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脑栓塞患者的组织纤维蛋白酶原激活因子(t-PA)基因多态性分析 被引量:3
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作者 叶文静 魏然 +2 位作者 任道凌 杨明峰 夏作理 《泰山医学院学报》 CAS 2003年第4期331-332,共2页
目的 研究t PA基因h( 8th)内含子的Alu重复序列插入 缺失 (I D)多态性在脑栓塞患者中的分布。方法 提取 16例患者口腔黏膜脱落细胞DNA ,应用PCR方法扩增t PA基因h( 8th)内含子的Alu重复序列 ,记录Alu插入 缺失 (I D)结果。结果  1... 目的 研究t PA基因h( 8th)内含子的Alu重复序列插入 缺失 (I D)多态性在脑栓塞患者中的分布。方法 提取 16例患者口腔黏膜脱落细胞DNA ,应用PCR方法扩增t PA基因h( 8th)内含子的Alu重复序列 ,记录Alu插入 缺失 (I D)结果。结果  16例患者中插入纯和 6例 ,缺失纯和 6例 ,插入 缺失 4例 ;插入纯和 (I I)率是缺失纯和 (D D)的 1 0倍 ;(I I)和 (I D)的几率之和约是 (D D)的 1 6 7倍。结论 脑栓塞患者t PA基因h( 8th)内含子的Alu重复序列插入 缺失 (I D)与大样本山东人t PA Alu插入 缺失率不同。 展开更多
关键词 t-pa AIu 基因多态性 脑栓塞患者
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t-PA cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达 被引量:1
2
作者 彭鲁英 涂宣林 +3 位作者 朱慧 张艳玲 陈幼妹 宋后燕 《上海医科大学学报》 CSCD 1996年第3期163-165,共3页
建立稳定表达人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)的细胞株。将t-pAcDNA连接在真核表达载体pcDNA3的HindⅢ位点,构建成重组质粒pcDNA3tP... 建立稳定表达人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)的细胞株。将t-pAcDNA连接在真核表达载体pcDNA3的HindⅢ位点,构建成重组质粒pcDNA3tPA,用磷酸钙介导的贴壁细胞转染法导入哺乳动物中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中,G418筛选培养后形成阳性克隆。结果:培养液中重组t-pA(Recombinantt-pA,rt-pA)活性>6000IU/106细胞d-1.Northern杂交证实t-PAcDNA基因的转录。高表达细胞连续传代10次后,培液中rt-pA活性未见明显变化。结论:转染t-PAcDNA基因的CHO细胞已形成稳定的工程细胞。 展开更多
关键词 t-pa cDNAADLD 卵巢细胞 稳定表达 CHO
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加减抵当汤对胰岛素抵抗大鼠血浆t-PA PAI-1水平及脂肪PAI-1基因表达的影响 被引量:1
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作者 钱俊文 柴可夫 沈祥峰 《中华中医药学刊》 CAS 2009年第12期2558-2561,共4页
目的:探讨加减抵当汤对IR大鼠血浆t-PA、PAI-1水平及脂肪PAI-1mRNA表达的影响。方法:造模大鼠随机分成正常组、模型组、加减抵当汤高、中、低剂量组、文迪雅组,用发色底物法检测t-PA、PAI-1水平;RT-PCR方法检测加减抵当汤对IR大鼠脂肪PA... 目的:探讨加减抵当汤对IR大鼠血浆t-PA、PAI-1水平及脂肪PAI-1mRNA表达的影响。方法:造模大鼠随机分成正常组、模型组、加减抵当汤高、中、低剂量组、文迪雅组,用发色底物法检测t-PA、PAI-1水平;RT-PCR方法检测加减抵当汤对IR大鼠脂肪PAI-1 mRNA表达的影响。结果:加减抵当汤高、中剂量组能明显升高IR大鼠血浆t-PA水平,降低PAI-l水平(P<0.05和P<0.01),下调PAI-1mRNA的表达。结论:加减抵当汤能升高血浆t-PA,降低PAI-1;并能下调脂肪PAI-1mRNA的表达,可能是其改善IR的机理之一。 展开更多
关键词 抵当汤 胰岛素抵抗 组织纤溶酶原激活物、纤溶酶原激活物抑制剂-1 基因表达
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纳米t-PA基因涂层支架对犬冠状动脉损伤后血栓形成和再狭窄的影响 被引量:1
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作者 李军 章玲 +4 位作者 梁新剑 周阳泱 曾碧媚 芦爱霞 赵洪磊 《山东医药》 CAS 2019年第34期46-48,52,共4页
