注射用单磷酸阿糖腺苷细菌内毒素检查方法研究

目的:建立注射用单磷酸阿糖腺苷的细菌内毒素检测方法并进行方法学验证,以期对该品种的质量控制标准进行统一规范。方法:按照《中国药典》2020年版四部通则1143“细菌内毒素检查法”,确定细菌内毒素的限值,进行干扰试验,并进行内毒素检查。结果:按经验拟定的限值标准(每1mg单磷酸阿糖腺苷中含内毒素的量应小于0.06EU)对15个厂家提供的25个批次的供试品进行细菌内毒素检查,结果均符合规定。结论:本文建立的细菌内毒素检查法检查,可用于注射用单磷酸阿糖腺苷的质量控制。

检验用鲎试剂及重组试剂的现状与思考

目的通过研究检验用鲎试剂及重组试剂的使用及管理现状,为细菌内毒素检测和鲎试剂使用的科学有序发展提供参考。方法结合日常医疗产品检测和管理工作实践,梳理检测用鲎试剂的相关历史沿革和国内外监管现状,分析在鲎资源短缺情况下,细菌内毒素检测主要替代方法及其所用重组试剂的基本情况。结果与结论对目前在无菌医疗产品细菌内毒素检测领域可能面临的原材料短缺、监管方式有待进一步完善等主要问题进行总结,建议明确鲎试剂的管理归属、对医疗产品检验用鲎试剂的质量标准开展标准提高及生产质量管理的研究工作、加强鲎试剂检测替代方法相关试剂的监管等。

重组C因子法检测医疗器械中细菌内毒素的方法学研究

目的 探究重组C因子法检测不同医疗器械中细菌内毒素的适用性,为重组C因子法在医疗器械检验中的使用提供依据。方法 以2020年版《中国药典》四部9251细菌内毒素检查法应用指导原则为依据,对重组C因子检测法的准确度进行验证,并按GB/T 16886.1-2011中对医疗器械的分类,选取不同医疗器械样品,使用重组C因子试剂盒进行检测,与凝胶法及动态浊度法进行比对。结果 高、中、低浓度内毒素标准品采用重组C因子法的实测值与理论值具有良好的相关性,说明方法具有较好的准确度,且不同医疗器械产品使用重组C因子法和动态浊度法检测结果的比值在50%~200%范围内,回收率在50%~200%之间,与凝胶法检测结果也一致。结论 重组C因子法对于医疗器械中细菌内毒素的检测具有良好的适用性。

微量凝胶法测定细菌内毒素探讨

目的 建立测定样品中细菌内毒素的微量凝胶法。方法 按2020年版《中国药典(四部)》1143细菌内毒素检查法进行试验,通过预试验确定适合试验的试管内径(4,8 mm)及加样量(10,20,30,40,50,60,70μL)后,再进行完整的鲎试剂灵敏度复核试验及样品细菌内毒素检查试验,并与药典收载现行凝胶法进行比较。结果 预试验结果显示,确定采用内径为8 mm的平底玻璃试管,加样量为40μL或50μL进行微量凝胶法试验。对鲎试剂进行灵敏度复核,微量凝胶法灵敏度复核结果与药典收载现行凝胶法一致,均在灵敏度合格范围内。对样品进行细菌内毒素检查,微量凝胶法试验结果与药典收载现行凝胶法一致。结论 该微量凝胶法可作为药典收载现行凝胶法的补充或替代方法,鲎试剂缺乏的情况下可用于灭菌制剂的细菌内毒素检查。

重组鲎C因子(rFC)替代鲎血制备鲎试剂的研究进展

鲎试剂广泛用于检测医药产品中的细菌内毒素,但由于鲎资源稀缺,制约了鲎试剂的生产。重组鲎C因子(rFC)作为鲎试剂的替代品,通过基因工程表达获得,可特异性检测内毒素,不依赖动物资源。综述了rFC的检测机制、发展历程及药典认可情况。研究表明,rFC方法具有特异性强、不依赖动物资源等优点,已渐被药典认可,是解决鲎试剂供应短缺的可靠方案,具有重要的应用前景。

