Armillariella tabescens EJLY2098β-甘露聚糖酶的诱导、纯化及酶学性质分析

Armillariella,tabescens EJLY2098经魔芋精粉诱导,可产β-甘露聚糖酶,再用正交实验优化诱导培养基,结果在培养基为魔芋精粉2％、蛋白胨1％、土豆汁25％、KH2PO4 0．3％、MgSO4·7H2O 0．15％、维生素B1 0．01％时可诱导出较高活性的酶。用DEAE-阴离子交换色谱从培养上清分离纯化β-甘露聚糖酶,出现2个活性组份。活性组份P2的SDS-PAGE分析显示电泳纯的一条带,分子量约78．9kDa。HPTLC分析P2为内切β-甘露聚糖酶;酶反应的最适温度为60℃,最适pH为4．0-6．0。保温30min的半失活温度T1/2为63℃,在pH4．5-6．0之间稳定性较好。Na+和Ba2+对其有激活作用,等电点pI约为4．0-4．1。获得了一株产β-甘露聚糖酶的新菌种,为进一步用基因工程方法克隆并构建具有完整自主知识产权的重组β-甘露聚糖酶基因工程菌提供了重要的基础工作。

假密环菌Armillariella tabescens EJLY2098 β-甘露聚糖酶的克隆、表达及性质分析(英文)

本研究利用RT-PCR和RACE技术从Armillariella tabescens EJLY2098(一种食用真菌)中克隆出了β-甘露聚糖酶的全长cDNA,构建到pPICZaA载体上,并在毕赤酵母GS115中表达了含His标签的β-甘露聚糖酶(re-atMAN47)。该酶的全长cDNA共1481bp,编码445个氨基酸,序列分析表明该序列除含有β-甘露聚糖酶结构域外,还含有CBD和GHF5的结构域,因此可被归为糖苷水解酶家族5的一个新成员。诱导培养72h时重组酶活可达到1.067U/mL,蛋白含量为440mg/L。重组酶的最适反应温度为60°C,在30°C～65°C比较稳定;酶促最适pH为5.5、4.5～7.0之间比较稳定。这是首次关于Armillariella. tabescens EJLY2098产β-甘露聚糖酶的报道,得到了一个有较好热稳定性、pH稳定性和生物安全性的糖苷水解酶,将在饲料、食品、药物生产等方面有广泛的应用。

Armillariella tabescens EJLY2098 β-甘露聚糖酶atMAN47的纯化及酶学性质分析

以魔芋精粉为唯一碳源，对假蜜环（Armillariellatabescens）EJLY2098进行培养，诱导其产生β-甘露聚糖酶。经DEAE一阴离子交换层析后，分离纯化出β-甘露聚糖酶atMAN47。酶学性质分析：该酶分子量约为47kD，酶的最适反应温度为50℃，在pH5．0～6．5之间该酶的稳定性较好；Na＋和Ba2＋对该酶有激活作用，用TLC对酶产物分析，表明该酶为内切β-甘露聚糖酶。该酶为偏酸性的内切甘露聚糖酶，适合发展为饲料的酶制剂，具有良好的应用前景。

假蜜环菌液体深层发酵条件的研究

对该真菌菌丝体的液体深层培养条件进行了探讨为进一步工业化发酵提供参考数据。方法 :在基本培养基的基础上分别改变碳源、氮源、无机元素和C/N比对该菌的液体深层发酵情况 ,包括测量各培养条件下耗糖情况、绘制生长曲线 ,观察菌体的生长形态等等。结果 :假蜜环菌的菌丝产量在第 6d可达到最大值 ,其后会逐渐降低 ,并伴有溶菌的现象发生。在培养初期加入微量钴元素有利于刺激糖代谢提高菌体对糖的利用率 ,其作用主要是缩短延滞期。进入指数生长期后连续补加碳源有利于菌体迅速生长。优化后培养基组成为 :葡萄糖 1%和蔗糖 1%为碳源 ,以酵母浸膏 1%为氮源 ,KH2 PO40 1% ,MgSO40 0 5 %Z ,元素钴适量。液体深层发酵培养 6d后菌丝生长状态已达到最佳 ,在此条件下搅拌发酵培养可收获 2 0mg/ml(干重 )

亮菌产漆酶的液体和固体发酵条件优化

为了探讨液体和固体发酵条件对亮菌(Armillariella tabescens)产漆酶的影响,采用正交试验对亮菌液体和固体发酵产漆酶培养基和培养条件进行筛选。供试亮菌在液体培养时产漆酶甚微,在培养基和培养条件优化后最高酶活为7.92 U/mL;固体发酵时在以葡萄糖浓度0.6%、稻草麦麸质量比3∶7、温度27℃、含水量65%、接种量11 mL/100 g培养时漆酶酶活可达3 496.7 U/g。固体发酵的酶活显著高于液体发酵,固体发酵更适宜亮菌产漆酶。