目的探讨纳米t-PA基因载体涂层支架对犬冠状动脉血栓形成和支架再狭窄的影响。方法选取健康雄性家犬22只制作冠状动脉内膜损伤模型后,立即随机分为观察组12只和对照组10只,分别置入载纳米t-PA基因涂层支架和裸金属支架。术后动物均不用... 目的探讨纳米t-PA基因载体涂层支架对犬冠状动脉血栓形成和支架再狭窄的影响。方法选取健康雄性家犬22只制作冠状动脉内膜损伤模型后,立即随机分为观察组12只和对照组10只,分别置入载纳米t-PA基因涂层支架和裸金属支架。术后动物均不用抗凝治疗。两组分别于术前及术后1、2、4、8周取血检测t-PA和D-二聚体含量,术后8周行冠状动脉造影和血管内超声检查;超声检查后处死动物,苏木素-伊红染色法染色显微镜下观察局部血管腔内血栓形成、支架内血栓形成和血管壁病理改变。结果两组术前血液t-PA、D-二聚体水平比较差异无统计学意义(P均>0.05);观察组置入支架后1、2、4、8周t-PA、D-二聚体水平均高于对照组(P均<0.05)。支架置入术后8周观察组支架管腔丢失、内膜增生面积、内膜增生容积均优于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。术后8周肉眼及显微镜下观察,对照组支架冠状动脉内膜明显不规则增厚,内膜中增生细胞不规则,排列紊乱,细胞间基质堆积多,见散在炎性细胞。与对照组比较,观察组支架冠状动脉内膜明显变薄,内膜细胞多为长梭形,PCNA阳性细胞少;对照组血栓形成率100%,观察组血栓形成率16.67%,两组血管支架内血栓形成率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论纳米t-PA基因载体涂层支架可有效携带和释放药物,抑制术后冠状动脉支架内再狭窄发生。 展开更多
关键词 支架置入术 冠状动脉 血栓形成 纳米t-pa基因载体 涂层支架
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t-PAcDNA克隆、腺病毒载体构建及在小血管吻合口中的表达
5
作者 张杏泉 王少东 +2 位作者 范清宇 裘秀春 张殿中 《医学研究生学报》 CAS 2003年第10期743-745,748,共4页
目的 :探讨组织型纤溶酶原激活物 (t PA)基因疗法防治血管吻合口血栓栓塞的效果。 方法 :①采用RT PCR从Bowes黑色素瘤细胞中获得t PAcDNA。②将含有t PA基因的重组质粒 pAdCMVt PA与缺陷型腺病毒大框架pJM17共转染病毒包装细胞 (2 93... 目的 :探讨组织型纤溶酶原激活物 (t PA)基因疗法防治血管吻合口血栓栓塞的效果。 方法 :①采用RT PCR从Bowes黑色素瘤细胞中获得t PAcDNA。②将含有t PA基因的重组质粒 pAdCMVt PA与缺陷型腺病毒大框架pJM17共转染病毒包装细胞 (2 93细胞 ) ,获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒AdCMVt PA。③实验动物随机分为对照组和治疗组 ,治疗组吻合口注射AdCMVt PA溶液 ,对照组注射AdCMV(不含t PA的空载体 )。提取吻合口组织的总RNA行RT PCR ,应用发色底物法检测吻合口组织的纤溶酶活力。 结果 :①成功地克隆了t PAcDNA并构建腺病毒载体。②治疗组RT PCR在 2 .0kb前面约 1.7kb处有一条带 ,对照组则没有。治疗组术后第 1、2、3、4、5、6、7、10和 13天均可检测到纤溶酶活力 ,但第 3天活力最高。对照组未检测到纤溶酶活力。 结论 :克隆入腺病毒载体的t PA基因可在吻合口组织中表达出有生物学活性的t PA ,可有效地抑制吻合口血栓形成 。 展开更多
关键词 组织型纤溶酶原激活物 腺病毒载体 基因治疗 血栓栓塞
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融合启动子调控下的t-PA cDNA乳腺定位表达
6
作者 李银聚 程相朝 +3 位作者 赖良学 赵君 扈荣良 殷震 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2001年第5期23-26,共4页
由牛 β- Casein启动子与大鼠 WAP启动子融合构建了 t- PA c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-β△ WAP- PA,以研究 t- PA乳腺定位表达的调控。结果表明 ,将表达载体 p SVL- βb- PA,p SVL- WAP- PA及 p SVL-β△ WAP- PA分别直接注入怀孕的... 由牛 β- Casein启动子与大鼠 WAP启动子融合构建了 t- PA c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-β△ WAP- PA,以研究 t- PA乳腺定位表达的调控。结果表明 ,将表达载体 p SVL- βb- PA,p SVL- WAP- PA及 p SVL-β△ WAP- PA分别直接注入怀孕的家兔乳腺管中 ,溶圈试验显示 3种表达载体均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 4天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 390 ,430和 6 70 ng/ m L。证明 0 .6 kb的牛 β- Casein上游调控序列具有一定的定位表达调控能力。融合启动子较单纯的 β- Casein或 WAP启动子调控下的 t- PA c 展开更多
关键词 β-Casein基因 乳清酸蛋白基因 t-pa CDNA 乳腺定位表达 融合启动子
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t-PA cDNA基因在AGZY83-a细胞系的稳定表达
