北京郊区猪戊型肝炎流行初步调查

用间接ELISA试剂盒对北京市郊区所采集的174份猪血清样品进行了抗体检测,结果显示,其抗体总阳性率达62.1%。针对戊型肝炎病毒(HEV)ORF2/ORF3重叠区设计了简并引物,采用巢式RT-PCR对随即采取的少量猪粪便样品进行了抗原检测。结果表明,部分粪便样品中存在HEV。

戊型肝炎病毒IgM抗体阳性患者系列血清3种生物标志物结果分析

目的分析戊型肝炎病毒(HEV)IgM抗体阳性患者的入院时、住院中和出院时的系列血清中3种生物标志物的变化情况及其诊断意义。方法收集临床常规检测的HEV IgM抗体阳性患者的入院时、住院中和出院时的血清,用酶联免疫(EIA)试剂检测HEV IgG抗体和IgM抗体,用实时荧光PCR方法检测核酸,分析其变化情况。结果在25例HEV IgM抗体阳性患者系列血清中,HEV IgM抗体为4例高值无明显变化、15例高值明显下降变化、1例明显升高变化、5例低值无明显变化,HEV IgG抗体为3例高值无明显变化、15例高值明显升高变化、4例高值下降后维持高值、1例低值转为阴性、2例始终阴性,HEV RNA为入院第1天22例(88%)阳性、入院后1周15例(62.5%)阳性、入院后2周1例(5.6%)阳性。结论戊型肝炎患者发病过程中,系列血清HEV IgG抗体和IgM抗体及HEV RNA联合检测有助于戊型肝炎的明确诊断。

戊型肝炎病毒TaqManReal—timeRT—PCR法的建立及应用

目的建立灵敏、特异、稳定的戊型肝炎病毒（HEV）TaqManReal—timePCR检测方法。方法根据GenBank中的HEV相关序列，选取HEV基因组ORF2的保守区域设计合成特异性引物和探针，建立TaqManHEVReal—timeRT—PCR检测体系，评价体系的特异性、敏感度和稳定性，并应用于临床样本的检测。结果本研究建立的HEVReal—timeRT—PCR检测体系最低检测极限达到10个拷贝／反应，重复性实验c￡值的变异系数（CV）最大为1．53％，并且该体系能特异检测出戊肝临床样本中的HEV，其拷贝数从1．87×104拷贝／ml到8．12×106拷贝／ml不等。结论成功建立特异性强、灵敏度高的HEVReal—timeRT-PCR检测方法，应用于临床样本检测时取得了良好效果，为HEV分子病原学诊断打下基础。

河南地区不同月龄猪戊型肝炎病毒感染情况调查

目的调查河南地区不同月龄猪戊型肝炎病毒（HEV）感染情况。方法从河南五个地区共采集623份猪血清，其中3月龄以下血清113份，3月龄以上血清510份，酶联免疫诊断试剂盒分别检测HEV抗原和抗体。对抗原阳性者用套式RT-PCR检测HEV核酸，并对核酸阳性者进行克隆和序列分析。结果3月以下组和3月以上组的抗体阳性率分别为90．27％和92．55％，差异无统计学；而两组的抗原阳性率分别为15．93％和5．69％，差异有统计学意义（P〈0．001）。各地区间的抗原和抗体阳性率存在明显的统计学差异。在47份抗原阳性样本中，检出5例为HEV核酸阳性，序列分析显示4例为HEV4型，1例为HEV1型。结论河南地区猪的HEV感染率较高，而且不同地区存在明显差异。