动态显色法定量检测泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量

目的:以动态显色法定量检测不溶于水的泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量。方法:根据注射液临床用量从严拟订沙康唑原料药限值为0.25 EU·mg^(-1),以稀释液(二甲基亚砜∶RIPA强裂解液=1∶1)为溶剂处理泊沙康唑原料,采用两个不同厂家的动态显色法鲎试剂,依据《中国药典》2020年版四部通则1143(方法2光度测定法之动态显色法)要求,确定样品不干扰的浓度,最后对3批样品的细菌内毒素进行定量检测。结果:两个厂家的鲎试剂标准曲线|r|均大于0.980;样品质量浓度≤0.02 mg·mL^(-1)时,细菌内毒素回收率在范围内;3批样品的细菌内毒素定量检测结果均符合要求。结论:以0.25 EU·mg^(-1)为限值,动态显色法用于不溶于水的泊沙康唑原料药细菌内毒素定量检测,方法可行,过程可控。

唑来膦酸原料细菌内毒素检查方法学研究

目的:建立唑来膦酸原料细菌内毒素的检查方法。方法:依据2020年版《中国药典(四部)》附录1143建立唑来膦酸原料细菌内毒素的检测限。结果:唑来膦酸原料药在≤0.05 mg/m L时对细菌内毒素检查方法无干扰。结论:唑来膦酸原料的细菌内毒素限值可设定为10 EU/g。

首批单核细胞活化反应检查法专用细菌内毒素国家标准品的建立与应用

目的 为《中华人民共和国药典》(2020年版)9301单核细胞活化反应检查法建立专用的细菌内毒素国家标准品,保障注射剂的质量安全。方法 通过生产制备、协作标定、均匀性考察等研究,建立了首批细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应检查法专用)。结果 全国5家药品检验所使用3种方法进行协作标定,标定结果间经方差分析无显著性差异,加权平均值为每支152.0 EU,95%置信区间为每支136.2~169.5.0 EU,可信限率为10.96%。均匀性研究符合规定。待标品使用单核细胞活化反应检查法检测结果平均值为每支144.6 EU。最终确定待标品为细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应测定用),效价为每支150 EU。结论 建立了首批细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应检查法用,批号:150608-202101)。

基因重组鲎试剂检测促肝细胞生长素注射液中细菌内毒素含量适用性研究

目的 探讨基因重组鲎试剂用于测定促肝细胞生长素注射液中细菌内毒素含量的适用性。方法 分别使用基因重组鲎试剂和天然美洲鲎试剂建立细菌内毒素标准曲线,采用供试品干扰试验测定供试品溶液中外加内毒素的回收比,采用动态显色法测定供试品中细菌内毒素含量,并比较2种鲎试剂检测结果的差异。结果 2种鲎试剂细菌内毒素浓度在0.008~5 EU/mL范围内与反应时间线性关系较好(|r|≥0.998)。供试品在稀释2倍或20倍时对反应无干扰,细菌内毒素回收比均在50%~200%之间,26批供试品的细菌内毒素含量均小于限值(37.5 EU/mL)。2种鲎试剂细菌内毒素含量检测结果无显著差异(P> 0.05)。结论 该研究中建立了该制剂细胞内毒素的定量检测方法,准确性和灵敏度好,可用于该产品生产、流通环节细菌内毒素的质量控制。

壳聚糖修饰载鲎血蛋白-白蛋白微球的制备及其活性研究

文章通过分析壳聚糖修饰的牛血清白蛋白为载体制备包载鲎血蛋白的微球,考察制备微球的最佳工艺和活性。载药微球粒径大小较为均一,粒径范围为(285±54)nm。Zeta电位值为(-42.69±3.69)mV,包封率为(83.075±4.86)%,载药量为(34.25±2.41)%,在人工血液(pH=7.4)、肠液(pH=6.8)、胃液(pH=1.2)中24 h的累积释放量分别为55.63%、55.25%、48.75%。载药微球生物相容性高,稳定性好,药物释放具有明显的缓释效果。