7
作者 赵永波 张莹 +3 位作者 王枫 关振中 李钰 张贵寅 《神经疾病与精神卫生》 2001年第4期14-18,共5页
目的 建立稳定表达人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)的细胞系。方法将t-PA的反义DNA(t-PA cDNA)连接在真核表达载体pcDNA3.1(+)的Kpn I和Xba I酶切位点上,构建成重组质粒pcDNA3.1(+)t PA。用FuGENE6介... 目的 建立稳定表达人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)的细胞系。方法将t-PA的反义DNA(t-PA cDNA)连接在真核表达载体pcDNA3.1(+)的Kpn I和Xba I酶切位点上,构建成重组质粒pcDNA3.1(+)t PA。用FuGENE6介导法转入人类AGZY83-a细胞系中,经G418筛选形成阳性克隆,接种于培养基中培养,检测表达产物。结果 各种酶切图谱及筛选后单克隆形成,证明tPA cDNA已正确组装在载体上,培养液中rt-PA的含量高于对照组且可持续12周,表明pcDNA3.1(+)tPA已可在AGZY83-a细胞中得到表达。结论 转染tPA cDNA的AGZY83-a细胞已可稳定表达人类tPA,为血栓性疾病的基因治疗奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 Rt-pa 稳定表达 细胞系 PCDNA3 对照组 反义DNA 血栓性疾病 证明 结论 构建
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人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体的研究现状及进展 被引量:1
8
作者 江成英 郭宏文 冮洁 《农产品加工(下)》 2008年第7期141-143,146,共4页
人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是一种高效特异的溶血栓药物,但天然的t-PA存在半衰期短,有潜在的引起颅内出血的危险等缺点,因而限制了它的广泛应用。世界各国的科研人员利用了分子设计和基因工程等技术,构建了一系列的t-PA突变体,旨在... 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是一种高效特异的溶血栓药物,但天然的t-PA存在半衰期短,有潜在的引起颅内出血的危险等缺点,因而限制了它的广泛应用。世界各国的科研人员利用了分子设计和基因工程等技术,构建了一系列的t-PA突变体,旨在提高对纤维蛋白的亲和力,延长半衰期,提高纤溶效率,减少颅内出血的危险。综述了t-PA的结构和功能、对t-PA结构的改造,以及一系列t-PA突变体的研究现状及进展情况。 展开更多
关键词 溶栓剂 基因工程 t-pa突变体 表达
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不同启动子调控下的t-PAcDNA乳腺定位表达
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作者 李银聚 赖良学 +2 位作者 赵君 扈荣良 殷震 《洛阳农业高等专科学校学报》 2001年第2期79-81,共3页
乳清酸蛋白 (WAP)和 β -酪蛋白 (β -Casein)是哺乳动物乳汁中的主要蛋白质 ,其基因 5′侧翼区常作为乳腺定位表达的调控序列。表达载体pSVL -WAP -tPA和pSVL - βb -tPA分别含 1.1kb的大鼠WAP启动子和 0 .6kb的牛β Casein启动子序列... 乳清酸蛋白 (WAP)和 β -酪蛋白 (β -Casein)是哺乳动物乳汁中的主要蛋白质 ,其基因 5′侧翼区常作为乳腺定位表达的调控序列。表达载体pSVL -WAP -tPA和pSVL - βb -tPA分别含 1.1kb的大鼠WAP启动子和 0 .6kb的牛β Casein启动子序列及t-PAcDNA。采用基因直接注射方法将 2种表达载体分别注入家兔乳腺中。溶圈试验结果显示 ,两种表达载体均能在兔乳腺细胞中得到表达 ,且以分娩后第 4天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 45 0ng·mL-1和390ng·mL-1。为进一步研究t-PA基因乳腺定位表达调控和建立t-PA乳腺生物反应器奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-酪蛋白基因 乳清酸蛋白基因 调控序列 t-pacDNA 定位表达 启动子 药用蛋白
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心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅱ.Pro-UK和t-pA基因的体外表达
10
作者 姚阿卿 孙双丹 +6 位作者 李岱宗 温进坤 王贵春 周爱儒 黄培堂 俞炜源 汤健 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1994年第S1期115-119,共5页
