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基于EST-SSR标记的沙棘品种鉴定及指纹图谱构建
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作者 赵雨欣 张哲文 +5 位作者 考惠霞 孙永江 辛智鸣 赵喆 董树斌 程瑾 《生态与农村环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期374-385,共12页
以沙棘(Hippophae rhamnoides)优良品种“实优1号”为材料,对其叶片进行转录组测序,利用微卫星识别软件(microsatellite identification tool,MISA)和Primer 3(version 2.3.4)对获得的序列进行简单重复序列(simple sequence repeat,SSR... 以沙棘(Hippophae rhamnoides)优良品种“实优1号”为材料,对其叶片进行转录组测序,利用微卫星识别软件(microsatellite identification tool,MISA)和Primer 3(version 2.3.4)对获得的序列进行简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)位点挖掘和引物设计,以收集的42份沙棘品种为研究材料,开展聚合酶链式反应(PCR)和毛细管电泳检测,旨在开发一套多态性高、稳定性好和通用性强的表达序列标签微卫星(express sequence tags from simple sequence repeat,EST-SSR)引物,构建沙棘指纹图谱,从而实现沙棘品种的快速准确鉴定,并对沙棘品种间亲缘关系进行分析。“实优1号”转录组测序共获得6196个SSR位点,其中,重复基元类型为182种,SSR基序长度主要分布在10~21 bp区间,占全部SSR的81.58%,主要SSR重复类型为单核苷酸重复(48.72%)、二核苷酸重复(22.68%)和三核苷酸重复(18.85%)。利用筛选出的28对引物在42份沙棘品种中共检测出193个等位基因,等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)和Shannon信息指数(I)等遗传多样性参数的均值分别为6.964、3.495、0.617、0.671、0.623和1.384。UPGMA聚类分析表明,42份沙棘品种间的遗传相似性系数为0.601~0.990,当遗传相似性系数为0.694时,供试品种可分为2组;当遗传相似性系数约为0.7402时,供试品种可分为3组。优选6对引物构建指纹图谱,可以实现沙棘品种的快速准确鉴定。该研究可为沙棘的良种鉴定、指纹图谱构建以及遗传多样性和亲缘关系分析等提供分子水平的理论基础和数据支撑。 展开更多
关键词 沙棘 表达序列标签微卫星 指纹图谱 遗传多样性
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Expressed sequence tags (ESTs) analysis of the ripening Vitis amurensis cv. Shuang Hong berry skins 被引量:1
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作者 JI Xiang-Nan LI Feng +3 位作者 YANG Cheng-Jun LI Bo WANG Jun ZHANG Wen 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期495-502,共8页
Vitis amurensis is a valuable resource for wine production. Ripening of the grape berry is the key phase which determines the com- position of wine. To better understand the gene expression that manifest in V. amurens... Vitis amurensis is a valuable resource for wine production. Ripening of the grape berry is the key phase which determines the com- position of wine. To better understand the gene expression that manifest in V. amurensis berry skins during the ripening, cDNA library of V. amurensis berry skins was constructed. A total of 935 high quality ex- pressed sequence tags (ESTs) were obtained from the library. These ESTs