血清胃泌素17、胃蛋白酶原、γ-突触核蛋白检测在老年消化道早癌、癌前病变诊断中的应用

目的分析血清胃泌素17(G-17)、胃蛋白酶原I(PG I)、胃蛋白酶原II(PG II)、γ-突触核蛋白(SNCG)检测在老年消化道早癌、癌前病变诊断中的应用价值。方法选取我院198例老年早期胃癌及癌前病变患者,均经内窥镜检查与病理证实,分为早癌组与癌前病变组,并取同期50例老年胃镜良性病变者为胃镜良性病变组,检测其血清G-17、PG I、PG II及SNCG水平,进行相关性分析,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析G-17、PG I/PG II联合SNCG对早期胃癌及癌前病变诊断效能。结果早癌组血清G-17、SNCG水平显著高于其余两组,且癌前病变组高于胃镜良性病变组(P<0.05);早癌组血清PG I水平、PG I/PG II显著低于其余两组,且癌前病变组显著低于胃镜良性病变组(P<0.05);PG I与G-17、SNCG呈负相关(P<0.05),G-17与SNCG呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析显示,四项联合诊断敏感度为93.4%、特异度为96.0%,曲线下面积(AUC)为0.987,大于G-17、PG I、PG I/PG II及SNCG单独诊断(0.960、0.824、0.810、0.961)。结论血清G-17、PG I、PG I/PG II联合SNCG检测对老年早期胃癌及癌前病变具有较高诊断效能。

口腔颌面部鳞癌SNCG、MMP-9的表达及其临床意义

目的：探讨神经突触核蛋白-γ（synuclein gamma，SNCG）及基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）在鳞状细胞癌及癌旁组织的表达，分析其与肿瘤的临床及病理特征相关性。方法：采用免疫组化 EnVision 二步法检测150例鳞状细胞癌及癌旁组织中 SNCG 及 MMP-9的表达。结果：口腔颌面部鳞癌组织中的 SNCG 及 MMP-9的阳性率分别为78．0％（117/150）及68．68％（103/150），而癌旁组织中 SNCG及 MMP-9的阳性率分别为8．0％（11/150）及14．0％（21/150），均有显著性差异（P＜0．001）。低分化、中分化肿瘤的 SNCG及 MMP-9的表达阳性率显著高于高分化肿瘤中的阳性率（P＜0．001），然而低分化与中分化肿瘤之间 SNCG及 MMP-9的表达阳性率无显著性差异（P＞0．05）。肿瘤分期分析结果显示，Ⅲ～Ⅳ期SNCG及 MMP-9的表达阳性率显著高于Ⅰ～Ⅱ期，有显著性差异（SNCG：χ^2＝4．20，P＝0．041；MMP-9：χ^2＝26．66，P＝0．000）。转移的肿瘤组织中的SNCG及MMP-9的表达阳性率分别为90．77％和93．85％，高于其在无转移的肿瘤组织表达阳性率，有显著性差异（SNCG：χ^2＝10．09，P＝0．001；MMP-9：χ^2＝33．80，P＝0．000）结论：SNCG、MMP-9在与口腔颌面部鳞癌中呈现高表达，与肿瘤的病理与临床分级、分期呈正相关，提示检测口腔颌面部鳞癌组织中 SNCG及 MMP-9的表达可以为肿瘤的病情进展和预后判断提供依据。

神经核蛋白γ(γ-syn)在直肠癌组织中表达的研究

目的研究直肠癌组织中γ-syn蛋白的表达情况。方法免疫组织化学法检测86例直肠癌组织γ-syn蛋白的表达。同时收集临床资料,包括年龄、性别、肿瘤距肛门距离、术前血清CEA水平、肿瘤分化程度、有无淋巴结转移。结果 86例直肠癌组织中都有γ-syn蛋白的表达(86/86)。γ-syn蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤距肛门距离、术前血清CEA水平之间无相关性;与直肠癌的组织分化程度、有无淋巴结转移无关。结论直肠癌组织高表达γ-syn蛋白;γ-syn蛋白是直肠癌普遍存在表达的蛋白,可以作为直肠癌的生物标记。

