提高甜菜遗传转化频率的研究

以甜菜叶柄为外植体,通过农杆菌介导转化,将玉米胚乳核糖体失活蛋白基因(cRIP)导入甜菜,对影响转化频率的因素:卡那霉素的浓度、头孢霉素的浓度、农杆菌感染时间和浓度等进行了探讨,初步建立了转化频率较高的转化系统,当卡那霉素浓度为100mg/L,头孢霉素浓度为500mg/L,农杆菌浓度OD值为0.3～0.4,感染时间为8～10min时,抗性不定芽分化率可达36.5%。该转化系统为转基因植株的获得奠定了基础。

甜菜组织培养过程中同工酶及可溶性蛋白质的变化

应用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)垂直平板电泳对甜菜组织培养直接多芽发生和遗传转化过程中的过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)同工酶动态及蛋白质含量的变化进行了研究。结果表明:甜菜在加入6-苄氨基嘌呤(6-BA)诱导直接多芽发生的过程中,POD、EST同工酶和可溶性蛋白出现了酶带条数和颜色深浅的变化,其变化可能与控制多芽发生的代谢活动有关;甜菜遗传转化后出现了明显的酶带颜色加深和新酶带的增加,这是由于外源基因的导入而使甜菜具有的标志,还是转基因的直接作用效果还有待于做进一步的研究。

甜菜遗传转化及PCR检测

用农杆菌介导方法,将甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白(BNYVV CP)基因和丛根病外壳蛋白(BBSVCP)基因转化甜菜不同品系茎节外植体。以卡那霉素作为筛选标记基因,获得抗卡那霉素再生植株。再生植株经PCR扩增,获得目的基因大小的DNA片段,初步证明为转基因植株。