柴胡总皂苷抗内毒素活性研究

目的 :探讨柴胡总皂苷 (BCS)抗内毒素活性。方法 :从柴胡中提出柴胡总皂苷 ,用体外鲎试验法、细菌内毒素致兔热模型、细菌内毒素致卡介苗增敏小鼠毒性证实其抗内毒素活性。结果 :体外鲎试验法显示将 5 0mg·ml 1的柴胡总皂苷溶液稀释至 32倍仍有直接破坏内毒素作用 ;解热实验显示 ,BCS +LPS组、模型组 (LPS)、BCS组的最大升温和平均升温分别为 0 0 5℃和 0 75℃ ,0 0 1℃和 - 0 2 5℃ ,0 4 9℃和 - 0 37℃ ,BCS +LPS组与模型组相比差异显著 (P <0 0 1) ;细菌内毒素致小鼠毒性实验显示 ,BCS +LPS组死亡率 (13 3% )大于BCS组 (5 0 % ) ,但与模型组 (90 0 % )相比 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论 :柴胡总皂苷具有抗内毒素活性。

鲎试剂的研究及应用进展

鲎试剂已广泛用于细菌内毒素的检验,本文介绍了鲎试剂的生产、分类,用于细菌内毒素检查的反应原理和检测方法、应用领域以及国内外鲎试剂生产和质量的现状和研究进展,并提出了我国鲎试剂应用中急需解决的问题。

武汉市自来水处理工艺过程中内毒素的含量

目的了解武汉市主要饮用水中内毒素的污染现状以及自来水常规处理工艺对内毒素的去除效果。方法于2008年3月,采集以长江为水源的平湖门水厂和以汉江为水源的宗关水厂原水、一次加氯、混凝沉淀、过滤、二次加氯(出厂水)、管网末梢水环节水样进行检测。采用《中华人民共和国药典》(2005版)中细菌内毒素鲎试剂检查法的光度测定法检测水样中内毒素的含量。结果平湖门水厂的长江原水的内毒素含量范围为(100.98±2.75)EU/ml,管网末梢水中内毒素含量范围为(18.53±0.01)EU/ml;宗关水厂的汉江原水的内毒素含量范围为(86.40±1.69)EU/ml,管网末梢水中内毒素含量范围为(41.68±1.94)EU/ml。平湖门、宗关水厂自来水常规处理工艺对内毒素的总去除率分别为81.65%和51.76%。结论自来水处理工艺对内毒素有去除效果,但出厂水内毒素含量仍较高。

异育银鲫溶血性腹水病病原的研究

本文对上海市郊县和江苏省吴江县的异育银鲫溶血性腹水病,进行了病原分离和人工感染试验。对致病菌株进行了细菌学鉴定,其分别为运动型气单胞菌的苏伯利气单胞菌(Aeromonas sobria)和嗜水气单胞菌(A.hydrophila)。通过对人工感染病鱼血清内毒素(En-dotoxin)的测定,并用菌体破碎液注射健康鱼体试验,初步认为病原产生和释放的内毒素类物质,是使鱼类致病和死亡的主要原因之一。

58例输液反应原因分析

目的分析58例临床输液反应的原因,寻找预防措施,减少输液反应的发生。方法对我院近两年发生的58例输液反应从致热原、细菌、药物因素、输液器具、季节、患者年龄等方面进行分析。结果对输液反应的药液进行热原检测,共有5例阳性;血培养7例阳性;药液细菌培养2例阳性,同一批号未开封药液细菌培养无细菌生长;输液器及头皮针细菌培养和热原检测全部阴性;引起输液反应的药物以中药制剂、大分子物质、血液制品及含K+的药物为主;秋季为高发季节;发生率高的为中老年人。结论引起输液反应的原因复杂,严格质量控制和无菌操作,以减少输液反应的发生。

