猪SLA-1体外表达及其结合多肽的筛选

本文将猪群中表达频率较高的SLA-1*1301胞外区及SLA-β2 m基因序列片段合成后连接到pET21a(+)原核表达载体上,构建出pET21a-SLA-1*1301和pET21a-SLA-β2m重组表达质粒。通过IPTG诱导大肠杆菌刺激产生大量的相关目标产物,再将所获得的质量比较高的SLA-1*1301胞外区表达蛋白、SLA-β2m蛋白分别与6条软件预测的口蹄疫细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位多肽进行蛋白复性和纯化,通过蛋白纯化仪分析,结果显示,其中4条预测口蹄疫CTL表位多肽可以形成稳定的SLA I-β2m-表位多肽复合体,表明该4条多肽可能为口蹄疫的CTL表位肽,对将来开发细胞免疫疫苗和相关免疫增强剂有重要的指导意义。

猪肾上皮细胞SLA-1基因的克隆及分子结构特征分析

【目的】利用猪肾上皮细胞15(PK15)建立系统的猪白细胞抗原1(SLA-1)抗原表位筛选系统。【方法】提取PK15细胞总RNA,设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增SLA-1基因(SLA-1*PK15),将该基因克隆到pMD18-T载体上,并进行双酶切及测序鉴定;利用DNAMAN 5.2.2、Mega 5.0、Multalin及同源建模进行系统进化树、二级结构、三级结构分析。【结果】RT-PCR扩增获得约1400 bp条带,质粒提取和酶切鉴定结果表明SLA-1成功插入pMD18-T载体;测序结果证实该基因共1419 bp,其中2-1087 bp为编码区,共编码361个氨基酸,信号肽为21个氨基酸,符合SLA-1基因特征。进化树分析结果显示,SLA-1*PK15与SLA-1*wxd(中国梅山猪)和SLA-1*0401(中国巴马小型猪)进化关系最近,而与SLA-1*lr02(丹麦长白猪)及SLA-1*0509(中国西藏野猪)进化关系较远。胞外区氨基酸比较分析表明,PK15细胞SLA-1基因与其他SLA-1基因胞外区主要变异位点存在于α1区和α2区,α3区的变异位点较少,无特征性氨基酸变异位点。PK15细胞SLA-1蛋白的二级结构主要以α-螺旋和β-折叠为主。同源建模结果显示,SLA-1蛋白具有SLA classⅠ典型的三级结构,α1区和α2区构成抗原多肽结合区。【结论】SLA-1基因稳定存在于PK15细胞,PK15细胞具有作为SLA-1抗原表位筛选系统的潜在应用价值。