represent 636 unigenes, including 108 contigs and 528 singletons. The EST analysis was performed and genes were assigned to functional categories according to their primary BLAST match. Of these 25.35% were involved with metabolism, 6.27% with cell rescue and defense, 6.84% energy, 11.68% protein synthesis, 18.8% protein activity regula- tion, 11.11% cell structure, 7.98% transport, 6.27% transcription and the remaining 5.7% were signal transduction. The generated ESTs were characterized by the gene ontology analysis and were categorized ac- cording to its cellular component, molecular function and biological process. In the cDNA library, some genes are relevant to the biosynthesis of anthocyanins, while some genes are related to grape berry maturation. 展开更多
关键词 Vitis amurensis expressed sequence tags (ests) cDNAlibrary unigene annotation gene ontology
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美洲鲥脑转录组多态性EST-SSR的规模化开发与利用 被引量:1
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作者 于爱清 施永海 +1 位作者 徐嘉波 刘永士 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第11期1-12,共12页
【目的】挖掘美洲鲥脑组织转录组数据中的EST-SSR,规模化开发多态性较好的EST-SSR,为美洲鲥种质资源评估提供分子标记。【方法】采集2龄美洲鲥雌雄个体(各3尾)的脑组织,提取其RNA,构建cDNA文库,进行高通量转录组测序。用MISA软件进行脑... 【目的】挖掘美洲鲥脑组织转录组数据中的EST-SSR,规模化开发多态性较好的EST-SSR,为美洲鲥种质资源评估提供分子标记。【方法】采集2龄美洲鲥雌雄个体(各3尾)的脑组织,提取其RNA,构建cDNA文库,进行高通量转录组测序。用MISA软件进行脑组织转录组EST-SSR挖掘和特征分析,利用SSRMMD软件规模化开发多态性EST-SSR。从获得的多态性位点中随机选取20对4核苷酸重复的EST-SSR设计引物,对24尾1龄美洲鲥进行遗传多样性评估,验证这些多态性EST-SSR的应用效果。【结果】从雌性美洲鲥脑组织转录组189 428个非冗余基因中鉴定到117 751个EST-SSR,从雄性美洲鲥脑组织转录组185 419个非冗余基因中鉴定到114 809个EST-SSR。美洲鲥雌雄个体脑组织转录组中不同类型微卫星的重复基序均具有不同的数量分布特征,其中2核苷酸重复基序数量最多,分别占EST-SSR总数的72.78%和73.60%,而单核苷酸、3核苷酸、4核苷酸、5核苷酸和6核苷酸重复的EST-SSR数量随着重复碱基数量的增加而呈逐级减少趋势;不同EST-SSR重复类型的优势重复基序亦有所不同,单核苷酸重复、2核苷酸重复和3核苷酸重复基序的优势基序分别为A/T、AC/GT和AGG/CCT。从7 671个雌雄美洲鲥脑组织转录组共有EST-SSR中成功鉴定到1 726个多态性EST-SSR,其中鉴定自单核苷酸重复、2核苷酸重复、3核苷酸重复的多态性EST-SSR分别有705,827和116个。20个4核苷酸重复的EST-SSR中,有17个位点多态性较好,其检测1龄美洲鲥的观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和多态信息含量(PIC)均值分别为0.498,0.620和0.561,表明本单位科研基地的美洲鲥养殖群体历经数年的人工养殖,仍然具有相对较高的遗传多样性。【结论】基于美洲鲥脑组织转录组数据规模化开发了多态性EST-SSR,这些位点可用于美洲鲥养殖群体的遗传多样性评估及分子标记辅助遗传育种。 展开更多
关键词 美洲鲥 高通量测序 脑组织转录组 微卫星标记(SSR) 表达序列标签SSR(est-SSR)
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从中国对虾ESTs中筛选微卫星标记的研究 被引量:38
