抗前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体的体外活性表征

目的探讨托莱西单抗、依洛尤单抗和阿利西尤单抗与前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的亲和力。方法采用表面等离子共振法和生物膜层干涉法检测托莱西单抗、依洛尤单抗、阿利西尤单抗3种PCSK9抑制剂对PCSK9的亲和力;采用免疫印迹法(Western blot)法检测HepG2细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达水平,考察不同质量浓度(0,6,60,180μg/mL)托莱西单抗阻断重组人PCSK9(D374Y)与LDLR的结合能力。结果表面等离子共振法和生物膜层干涉法测得托莱西单抗与PCSK9的平衡解离常数分别为2.90×10^(-10)mmol/L和5.05×10^(-10)mmol/L;托莱西单抗与重组人PCSK9(D374Y)的亲和力是依洛尤单抗的1.85倍、2.57倍,是阿利西单抗的5.38倍、4.71倍。托莱西单抗阻断重组人PCSK9(D374Y)与LDLR结合的半数抑制浓度(IC50)为64.42 nmol/L,与重组人PCSK9(D374Y)结合恢复低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)内吞作用的半数最大效应浓度(EC50)分别为(15.03±0.63)μg/mL和(7.22±0.16)μg/mL;Western blot法试验结果显示,不同质量浓度(0,6,60,180μg/mL)托莱西单抗中HepG2细胞灰度值分别为0.76,0.83,3.21,3.28。结论托莱西单抗与PCSK9的亲和力强于阿利西尤单抗和依洛尤单抗,能阻止LDLR的降解,从而浓度依赖性地增加肝细胞表面LDLR的表达。