邻苯三酚自氧化法适于测定SOD活性吗?

用邻苯三酚自氧化法测定了Cu-ZnSOD(Superoxidedismutase,SOD)及根据天然超氧化物歧化酶活性部位结构设计、合成的一些模型化合物(themodelsofSOD,MSOD)活性.测试结果表明:Cu-ZnSOD和含Cu( )、Fe( )、Mn( 、 )的SOD模型化合物随浓度升高,有的对邻苯三酚氧化表现为负抑制(即促进邻苯三酚氧化);另一部分化合物在较低浓度表现为抑制,较高浓度表现为负抑制的交替变化;或抑制率的无规则变化.本文对出现负抑制的内在根源进行了探讨,鉴于邻苯三酚自氧化的复杂反应机理;含Cu( )、Fe( )、Mn( 、 )SOD模型化合物的多酚氧化酶活性和Fenton反应催化活性,及MSOD中金属离子的Lewis酸性,不宜采用邻苯三酚自氧化法测定SOD活性.

两种连苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶的比较

目的 :超氧化物歧化酶 (SOD)的测活方法很多 ,目前国内多采用连苯三酚自氧化法 ,本方法有两种 ,一种是经典的Marklund连苯三酚自氧化法 ,简称 42 0nm法 ;另一种是对 42 0nm法作了改进的微量连苯三酚自氧化法 ,简称 32 5nm法。本文就这两种方法的特点及换算关系做了比较 ,希望可以改变SOD研制及应用中活力计算混乱的局面。方法 :在严格控制实验条件一致的情况下 ,对 2种方法对比考察 ,对所得数据进行线性回归统计。结果 :32 5nm与 42 0nm法间活力单位的比值为 1/ 2 5 ,且 32 5nm法的灵敏度高于 42 0nm法 。

超氧化物歧化酶活性的测定

主要采用光谱法研究测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及不同实验条件对其活性的影响,找出最优的测活条件,为实际工作提供一些有意义的指导,并且为下一步的酶促反应动力学研究提供实验和理论依据.实验结果表明,测定SOD活性的最优条件为:实验温度为25℃,0.1mol.L-1 Tris-HCl缓冲溶液,pH值为8.20,内含2.0mmol.L-1 EDTA,邻苯三酚浓度为2.5mmol.L-1,控制酶的加入量为0.30mL.

超氧化物歧化酶两种测活方法的比较

超氧化物歧化酶(SOD)的测活方法很多,活性单位也不统一,该文研究了改进的肾上腺素法和微量连苯三酚法两种测活方法,比较了两者的自氧化曲线、重现性、灵敏度及测活结果。在严格控制实验条件的情况下,对两种方法的自氧化速率进行了相对标准偏差(RSD%)、线性回归(R)等统计分析。连苯三酚法在重现性(RSD4.72%,n=10)和灵敏度方面均高于肾上腺素法(RSD7.71%,n=10),连苯三酚法与肾上腺素法测活结果的比值约为2.21。

荧光动力学法测定超氧化物歧化酶的活性

超氧化物歧化酶的活力可以反映机体清除氧自由基的能力,在抗衰老研究中经常需对其进行准确测定。邻苯三酚自氧化可产生强荧光的醌,超氧化物歧化酶通过清除该反应过程中产生的超氧阴离子自由基使醌减少,据此建立了测定超氧化物歧化酶活力的荧光动力学方法。探讨了缓冲液的浓度、pH值、邻苯三酚浓度和温度对测定的影响。在Tris-HAC缓冲液浓度为0.1mol/L、pH8.2、邻苯三酚浓度为0.385mmol/L、温度为25℃的最佳条件下,得到SOD的线性响应范围为0.31~1.58mg/L;血清样品测定的RSD为1.12%（n=5）;加标回收率在94.3%-103.49%之间。本法与黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶法的测定结果一致,可用于动物样品中超氧化物歧化酶活力的测定。

微量连苯三酚自氧化法测定SOD活性的条件优化

针对目前微量连苯三酚自氧化法测定SOD活性条件不一、测定结果重复性差的问题,实验考查不同保温时间、缓冲液体系、终止剂、加酶量等因素对SOD活性检测结果的影响,确定了最佳的检测条件为:pH7.8的0.9%生理盐水(内含1mmol/L Na2EDTA)作为酶溶剂,以pH8.6的50mmol/L Tris-HCl(内含1mmol/L Na2EDTA)作为缓冲体系,加入酶液保温20min,立即加入10μL 0.057mmol/L连苯三酚,反应3分钟后加入20μL 50g/L维生素C终止剂终止连苯三酚自氧化反应,于325nm波长下测定酶活性。在该条件下可以稳定地重复测定SOD活性,该方法可为SOD产品的活性检测提供参考依据。