构建了带有人的全长Pro-UK或t-pA基因cDNA的逆转录病毒质粒pN2-CMV-UK或pN2-CMV-tPA。重组质粒转染包装细胞PA3l7后获得含假病毒的培养上清。用假病毒上清感染培养的血管平滑肌细胞(VsMC... 构建了带有人的全长Pro-UK或t-pA基因cDNA的逆转录病毒质粒pN2-CMV-UK或pN2-CMV-tPA。重组质粒转染包装细胞PA3l7后获得含假病毒的培养上清。用假病毒上清感染培养的血管平滑肌细胞(VsMC),经G4l8筛选得到抗性集落。Southernblot分析表明,Pro-UK或t-pA基因已整合到宿主细胞染色体。在转染的VSMC中,Pro-UK和t-pA的含量分别为265ng/107细胞/24小时和5.6ng/107细胞/24小时。溶圈法测定结果证明,Pro-UK基因导入细胞后可以表达出有生物活性的尿激酶原。 展开更多
关键词 Pro-UK或t-pa基因 基因治疗 血管平滑肌细胞
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山羊胎儿成纤维细胞转染人t-PA指形区缺失基因及其核移植研究 被引量:5
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作者 赵晓娥 安志兴 +4 位作者 马保华 武浩 高立功 刘新颖 张涌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第1期1-5,共5页
采用阳离子脂质体法将人t-PA指形区缺失基因乳腺特异性表达载体(pEBT)导入山羊胎儿成纤维细胞,以山羊胎儿成纤维细胞和转染的山羊胎儿成纤维细胞作供体,构建核移植胚,对其体外发育情况进行了研究,比较了2种供体细胞(山羊胎儿成纤维细胞... 采用阳离子脂质体法将人t-PA指形区缺失基因乳腺特异性表达载体(pEBT)导入山羊胎儿成纤维细胞,以山羊胎儿成纤维细胞和转染的山羊胎儿成纤维细胞作供体,构建核移植胚,对其体外发育情况进行了研究,比较了2种供体细胞(山羊胎儿成纤维细胞和转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞)及转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞饥饿处理与否对核移植胚胎体外发育的影响。结果表明,早期核移植胚有荧光蛋白(GFP)的表达;以山羊胎儿成纤维细胞作供体细胞时,核移植胚的桑葚胚率(50.3%)及囊胚率(16.0%)均高于以转人t-PA指形区缺失基因胎儿成纤维细胞为供体时的桑葚胚率(48.4%)和囊胚率(10.9%),但差异不显著(P>0.05);转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿处理后,其核移植胚胎的卵裂率(73.6%)与不饥饿时的卵裂率(73.9%)差异不显著;饥饿处理后核移植胚胎的桑葚胚率(48.5%)和囊胚率(11.2%)均高于不饥饿处理的桑葚胚率(39.2%)和囊胚率(9.2%),但差异不显著(P>0.05)。本研究成功地构建了转人t-PA指形区缺失基因的体细胞核移植胚胎,体外囊胚率为11.2%。 展开更多
关键词 山羊 血清饥饿 t-pa基因 转基因核移植胚 囊胚率
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抗PAI抑制作用的组织纤溶酶原激活剂在大肠杆菌中的表达 被引量:5
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作者 朱美财 占志 +3 位作者 王雅静 刘成刚 石缨 蔡庆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期565-569,共5页
目的: 构建t-PA活性不被PAI-1抑制的新一代t-PA突变体.方法: 根据t-PA的结构特点,去除t-PA分子中的指状区、表皮生长因子和Kringle1区,以含全长t-PA编码区序列的pUC18质粒为模板,经PCR扩增编码氨基酸1~3和176~527位的截短式t-PA DNA序... 目的: 构建t-PA活性不被PAI-1抑制的新一代t-PA突变体.方法: 根据t-PA的结构特点,去除t-PA分子中的指状区、表皮生长因子和Kringle1区,以含全长t-PA编码区序列的pUC18质粒为模板,经PCR扩增编码氨基酸1~3和176~527位的截短式t-PA DNA序列; 并将该t-PA分子中的PAI-1结合位点,即第373~384位核苷酸(AAG CAC AGG AGG)突变为(GCG GCC GCG GCG),相应的氨基酸KHRR则变为AAAA.结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,将其克隆于大肠杆菌表达载体中,并在大肠杆菌中得到高效表达.表达蛋白占总菌体蛋白的30%,以包涵体形式存在.经蛋白质变性、复性,得到有活性的t-PA突变体.t-PA突变体与PAI-1反应后t-PA的活性未受到抑制.结论:t-PA突变体可能是一种用于治疗心肌梗死和脑血栓等血栓性疾病的强效且剂量要求低的新型生物工程药物. 展开更多
关键词 组织型纤溶酶原激活剂 突变体 基因克隆 表达 纯化
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Development of nano t-PA gene coating stent and its preventive effect on dog coronary artery stent thrombosis
