品进行固相萃取,结合液相色谱技术成功用于辣椒油中苏丹红Ⅰ的测定。

苏丹红Ⅰ分子印迹聚合物的制备及其性能评价

以苏丹红Ⅰ为模板分子,通过沉淀聚合法制备了一种对苏丹红Ⅰ具有特异性吸附的分子印迹聚合物。通过选择性评价和前沿色谱实验,评价了致孔剂的选择和用量、功能单体和模板分子的物质的量比对分子印迹聚合物识别性能的影响。实验结果表明:当以甲醇和乙腈的混合液(体积比为30∶10)为致孔剂,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,且功能单体和模板分子的物质的量比为8∶1时,分子印迹聚合物的印迹因子为2.32,亲和位点总数(Bt)为0.50μmol/g;将其作为固相萃取柱填料用于辣椒粉样品中痕量苏丹红Ⅰ的净化和富集,结果表明:苏丹红Ⅰ浓度在10～500μmol/L范围内时,呈现良好的线性关系(r=0.999);检出限为3.3μmol/L,加标回收率为95.87%～98.41%,相对标准偏差低于3.1%。该方法有望用于辣椒粉样品中苏丹红Ⅰ添加剂的常规检测。

基于银镜的高灵敏表面增强拉曼光谱基底制备及其用于苏丹红Ⅰ的检测

利用银氨溶液和葡萄糖反应的银镜反应制备了表面增强拉曼散射(SERS)光谱银镜基底。扫描探针显微镜照片显示该基底表面颗粒较均匀,银粒粒径为100 500nm。将此基底插入含微量孔雀石绿水溶液中,测量吸附孔雀石绿分子的拉曼光谱,增强因子可达3.8×105。采用该基底对苏丹红Ⅰ进行了检测,得到了能够表征其毒性的特征拉曼频移。实验表明,利用表面增强拉曼光谱法检测苏丹红Ⅰ,方便快捷,有望成为苏丹红类物质的有效检测方法。

分子印迹聚合物固相萃取红椒粉中的苏丹红Ⅰ

本文以苏丹红Ⅰ为模板分子,以甲基丙烯酸(MAA)、4-乙烯基吡啶(4-VPy)为功能单体,制备了两种模板聚合物(MAA-MIP和4-VPy-MIP)。对4-VPy-MIP进行了Scatchard方程分析。分别以这两种模板聚合物为固相萃取材料来填充固相萃取柱,从掺有苏丹红Ⅰ的红椒粉中萃取苏丹红Ⅰ。本文优化了固相萃取条件。高效液相色谱检测表明,在合适的萃取条件下,采用填充4-VPy-MIP的固相萃取柱可以有效地从红椒粉中分离富集苏丹红Ⅰ。

苏丹红Ⅰ号多克隆抗体的制备与特异性鉴定

采用琥珀酸酐法,分别以BSA、OVA为载体蛋白合成了免疫抗原和包被抗原并通过SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描法鉴定了合成的抗原为载体蛋白和苏丹红I号的复合物.将合成的免疫抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体,经辛酸纯化,间接ELISA法测得有高效价血清抗体;进一步采用琼脂双扩散试验和免疫金试纸法鉴定出血清中含有苏丹红Ⅰ号特异性抗体.

苏丹红Ⅰ对小鼠血液和脏器系数的影响

研究苏丹红Ⅰ长期染毒对小鼠血常规和脏器系数的影响。将40只昆明雄性小鼠随机分成4组,3个染毒组分别给予含1000、500、250mg/kg苏丹红Ⅰ的饲料,对照组给予正常饲料,每10d测定1次体质量和血常规。60d后处死所有小鼠,计算脏器系数。结果显示,各染毒组小鼠出现不同程度的体质量增长缓慢现象;各染毒组小鼠的肝脏、脾脏和肾器系数在不同程度上均高于对照组;随小鼠染毒时间的增加,其血液中的红细胞和血红蛋白含量呈逐渐下降,白细胞和凝血时间呈逐渐增高的趋势,以1000mg/kg染毒组表现最为显著。结果表明,苏丹红I染毒后对小鼠的血细胞和实质脏器会造成一定程度的损伤。

极谱催化波法测定红辣椒粉中的苏丹红Ⅰ

在Na2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH8．0）中，加入适量的K2S208溶液后，用微分脉冲极谱法测定苏丹红Ⅰ，结果于-0．590V处产生苏丹红Ⅰ的二阶导数峰。其含量在0．01～0．10mg·L^-1范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为：Y=0．0552x＋0．2128（r=0．9993，n=5），检出限为2．0μg·kg^-1。该催化波的灵敏度比相应的还原波提高了5倍以上，用于测定辣椒粉中的苏丹红Ⅰ，结果满意。

在非平衡稳定态的Belousov-Zhabotinsky体系中检测苏丹红Ⅰ

研究了以丙二酸和铈离子的初始浓度为控制参数的Belousov-Zhabotinsky(B-Z)化学振荡体系的动力学性质,在连续改变控制参数的过程中均出现了分岔现象,在逼近临界点前的非平衡稳定态对苏丹红Ⅰ进行了分析测定。考察了苏丹红Ⅰ对B-Z体系的两个非平衡稳定态的扰动,结果表明,苏丹红Ⅰ可使体系的电位发生明显的改变。当苏丹红Ⅰ的浓度分别在6.17×10-10～3.16×10-6mol/L和7.58×10-7～1.55×10-5mol/L范围内时,苏丹红Ⅰ浓度的负对数(-lgC)与电位的变化值(ΔE)之间呈现良好的线性关系,相关系数分别为0.9975和0.9984;检出限(LOD)可达1.99×10-10mol/L。以丙二酸初始浓度为控制参数的非平衡稳定态体系成功地测定了伪劣商品辣椒粉中的苏丹红Ⅰ,回收率在98.8%～102.8%之间。

苏丹红Ⅰ-甲醇体系的共振光散射光谱研究及其应用

研究了苏丹红Ⅰ-甲醇体系的共振光散射（RLS）光谱和作用机制，建立了测定苏丹红Ⅰ的RLS新方法。温度20℃时，苏丹红Ⅰ-甲醇体系的RLS强度降低值（△Ⅰ）与苏丹红Ⅰ的浓度在0．5～16．0g／mL具有良好的线性关系，方法检出限0．16μg／mL，相对标准偏差（RSD）为1．8％～2．4％（n=11），加标回收率为92．7％～103．8％。

分光光度法快速检测苏丹Ⅰ和Ⅳ

运用分光光度计建立快速有效的检测苏丹Ⅰ和Ⅳ的方法,优化苏丹红的萃取工艺。通过全波长分光光度计检测鸡蛋及饲料中苏丹Ⅰ和Ⅳ的含量,结果显示用分光光度法检测苏丹Ⅰ和Ⅳ与HPLC法检测结果一致。