山葡萄籽和皮中原花青素类SOD活性的测定

采用邻苯三酚自氧化法测定山葡萄籽和皮中原花青素SOD-L的活性为192.85U/g和78.45U/g。通过实验确定了适宜的测定条件:测定波长325nm,缓冲体系为Tris-HAc缓冲液,浓度为50mmol,pH8.2。原花色素SOD-L对连苯三酚自氧化的抑制率达到91%。

青梅果超氧化物歧化酶粗酶的提取及活性研究

[目的]测定青梅果超氧化物歧化酶（SOD）活性，筛选青梅果SOD粗酶提取最有效的方法。[方法]以重庆綦江青梅果为原料，采取不同料液比提取青梅SOD粗酶，以Sevage法除去杂蛋白，硫酸铵分级沉淀。同时对各步骤所得S0D粗酶活性、蛋白量、比活的检测结果进行比较。[结果]H3P04缓冲液的用量对SOD粗酶的提取有直接影响。当H3PO4缓冲液与梅果的比例为3：1时，测得酶的比活最高，为25．34U／mg蛋白；粗酶液按3：1体积比加入的氯仿-乙醇混合液除去杂蛋白效果明显；粗酶液添加（NH4）2SO4至90％饱和度沉淀SOD效果好，比活较提取液上升51．43U／mg蛋白。[结论]青梅果SOD粗酶提取的最佳条件：H3PO4缓冲液与青梅比例为3：1，温度为25～30℃，pH值为7．8，Sevage法除去杂蛋白，（NH4）2SO4盐析从35％添加至90％饱和度沉淀SOD。该条件下，总蛋白为215．13mg，酶总活力为5415．74U／mg蛋白，比活为25．34U／mg蛋白。

利用几种生物原料提取SOD的比较研究

研究利用不同生物原料提取SOD(超氧化物歧化酶)的差异,采用有机溶剂处理,分离提取红酵母、啤酒酵母、香菇、平菇和毛霉菌体中的SOD,并以邻苯三酚自氧化法测定它们的活性。结果表明,利用啤酒厂的废酵母提取SOD,不仅成本很低,而且酶活力高,可作为SOD工业化生产的最佳原料。

邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的电化学研究

邻苯三酚在Tris-HCl(pH8.30)缓冲溶液中,可以发生自氧化反应产生超氧阴离子自由基(O2-),其自氧化产物在-0.96V和-1.44V(SCE)有两个还原波。铜锌超氧阴离子歧化酶(SOD)可催化O2-的歧化反应,使邻苯三酚自氧化反应的速率降低。通过测定加入不同量SOD时邻苯三酚自氧化反应速率的变化来测定SOD活性,建立一种简单、灵敏的测定SOD活性的电化学方法,结果表明:在-0.96V处测定SOD活性的灵敏度略高于-1.44V处的灵敏度。

稻米中超氧化物歧化酶含量及活性分析

[目的]对不同稻米中超氧化物歧化酶(SOD)的含量及活性进行测定、分析。[方法]采用沉淀法从不同种类稻米中提取SOD,然后用改良的邻苯三酚自氧化法进行SOD活性分析,比较不同稻米中SOD含量及活性的差异。[结果]糯米中的SOD含量高于粳米,但两者活性差异不大。高纬度地区所产稻米的SOD含量及活性均高于低纬度地区所产稻米。胚芽保留程度高的鲜糙米SOD含量及活性最高。[结论]沉淀法可以有效地从稻米中提取SOD。不同种类、产区和加工工艺稻米中SOD含量及活性存在差异。

稀土离子(La^3+)、Ce^(3+)、Nd^(3+))对超氧化物歧化酶活性的影响

利用微量邻苯三酚自氧化法(320 nm)研究了25℃下,0.1 mol/L Tris-HCl缓冲体系中(pH 8.2)不同稀土离子(La3+、Ce3+、Nd3+)对邻苯三酚自氧化和铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)活性的影响,并对可能的抑制作用机理进行了讨论。结果表明,稀土离子La3+、Nd3+对邻苯三酚自氧化有抑制作用,Ce3+对邻苯三酚自氧化表现出先抑制后促进的作用;3种稀土离子对Cu,Zn-SOD酶活性均存在抑制作用,并随稀土离子浓度的增加抑制程度不断增强,而当加入的稀土离子浓度大于2.22×10-5mol/L时,Cu,Zn-SOD完全失活。

邻苯三酚—NBT法测定超氧化物歧化酶活性的方法学研究

本文对邻苯三酚—NBT法测定超氧化物歧化酶活性的方法学进行了研究,结果表明此方法可适用于乙醇—氯仿溶液提取的植物超氧化物歧化酶的活性测定。

超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法的研究及改进

对目前国内外普遍采用的超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法 (Marklund法 )进行了系统研究。实验表明 ,该测活体系中缓冲溶液的介质组成、浓度、pH及所含的EDTA量等均对体系测活灵敏度有显著影响。根据条件优选实验 ,提出了改进新体系 ,改良后的新方法的测活灵敏度较经典法提高65 5%