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作者 徐鹏 周令华 +1 位作者 田丽萍 相建海 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期213-218,共6页
利用生物信息学方法在含有10446个中国对虾ESTs的数据库中进行微卫星序列的筛选,共发现微卫星序列229个,占整个ESTs数据库的2.19%,其中含双碱基重复序列146个和3碱基重复序列58个,分别占在ESTs数据库中发现微卫星序列总数的63.76%和25.3... 利用生物信息学方法在含有10446个中国对虾ESTs的数据库中进行微卫星序列的筛选,共发现微卫星序列229个,占整个ESTs数据库的2.19%,其中含双碱基重复序列146个和3碱基重复序列58个,分别占在ESTs数据库中发现微卫星序列总数的63.76%和25.33%,大部分发现的微卫星序列均为Perfect形式的重复序列。根据筛选得到的微卫星序列设计并合成引物19对进行多态性检测,在有扩增产物的16对引物中,首次筛选得到8个中国对虾微卫星标记,并对这些微卫星标记进行了等位基因频率、观测杂合度、期望杂合度、PIC值等统计学指标的评价。结果表明,在8个微卫星位点上,等位基因的数目从5到15不等,等位基因长度从165~305bp,期望杂合度和多态性信息含量分别为0.59到0.89和0.56到0.88,表明这8个中国对虾微卫星标记完全适合于遗传分析。 展开更多
关键词 中国对虾 estS 微卫星标记 生物信息学 微卫星序列 等位基因频率 观测杂合度 期望杂合度
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刺参(Apostichopus japonicus)EST序列中微卫星分布分析及其标记的筛选 被引量:20
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作者 孙国华 杨建敏 +3 位作者 宋志乐 孙孝德 王卫军 张宇 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期133-139,共7页
利用微卫星查找软件对现已公布的6632条刺参ESTs的数据库中2—6个碱基重复单元组成的简单序列重复进行筛选,进而对其微卫星的丰度和分布进行比较研究。共发现微卫星序列416个,占整个ESTs数据库的6.48%;其中含双碱基重复序列146个,数量最... 利用微卫星查找软件对现已公布的6632条刺参ESTs的数据库中2—6个碱基重复单元组成的简单序列重复进行筛选,进而对其微卫星的丰度和分布进行比较研究。共发现微卫星序列416个,占整个ESTs数据库的6.48%;其中含双碱基重复序列146个,数量最多,占ESTs数据库中发现微卫星序列总数的65.86%;三、四、五、六碱基重复序列分别占微卫星序列总数的26.68%、1.68%、0.24%、5.53%。对含有SSR位点符合微卫星引物设计的EST序列利用Primer软件结合人工方法设计合成引物21对,其中13对有扩增产物且均为多态位点。扩增产物变性聚丙烯酰胺胶电泳,统计每个微卫星标记等位基因数目,计算等位基因频率、观测杂合度、期望杂合度等统计学指标的评价。结果表明,在13个微卫星位点上,等位基因的数目从3到8不等,等位基因长度从175—382bp,观测杂合度和期望杂合度分别为0.158—0.650和0.198—0.841,所筛选微卫星标记可于遗传分析。 展开更多
关键词 刺参 微卫星 表达序列标签 等位基因
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杨树EST-SSR标记的开发 被引量:36
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作者 张新叶 宋丛文 +2 位作者 张亚东 杨彦伶 黄敏仁 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第9期53-59,共7页
利用来自美洲黑杨及欧美杨的20023条EST序列,进行EST-SSR标记开发研究。首先对这些EST序列进行序列拼接,然后在非重复序列中发现由二核苷酸至五核苷酸组成的SSR重复序列。共在10816个非重复序列中发现1604个序列含有SSR,占总非重复序列... 利用来自美洲黑杨及欧美杨的20023条EST序列,进行EST-SSR标记开发研究。首先对这些EST序列进行序列拼接,然后在非重复序列中发现由二核苷酸至五核苷酸组成的SSR重复序列。共在10816个非重复序列中发现1604个序列含有SSR,占总非重复序列的14.8%。在发现的1918个SSR重复序列中,二核苷酸重复是最丰富的重复类型,占总类型的62.3%。设计合成48对SSR引物,利用6个不同的杨树品种对其进行验证。结果约90%的引物获得扩增产物,58%的引物在6个不同杨树品种中产生多态性分离。另外,还对重复序列的数量及重复类型进行了讨论。 展开更多
关键词 杨树 表达序列标签(est) 简单重复序列(SSR)
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银杏EST序列中微卫星的分布特征 被引量:30