组织因子途径抑制物-2和γ-神经突触核蛋白在食管癌中的表达及其与肿瘤细胞浸润、转移和凋亡之间的关系

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)和γ-神经突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)在食管癌组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移和细胞凋亡之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测82例食管癌组织及20例相应癌旁不典型增生组织和54例相应癌旁正常食管组织中TFPI-2、SNCG和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase-9,MMP-9)的表达,应用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:TFPI-2和SNCG在食管癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管组织中的阳性表达率分别为30.4%、60.0%、87.0%和63.4%、30.0%、3.7%,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。TFPI-2和SNCG的表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度、TNM分期和分化程度密切相关(P<0.01),但与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位和肿瘤大体分型无关(P>0.05)。食管癌组织中TFPI-2与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.636,P=0.000),而SNCG与MMP-9的表达呈正相关(r=0.393,P=0.000)。TFPI-2和SNCG的表达与AI有关(P<0.05)。结论:TFPI-2可能通过抑制MMP-9的表达诱导细胞凋亡,抑制食管癌细胞的生长和转移,而SNCG可能在此过程中起着相反的作用,TFPI-2和SNCG有望成为有效的肿瘤标志物和肿瘤基因治疗的新靶点。

γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

目的对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化。方法根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白。结果γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白。经过纯化,得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能,探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础。

葛根素联合γ突触核蛋白siRNA对膀胱癌细胞生长的抑制作用

目的:研究葛根素联合γ突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)siRNA对膀胱癌细胞生长的影响。方法:用0,100,200,400,800,1 600μg/mL的葛根素培养液培养膀胱癌细胞,以MTT法检测细胞增殖变化并计算半数抑制浓度。在膀胱癌细胞中转染SNCG siRNA重组慢病毒和阴性对照慢病毒,以实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western印迹法检测干扰效果。用半数抑制浓度的葛根素处理稳定转染SNCG siRNA重组慢病毒的膀胱癌细胞,MTT法检测细胞增殖变化,平板克隆试验检测细胞克隆形成能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western印迹法检测细胞中活化的caspase-3(C-caspase-3)、活化的caspase-9(Ccaspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果:100,200,400,800,1600μg/mL的葛根素处理后的膀胱癌细胞存活率均低于0μg/mL处理组(P<0.05),其半数抑制浓度为(587.26±61.45)μg/mL。转染SNCGsiRNA重组慢病毒的膀胱癌细胞中SNCG表达水平低于转染阴性对照重组慢病毒的膀胱癌细胞(P<0.05)。下调SNCG或葛根素处理后的膀胱癌细胞增殖能力和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-caspase-3,C-caspase-9,Bax蛋白水平也升高。与下调SNCG或葛根素处理后的膀胱癌细胞比较,葛根素处理下调SNCG的膀胱癌细胞的增殖和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-caspase-3,C-caspase-9,Bax蛋白表达水平也升高。结论:葛根素联合SNCG siRNA能够抑制膀胱癌细胞生长、诱导膀胱癌细胞凋亡。

SNCG、BMP-2、MMP-9在口腔颌面部鳞癌中的表达情况及相关性

目的探讨神经突触核蛋白-γ(SNCG)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在口腔颌面部鳞癌中的表达情况及相关性。方法选取2010年1月至2015年12月存档的口腔颌面部鳞癌组织蜡块标本67例,以及相应的癌旁组织67例和41例正常组织作为对照组。采用免疫组化En Vision二步法检测SNCG、BMP-2、MMP-9在三组的表达,并分析SNCG、BMP-2、MMP-9三者之间的相关性。结果 SNCG和MMP-9在肿瘤组织中阳性率显著高于在正常组织和癌旁组织(P<0.05),而SNCG和MMP-9在癌旁组织与正常组织中的阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP-2在肿瘤组织和癌旁组织中的阳性率显著高于正常组织(P<0.05),但BMP-2在肿瘤组织和癌旁组织中的阳性率比较后差异无统计学意义(P>0.05)。BMP-2、MMP-9中在病理分级中的阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),SNCG在高分化组的阳性表达率显著低于在中、低分化组(P<0.05),而中、低分化组中SNCG的表达差异无统计学意义(P>0.05)。除BMP-2外,SNCG、MMP-9均在已发生淋巴结转移的组织中的阳性表达率显著高于在未发生淋巴结转移的组织(P<0.05)。SNCG、BMP-2、MMP-9三者的表达均呈正相关(P<0.05)。结论 SNCG、BMP-2、MMP-9在口腔颌面部鳞癌中呈高表达,且三者呈显著正相关,提示三者可以作为检测口腔颌面部鳞癌的生物学指标。