重组C因子法检测细菌内毒素的方法适用性研究

目的考察重组C因子法的品种适用性,以加快该方法的推广。方法选取有代表性的6个典型品种,每个品种3个批次,进行重组C因子法干扰试验,并经过国内4个实验室进行复核验证。以回收率为评价指标,以2015年版《中国药典》为评价标准,总结4个实验室应用该方法产生的问题和解决策略。结果 6个品种18个批次在验证实验室和3个复核实验室的回收率结果均在《中国药典》要求的50%～200%范围内,符合干扰试验要求;该方法应用中的常见问题和解决策略共有7项21条。结论重组C因子法在国内4个实验室对6个典型品种具有较好的品种适用性。

鲎试验测定乙酰谷酰胺氯化钠注射液中的细菌内毒素

目的检测乙酰谷酰胺氯化钠注射液中的细菌内毒素。方法供试品干扰试验后,采用鲎试验法对样品中的细菌内毒素进行检测。结果6批乙酰谷酰胺氯化钠注射液及其2倍稀释液对鲎试验检查均无干扰作用,所测样品的细菌内毒素含量均小于0.5 EU.m l-1。结论所建方法检查乙酰谷酰胺氯化钠注射液中的细菌内毒素可行。

医用透明质酸钠细菌内毒素检查方法的研究

本实验是为研究透明质酸钠的细菌内毒素检查方法。方法：实验中使用鲎试剂的灵敏度 为０．０３ＥＵ／ｍｌ，进行干扰试验和抗干扰试验，并对其进行了热原检查。结果：在干扰试验中，样品 表现为增强性干扰，增大样品稀释倍数不能排除干扰。添加抗增液则可有效排除干扰。根据参考 文献和热原检查的兔剂量，我们认为透明质酸钠的细菌内毒素限值应定为５ＥＵ／ｍｌ以内。

超滤技术去除重组MUC1-MBP融合蛋白中内毒素的效果评价

目的:评价超滤技术去除纯化后重组MUC1-MBP融合蛋白(MUC1-MBP)溶液中内毒素的效果,阐明超滤技术对去除内毒素的作用。方法:选取表达MUC1-MBP大肠杆菌基因工程菌,分别通过CM Sepharose FF离子交换层析(CM)(CM组)、CM联合Phenyl Sepharose 6FF疏水层析(C6)(CM+C6组)、CM加超滤(CM+超滤组)以及CM联合C6加超滤(CM+C6组+超滤)进行纯化,并去除内毒素;采用SDS-PAGE分析蛋白纯度;鲎试剂显色基质法检测内毒素表达水平。结果:SDS-PAGE分析,在预期相对分子质量62 000处呈现单一条带,Quantity One分析纯度>96%;CM组与CM+C6组内毒素表达水平均较高,但2组比较差异无统计学意义(P>0.05);与CM组比较,CM+超滤组内毒素表达水平明显降低(P<0.01);与CM+C6组比较,CM+C6超滤组内毒素表达水平明显降低(P<0.01);CM+超滤组与CM+C6+超滤组内毒素表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CM或CM联合C6均不能有效去除内毒素,其中C6对去除内毒素几乎无作用;CM加超滤可有效去除内毒素,超滤技术在去除内毒素中发挥重要作用。

单味中药及活性成分体外抗内毒素实验研究

目的:研究单味中药及活性成分抗内毒素作用。方法:采用鲎试剂试管凝集反应进行体外抗内毒素的实验研究。结果:所研究单味中药及活性成分均有不同程度的抗鲎试剂试管凝集反应现象。结论:所研究单味中药及活性成分对细菌内毒素有直接的破坏降解作用。