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题名广西沼泽型水牛γ-干扰素基因的克隆与原核表达
被引量:1
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作者
张为宇
郑小龙
阳玉梅
黄维义
石云良
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机构
广西大学动物科学技术学院
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出处
《广西农业生物科学》
CAS
CSCD
2007年第3期210-214,共5页
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基金
广西自然科学基金项目(桂科基0448001)
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文摘
本研究克隆了广西沼泽型水牛γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因,并构建了水牛IFN-γ原核表达质粒。从健康沼泽型水牛静脉无菌采血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用刀豆素A(Concanavalin A,ConA)诱导培养13 h后,提取细胞总RNA,用水牛IFN-γ基因特异性引物通过RT-PCR扩增水牛IFN-γ成熟肽编码区cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体中。RT-PCR产物电泳可见约457 bp大小目的片段。经过限制性酶切分析,测序证实克隆得到的基因序列正确。将IFN-γ成熟肽编码区基因片段切下亚克隆到表达载体pET-32a+中,构建成重组表达质粒pET-mIFN-γ。PCR、双酶切电泳和序列测定结果均证实已插入约457 bp的IFN-γ基因片段。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,水牛IFN-γ基因在大肠杆菌中获得了高效的表达,融合蛋白的分子量为35 ku,表达量占菌体总蛋白的43.6%。
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关键词
沼泽型水牛
Γ-干扰素
基因克隆
原核表达
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Keywords
swamp type water buffalo
interferon-γ
gene cloning
prokaryotic expression
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分类号
S852.4
[农业科学—基础兽医学]
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