斜纹夜蛾羧酸酯酶基因的克隆、序列分析及表达水平

为了明确斜纹夜蛾Spodoptera litura对溴氰菊酯产生抗性的分子机理,本研究利用RT-PCR技术和RACE方法获得了1个斜纹夜蛾羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为Slest2。序列分析表明,该cDNA全长1796bp(GenBank登录号:DQ445461),5′和3′UTR区分别长63和119bp,开放阅读框编码一个由537个氨基酸残基组成的羧酸酯酶蛋白。通过对氨基酸同源性分析表明,该羧酸酯酶与其他物种的酯酶均具有很高的氨基酸相似性,并具有多个在不同酯酶蛋白家族中均保守的区域。采用实时定量PCR技术比较了Slest2在斜纹夜蛾抗、感品系中的表达水平。当以cDNA为模板检测mRNA转录水平时发现,Slest2在抗性品系中的转录水平是敏感品系的46.85倍;以基因组DNA为模板检测Slest2基因的拷贝数时发现,Slest2在抗、感性品系中的拷贝数无显著差异(前者为后者的1.16倍)。这些结果表明,抗性与敏感品系具有相似的Slest2基因拷贝数,但它们在抗性品系中的转录水平显著升高。由此推测Slest2基因的转录水平升高与斜纹夜蛾对溴氰菊酯的抗药性密切相关。

不同抗药性品系甜菜夜蛾呼吸速率的比较

以甜菜夜蛾Spodoptera exigua(H櫣bner)敏感品系(SS)及高效氯氟氰菊酯选育的抗性品系(RR)和近等基因系-抗性品系(NILs-RR)幼虫为试虫,在25±1℃,相对湿度70%,光照强度3000lx,光周期14L∶10D的条件下测定了3～5龄幼虫呼吸速率的变化。结果表明,抗性品系与敏感品系的同龄期甜菜夜蛾幼虫在不受药条件下的呼吸速率差异不显著,因此抗性水平的提高并未相应引起甜菜夜蛾本底呼吸速率的变化。高效氯氟氰菊酯处理幼虫后,各品系的呼吸速率均随剂量的提高而相应提高,以各品系相应LC20和LC50剂量处理后的呼吸速率,NILS-RR明显高于RR,两者又明显高于SS品系。两个抗性品系呼吸速率峰期均出现在药后5h,而敏感品系出现在药后2h;敏感品系保持较高呼吸速率的时间短,而抗性品系维持高水平呼吸速率的时间长,分别于药后15h和24h恢复到正常水平,这表明用药后抗性品系呼吸速率的提高幅度与代谢解毒能力存在一定相关性。

抑制剂存在下不同种群烟粉虱乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布及其与抗药性的关系

为了探讨烟粉虱Bemisia tabaci不同种群个体乙酰胆碱酯酶敏感性差异及其与抗药性的关系,我们选用室内饲养的烟粉虱SUD-S敏感品系和6个田间抗性种群,采用酶标板酶动力学法测定了各品系(种群)乙酰胆碱酯酶对抑制剂的敏感性反应以及抑制剂存在时各抗性种群个体乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布。结果表明:在抑制剂浓度为300μmol/L时,敏感品系乙酰胆碱酯酶的活性基本上被完全抑制,可以明显地区分敏感品系与田间抗性种群。在抑制剂浓度为2000μmol/L时,各抗性种群个体乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布差异明显,其中ZZ-R种群和FZ-R种群的乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布相似,大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分布在1.00～1.80mOD/min之间;SM-R种群和ND-R种群的乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布也相似,大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分布在0.40～1.00mOD/min之间;LY-R和NP-R种群大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分别分布在1.00～1.60mOD/min和0.80～1.20mOD/min之间。各抗性种群乙酰胆碱酯酶高残余活性(大于1.00mOD/min)个体频率与对敌敌畏的抗性水平之间具有明显相关性,相关系数为0.86(P<0.05)。考虑到乙酰胆碱酯酶对抑制剂作用不敏感是一些昆虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗性的重要机制之一,建议可以将乙酰胆碱酯酶对敌敌畏的敏感性作为烟粉虱抗药性生化检测的一个参考指标。

江苏省家蝇对卫生杀虫剂抗性的调查

目的 :建立家蝇对卫生杀虫剂的抗性谱 ,为全省各地开展除害灭蝇工作提供科学依据。方法 :采用点滴法测定家蝇对杀虫剂的半数致死量。结果 :江苏省家蝇对敌敌畏、溴氰菊酯、二氯苯醚菊酯等卫生杀虫剂的抗性高于敏感品系的8～ 12倍 ,对其他卫生杀虫剂高 1～ 2倍。结论

江苏省家蝇对卫生杀虫剂敏感品系和抗性品系的调查

目的 建立家蝇对卫生杀虫剂的抗性谱,为全省各地开展除害灭蝇工作提供科学数据。方法 采用点滴法测定家蝇对杀虫剂的敏感品系和抗性品系。结果 江苏省家蝇对敌敌畏、溴氰菊酯、二氯苯醚菊酯等十三种卫生杀虫剂的抗性品系高于敏感品系的8～12倍,对其他卫生杀虫剂高1～2倍。结论 我省家蝇对所测十三种杀虫剂已经产生抗性。

一个致倦库蚊杀虫剂敏感品系的筛选

化学防治是控制蚊虫传播疾病的主要方法,抗性监测表明我国蚊虫已对有机磷、有机氯、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类杀虫剂产生了不同程度的抗性。蚊虫抗药性的分子机制主要包括靶标抗性和三大解毒酶家族带来的代谢抗性。筛选对杀虫剂敏感的品系是抗性监测和抗性机理研究必不可少的材料。本研究通过从一个致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus野生种群筛选无乙酰胆碱酯酶G119S突变且具有低活性羧酸酯酶、P450单加氧酶和谷胱甘肽-S-转移酶的单雌系,建立了一个对杀虫剂敏感的致倦库蚊品系。该品系的羧酸酯酶活性是敏感品系S-lab的2.5倍,P450单加氧酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活性与S-lab相当。生物测定表明,与S-lab相比,该品系对有机磷杀虫剂有低于2倍的抗性,对氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类杀虫剂没有抗性,可以作为相对敏感品系用于抗性监测。