粟酒裂殖酵母tRNA前体3′末端加工酶Trz1p功能的研究

[目的]研究粟酒裂殖酵母tRNA前体3′末端加工酶Trz1p在体内的功能,为以后进一步探索Trz1p的功能奠定基础。[方法]构建Trz1+的表达载体pREP82x-trz1-5 flag,通过醋酸锂转化法将pREP82x-trz1-5 flag转入yYH1菌株和Trz1+的缺失菌株ySS0319中,并进行随机孢子分析。[结果]Trz1p C-端添加5FLAG仍能促进tRNA前体3′末端的加工成熟,但Trz1-5flag不能救活Trz1+的缺失菌株。[结论]粟酒裂殖酵母Trz1p具有tRNA前体3′末端加工功能。

Ribozyme及其在医学上的应用前景

本文简要介绍了各类Ribozyme的催化机制,Ribozyme的人工设计及其在医学上的应用前景。

3′-半分子5′-末端双链结构阻止tRNA连接酶酶促反应

用定点突变技术将不同核苷酸引入酵母苯丙氨酸tRNA反密码子环32,37和38位.体外转录制备tRNA前体,其32,37和38位的核苷酸与野生型tRNA前体相应位点的核苷酸不同.用纯化的酵母tRNA内切酶和tRNA连接酶对这些tR-NA前体进行剪接加工.结果说明,这些位点的核苷酸不仅影响tRNA内切酶对tR-NA前体的酶切效率,而且3’-半分子5’-末端双链结构阻止tRNA连接酶将相应的tRNA半分子连接成整分子tRNA.