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作者 ZHAO Hong-lei HU wei +3 位作者 CHEN Qi-ying ZENG Fan-fang LONG Juan WANG Li-li 《South China Journal of Cardiology》 CAS 2017年第3期223-230,共8页
Background The regulation of t-PA gene is the essence and core of thrombosis. Therefore, the present study aimed to prepare nano t-PA gene coated stent and to observe its effect on coronary stent thrombosis in dogs.Me... Background The regulation of t-PA gene is the essence and core of thrombosis. Therefore, the present study aimed to prepare nano t-PA gene coated stent and to observe its effect on coronary stent thrombosis in dogs.Methods Highly expressed t-PA gene plasmid was constructed and albumin nano t-PA gene coating stent was prepared. The major branch vessels of dog coronary artery were pre-expanded with a 3.0 mm×20 balloon with 8-10 atmospheric pressure. 10 dogs of the control group were implanted with bare metal stent; while 12 dogs of the experimental group were implanted with nano t-PA gene coating stent. Both groups were not given anti-coagulation treatments. Blood samples were taken for t-PA and D-dimer before the operation, at 1,2,4 and 8 weeks after operation. Pathological analysis found thrombosis in the cavity and the hyperplasia of the intima. t-PA expression was detected by immunohistochemical indirectly, and the thickness of the intima of the section cross was directly measured by morphometry. Liver, heart, kidneys and lung were taken for pathological observation. Results All experimental animals survived at postoperative 8 weeks. Vascular stent thrombosis was seen in 10 cases of the control group with the thrombosis rate of 100%; while was seen in 2 cases among 12 cases of the experimental group with the thrombosis rate was 16.67%(P=0.00087). Immunohistochemical staining showed that the positive t-PA gene transfection of the experimental group was mainly distributed on the surface of hyperplasia intima, and vascular wall t-PA expression of the control group was negative. Positive t-PA signal was not found in the liver,heart, kidneys and lung. Conclusion Nano t-PA gene vector coating stent can effectively express t-PA in vascular wall and effectively prevents stent thrombosis. 展开更多
关键词 StENtING tHROMBOSIS nano t-pa gene vectors coating stent
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组织型纤溶酶原激活剂基因在小鼠体内的表达 被引量:4
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作者 李银聚 扈荣良 +3 位作者 赖良学 岳军明 金宁一 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期313-316,共4页