慢病毒介导白介素-1β siRNA对脊髓钝挫伤大鼠运动功能的影响

目的:观察白介素-1β(IL-1β)小干扰RNA(si RNA)对脊髓钝挫伤(spinal cord contusion,SCC)大鼠运动功能的影响,并探讨其相关机制。方法:98只雌性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、单纯SCC组(SCC组)、空载体组(Vector组)和慢病毒干扰组(IL-1βSH组)。IL-1βSH组和空载体组术前48h在拟损伤脊髓节段局部注射IL-1βsi RNA或空载体。Sham组大鼠只剥离椎板不实施SCC,其余3组大鼠均造成T10SCC。每组各取大鼠5只,于术前当天以及术后1d、3d、5d、7d、14d采用Basso Beattie&Bresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢运功功能。Sham组术后28d处死大鼠,取T10段脊髓,用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(qRT-PCR)检测IL-1β和γ-突触核蛋白(SNCG)mRNA相对表达水平。SCC组于术后6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d取损伤段脊髓,检测IL-β和SNCG mRNA相对表达水平。Vector组和IL-1βSH组在术后7d取损伤段脊髓检测SNCG mRNA相对表达水平;在术后3d、7d、28d行心脏灌注、固定损伤脊髓,用免疫组织化学染色技术观察SNCG的免疫阳性细胞计数,并测定平均积分光密度(IOD)值。应用GeneMANIA分析IL-1β和SNCG的理论关系。结果:Sham组各时间点BBB评分均为21分,SCC后,SCC组评分各时间点均显著低于Sham组(P<0.05),IL-1βSH组评分在3d、5d、7d、14d时均显著高于Vector组(P<0.05)。SCC组术后6h、12h、7d时IL-1βmRNA表达量较Sham组显著性上调(P<0.05),SNCG mRNA表达量较Sham组显著性下调(P<0.05)。术后7d,IL-1βSH组SNCG mRNA表达水平显著高于Vector组(P<0.05)。IL-1βSH组损伤脊髓前角SNCG免疫阳性细胞数和IOD值在术后3d、7d、28d均优于Vector组,差异具有统计学意义(P<0.05)。GeneMANIA分析发现IL-1β和SNCG通过Cfd存在亚细胞定位关系。结论:IL-1βsi RNA可改善SCC大鼠后肢运动功能,上调SNCG蛋白和mRNA的表达,这可能与调节神经元可塑性、抑制线粒体凋亡途径有关。

结直肠癌肝转移γ-神经突触核蛋白高表达的临床意义

目的:探讨结直肠癌(CRC)肝转移患者γ-神经突触核蛋白(SNCG)高表达的临床意义。方法:根据术后癌细胞转移情况将219例患者分为肝转移组114例和无肝转移组105例。采用免疫组织化学法,分析SNCG表达水平与CRC患者术后肝转移的关系及其与术后无病生存时间和总生存时间的关系。结果:SNCG阳性率在肝转移组为71.96%,无肝转移组为28.04%。Logistic多因素分析显示,SNCG表达是判断CRC术后是否有肝转移的独立因素(P<0.01)。SNCG阳性表达与阴性表达的肝转移患者术后无病生存时间分别为(48.70±5.40)个月和(78.75±4.23)个月,总生存时间分别为(51.10±5.20)个月和(80.29±4.12)个月,SNCG阴性患者的生存时间均明显长于SNCG阳性患者(P<0.01)。结论:SNCG表达水平越高,CRC患者术后肝转移的风险越高,无病生存期越短。CRC组织中SNCG高表达可以作为预测肝转移的指标,值得临床推广。

γ突触核蛋白在前列腺癌恶性进展中的作用

目的观察γ-突触核蛋白（SNCG）在前列腺癌的表达及恶性进展中的作用。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot检测SNCG在前列腺细胞株的表达。组织免疫组织化学检测正常前列腺组织、前列腺炎、良性前列腺增生、高级别前列腺上皮内瘤及激素依赖性前列腺癌组织的SNCG表达。结果SNCG在激素依赖性前列腺癌细胞株CWR22、LNCaP的表达明显高于前列腺上皮细胞株RWPE—γ。SNCG在10例正常前列腺组织（1／10）、10例前列腺炎组织（0／10）及10例良性前列腺增生组织（2／10）几乎不表达；在高级别前列腺上皮内瘤（HGPIN）中低表达（3／10）；在122例激素依赖性前列腺癌组织有74例阳性表达。SNCG在激素依赖性前列腺癌中的阳性率为60．66％（74／122），其高表达与前列腺癌中高危因素[前列腺特异抗原（PSA）≥10μg/L、Gleason评分≥7、临床分期≥Tb组]及淋巴结转移相关。结论SNCG在激素依赖性前列腺癌中的异常表达，可能参与前列腺癌恶性进展。