实时荧光逆转录PCR检测戊型肝炎病毒RNA的临床应用

目的探讨实时荧光逆转录（RT）-PCR方法检测急性戊型肝炎患者血清戊型肝炎病毒（HEV）RNA的意义。方法采用实时荧光RT—PCR方法，对HEVORF3基因保守区进行扩增和检测。收集北京佑安医院住院和门诊434例急性戊型肝炎患者血清；甲型肝炎患者40例、乙型肝炎患者100例、健康献血员110名作为对照组；提取HEVRNA进行荧光RT—PCR检测。结果434例急性戊型肝炎患者血清中232例（53．5％）为HEVRNA阳性。对照组血清HEVRNA检测均为阴性。与血清抗-HEVIgM检测比较，434例急性戊型肝炎患者HEVRNA检测的总符合率为67．1％，两种检测方法差异有统计学意义（Kappa=0．308，P=0．000）。5例患者的首份血清检测为HEVRNA阳性，但抗．HEVIgM为阴性，系列追踪检测，相继出现抗-HEVIgM阳性。急性戊型肝炎患者的血清HEVRNA的检出多在发病的2～10d内。结论荧光lit—PCR方法有较高的特异性，应用实时荧光RT—PCR方法能对Ⅰ和Ⅳ戊型肝炎病毒感染的患者血清中的RNA进行定性检测。在临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平。

河南省猪戊型肝炎病毒HN-JY40的全基因组序列测定及分析

本文旨在测定猪戊型肝炎病毒HN-JY40株的全基因组序列,并对其序列特征和进化关系进行分析。设计8对引物,利用RT-PCR、3′RACE和5′RACE技术得到了戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）河南分离株HNJY40的近似全基因组序列,命名为＂HN-JY40＂;用Expasy、Megalign、Clustal X和MEGA 4等生物学软件进行序列分析、同源比对和进化树的构建。测序得到的HN-JY40序列去除polyA后全长7 223bp,5′UTR有9个碱基,3′UTR全长69bp。ORF1（5 124bp）编码1 707个氨基酸,ORF2（2 025bp）编码674个氨基酸,ORF3（345bp）编码114个氨基酸。全基因组相似性分析发现,HN-JY40为典型的基因4型病毒,且属于一个新亚型。猪HN-JY40ORF1的部分核苷酸（153~432bp）与人源HK104-2004同源性高达到96%,为揭示戊型肝炎的跨种传播提供了新的分子生物学依据。

马鞍山地区不同人群戊型肝炎病毒基因型初步分析

目的了解马鞍山地区不同人群中戊型肝炎病毒(HEV)流行株基因型的分布状况。方法对来自一般人群、有偿献血人群、吸毒人群的血清标本进行HEV IgG、IgM抗体检测并将HEV IgM阳性的血清标本进行RT-PCR扩增,PCR阳性标本进行基因测序及序列分析。结果 HEV PCR扩增成功16份,其中HEV IgM抗体阳性病人和正常人群中10份标本阳性,吸毒人群和有偿献血人群中各3份标本PCR阳性,测序结果显示均为HEVⅣ型毒株感染。结论马鞍山地区不同人群中HEV流行株均为基因Ⅳ型,但不同人群内部的流行株存在较大变异。

猪粪便中戊肝病毒实时荧光RT-PCR定性检测方法的建立及其分子流行病学特征

目的建立以TaqMan探针为基础的戊肝病毒(HEV)实时荧光RT-PCR检测方法和构建系统发育树,对戊肝病毒进行基因分型,检测中国部分省市猪场的猪粪便样本HEV污染水平。方法参照GenBank HEV基因型序列,针对HEV保守区设计引物和探针,优化反应体系,建立实时荧光RT-PCR和巢式RT-PCR检测体系。结果建立的HEV实时荧光RT-PCR检测方法的灵敏度为19.9拷贝/μL,扩增效率92.9%~109.1%,与札如病毒(Sa)、诺如病毒(Nov)、甲肝病毒(HAV)均不发生交叉反应。荧光RT-PCR检测猪粪便样本342份,其中HEV阳性样本210份,阳性率61.4%,育肥前阳性率56.6%,育肥后阳性率66.9%,育肥前后样本阳性率差异具有统计学意义(χ~2=24.8,P<0.05);经基因分型鉴定体系测定阳性毒株基因型均为HEV-4型,且存在4b、4d、4h三种基因亚型。结论中国部分省市猪场中HEV感染普遍,基因型均为HEV-4型,各省市猪场感染率和基因亚型存在差异。