将组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)基因cDNA经多次亚克隆插入到真核表达载体pSVL的SV40启动子和pcDNA3的CMV启动子下游,构建了重组质粒pSVL-tPA和pcDNA3-tPA。分别将这2种重组质粒直接注射... 将组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)基因cDNA经多次亚克隆插入到真核表达载体pSVL的SV40启动子和pcDNA3的CMV启动子下游,构建了重组质粒pSVL-tPA和pcDNA3-tPA。分别将这2种重组质粒直接注射于小鼠骨骼肌,观察了t-PA基因在小鼠体内的表达情况。体外凝血试验结果显示,注射重组质粒DNA后,第5天凝血时间有所延长,第15~20天达到高峰,小鼠体外凝血时间平均延长7min左右,延长时间与基因注射量呈明显的正相关。 展开更多
关键词 小鼠 组织型 纤溶酶原激活剂 基因 表达
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组织型纤溶酶原激活物基因疗法防治血管吻合口血栓栓塞 被引量:7
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作者 张杏泉 王少东 +3 位作者 范清宇 殷剑宁 裘秀春 张殿中 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第4期356-358,共3页
目的 探讨防止血管吻合口血栓栓塞的新方法 ,了解组织型纤溶酶原激活物基因疗法防止吻合口血栓栓塞的效果 .方法  1将含有 t- PA基因的重组质粒 p Ad CMVt- PA与缺陷型腺病毒大框架 p JM1 7共转染病毒包装细胞 2 93细胞 ,获得有感染... 目的 探讨防止血管吻合口血栓栓塞的新方法 ,了解组织型纤溶酶原激活物基因疗法防止吻合口血栓栓塞的效果 .方法  1将含有 t- PA基因的重组质粒 p Ad CMVt- PA与缺陷型腺病毒大框架 p JM1 7共转染病毒包装细胞 2 93细胞 ,获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒 Ad CMVt- PA.2实验动物随机分为对照组和治疗组 ,均用 11- 0尼龙缝线行大鼠颈总动脉原位端端吻合 .治疗组吻合口注射 Ad CMVt- PA溶液 ,对照组注射 Ad CMV(不含 t- PA的空载体 ) .提取吻合口组织的总 RNA行 RT- PCR,应用发色底物法检测吻合口组织的纤溶酶活力 .结果 治疗组 RT- PCR在 2 .0 kb前面有一条带 ,对照组则没有 .治疗组术后第 2 ,3,5 ,7和 14日均可检测到纤溶酶活力 ,但第 3日活力最高 ,对照组未检测到纤溶酶活力 .结论 克隆入腺病毒载体的 t- PA基因可在吻合口组织中表达出有生物学活性的 t- PA,可能有效地抑制吻合口血栓形成 。 展开更多
关键词 组织型纤溶酶原激活物 血管吻合口 血栓栓塞 基因治疗
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人组织型纤溶酶原激活剂cDNA在鸡体内表达及其生物学活性检测 被引量:2
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作者 李银聚 吴庭才 +1 位作者 张春杰 程相朝 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期809-812,共4页
目的探讨人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)基因cDNA在鸡体内表达和在卵黄中的积淀规律,检测卵黄中t-PA的含量和生物学活性。方法将含人t-PA基因cDNA的真核表达质粒pcDNA3-t-PA注射于鸡的骨骼肌,收集不同时间的鸡蛋,West-ern blotting检测... 目的探讨人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)基因cDNA在鸡体内表达和在卵黄中的积淀规律,检测卵黄中t-PA的含量和生物学活性。方法将含人t-PA基因cDNA的真核表达质粒pcDNA3-t-PA注射于鸡的骨骼肌,收集不同时间的鸡蛋,West-ern blotting检测卵黄中t-PA表达状况,ELISA检测卵黄中t-PA的含量,琼脂糖平板溶圈法检测活性。结果注射表达质粒后1周,卵黄中即有t-PA积淀,第2~3周达到表达高峰,表达量可达6·1mg·L-1;所表达的t-PA具有激活组织纤溶酶的活性,注射后第2~3周,每1mL卵黄中t-PA的活性相当于37-45·8μg标准t-PA。结论t-PA基因能够在鸡骨骼肌细胞中表达并在卵黄中积淀,这一途径有望成为药物蛋白基因在鸡体内大量表达生产的优选方式。 展开更多
关键词 组织型纤溶酶原激活剂 基因 卵黄 表达
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组织型纤维酶原激活因子A1u重复序列基因多态性检测 被引量:1
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作者 魏然 叶文静 +4 位作者 徐涛 韩继举 任道凌 陈彬 夏作理 《中国血液流变学杂志》 CAS 2003年第3期222-224,共3页
研究山东地区汉族人组织型纤维酶原激活因子(TPA)-Alu重复序列基因多态性特点。提取外周血DNA,采用聚合酶链反应扩增t-PA基因h(8th)内含子的Alu重复序列,记录Alu插入/缺失(I/D)结果。166例山东人中TPA-Alu-I/I纯合子基因型50个;TPA-Alu-... 研究山东地区汉族人组织型纤维酶原激活因子(TPA)-Alu重复序列基因多态性特点。提取外周血DNA,采用聚合酶链反应扩增t-PA基因h(8th)内含子的Alu重复序列,记录Alu插入/缺失(I/D)结果。166例山东人中TPA-Alu-I/I纯合子基因型50个;TPA-Alu-D/D型46个;TPA-Alu-I/D杂合型70个。Alu序列的插入纯合(I/I)频率为30.12%,缺失纯合(D/D)频率为27.71%:(I/D)杂合型频率为42.17;经x^2检验男女之间无显著性差异(P>0.05)。受试者等位基因的频率符合Hardy-Wein-berg原则,结果有代表性。 展开更多
关键词 组织型纤维酶原激活因子 Alu重复序列 基因多态性 检测
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生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究
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作者 王晓利 李银聚 +3 位作者 廖成水 程相朝 张春杰 吴庭才 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期410-414,共5页
目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌... 目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和ELISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性。结果注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量最高,为10.4μg.mL-1,活性相当于50.2μg.mL-1标准品t-PA。结论研究表明,减毒沙门氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 apo—tpa基因 卵黄
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组织型纤溶酶原激活剂基因治疗预防血管成形术后再狭窄的实验研究
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作者 杨水祥 李天德 +2 位作者 张永斌 杨兴生 黄培堂 《解放军医学杂志》 CSCD 北大核心 1995年第5期346-349,共4页
用18条犬探讨了组织型纤溶酶原激活剂(t-pA)基因治疗预防经皮冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄的应用价值,其中对照组6条犬.12条在建立再狭窄模型时即用多孔球囊输注导管将t-pA基因逆转录病毒载体直接注入血管壁,... 用18条犬探讨了组织型纤溶酶原激活剂(t-pA)基因治疗预防经皮冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄的应用价值,其中对照组6条犬.12条在建立再狭窄模型时即用多孔球囊输注导管将t-pA基因逆转录病毒载体直接注入血管壁,经过30、60、90d不同时间的观察,结果表明,在DNA水平(原位杂交,Southernblot)、转录水平(mRNA打点杂交)及产物水平(免疫组化)等方面均证实了t-PA基因的存在和活性产物表达,而且发现这种活性t-pA使再狭窄犬模型的百分狭窄面积在3个月时减少了22.2%,有较好的预防再狭窄作用。 展开更多
关键词 基因治疗 狭窄 冠状动脉 成形术 纤溶酶厚激活剂
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人组织型纤溶酶原激活剂cDNA糖基化位点突变体的构建
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作者 宋钢 官孝群 宋后燕 《上海医科大学学报》 CSCD 1998年第6期403-405,共3页
构建人组织型纤溶酶原激活剂(tisuetypeplasminogenactivator,t-PA)cDNA糖基化位点突变体,为t-PAcDNA在Pichiapastoris酵母表达系统中的表达提供条件。方法运用DN... 构建人组织型纤溶酶原激活剂(tisuetypeplasminogenactivator,t-PA)cDNA糖基化位点突变体,为t-PAcDNA在Pichiapastoris酵母表达系统中的表达提供条件。方法运用DNA重组技术,构建pAHR、pARH质粒,然后应用改良的寡核苷酸诱导定位突变技术,构建pMAHR、pMARH质粒,并用限制性核酸内切酶鉴定、核酸序列分析证实。结果琼脂糖凝胶电泳显示了特异的片段,序列分析证实获得的pMAHR为Asn117和Asn184位点突变的阳性克隆,pMARH为Asn448位点突变的阳性克隆。结论成功地构建了t-PAcDNA糖基化位点突变体。 展开更多
关键词 CDNA 糖基化位点 突变体 纤溶酶原激活剂
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