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作者 樊洪泓 李廷春 +2 位作者 李正鹏 林毅 蔡永萍 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期869-873,共5页
本文利用从NCBI下载的21590条银杏EST序列,分析了银杏(表达序列标签微卫星)EST-SSR在银杏EST序列的分布和比较了在不同长度EST序列中的SSR特性。在剔除冗余和低质量序列后,得到总长为5708.385kb的无冗余EST序列7961条,发现了405个EST... 本文利用从NCBI下载的21590条银杏EST序列,分析了银杏(表达序列标签微卫星)EST-SSR在银杏EST序列的分布和比较了在不同长度EST序列中的SSR特性。在剔除冗余和低质量序列后,得到总长为5708.385kb的无冗余EST序列7961条,发现了405个EST序列(5.09%)含有475个SSR,长度400~1000bp的EST序列含SSR位点数为445个,占SSR总数的93.68%。二核苷酸和三核苷酸基元类型是银杏EST-SSR的主要类型,分别占SSR总数的73.89%和24.00%,最常见的SSR基元是:(AT)n、(AG)n、(AC)n、(AAG)n和(AAT)n。通过对银杏EST序列中SSR位点信息的发掘分析,为有针对性地设计EST-SSR引物,开发银杏EST-SSR分子标记奠定基础。 展开更多
关键词 银杏 表达序列标签 est-SSR 重复基元
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白菜的EST标记及其对油菜的通用性 被引量:20
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作者 忻雅 崔海瑞 +2 位作者 张明龙 林容杓 崔水莲 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期410-416,共7页
根据白菜的表达序列标签,设计了28对引物。在对引物、dNTP、MgCl2的浓度及退火温度等参数进行测试后,建立了合适的PCR反应体系。在此反应体系下,以构建EST的白菜自交系A的DNA为模板,对设计的引物进行了筛选,发现有18对引物能对白菜DNA... 根据白菜的表达序列标签,设计了28对引物。在对引物、dNTP、MgCl2的浓度及退火温度等参数进行测试后,建立了合适的PCR反应体系。在此反应体系下,以构建EST的白菜自交系A的DNA为模板,对设计的引物进行了筛选,发现有18对引物能对白菜DNA扩增出产物。用筛选出来的引物分别对17个白菜类品种进行PCR扩增,用琼脂糖凝胶电泳分析其产物的多态性,发现10对引物有多态性,占筛选引物的55.6%。为检测白菜EST标记的通用性,进一步利用设计的引物对不同油菜品种的DNA进行PCR扩增。在检测的28对引物中,共有24对引物能扩增出产物,占引物总数的85.7%,显示多态性的引物为18对,占引物总数的64.3%.。在对白菜DNA能扩增出产物的18对引物中,对油菜完全可用,且有13对引物产生多态性。而在那些对白菜未扩增出产物的10对引物中,也有6对能扩增出产物,其中5对显示多态性。结果证明,通过EST建立分子标记是可行的,而且这种标记对近缘物种是可通用的。 展开更多
关键词 白菜 表达序列标签(est) 分子标记 通用性
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麦红吸浆虫唾腺EST-SSRs的信息分析及分子标记筛选 被引量:13
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作者 段云 吴仁海 +4 位作者 罗礼智 武予清 蒋月丽 苗进 巩中军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1147-1154,共8页
昆虫EST资源库的扩充为开发新的分子标记提供了宝贵的资源。本研究对NCBI的EST数据库中来源于麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana唾腺的1217条EST序列进行了unigene组装、SSR信息分析和EST-SSR分子标记筛选。结果表明:在1047个unigenes... 昆虫EST资源库的扩充为开发新的分子标记提供了宝贵的资源。本研究对NCBI的EST数据库中来源于麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana唾腺的1217条EST序列进行了unigene组装、SSR信息分析和EST-SSR分子标记筛选。结果表明:在1047个unigenes中共找到141个SSR位点,分布于106个(10.12%)unigenes中,平均每3.49kb出现一个SSR位点。在1~6碱基重复基元中,1~3碱基是主要重复类型,占总SSR的97.16%以上。A/T(31.21%),AC/GT(15.60%)和AAC/GTT(9.22%)分别是单、双和三碱基中占优势的重复基元类型。利用Primer Premier5.0软件对查找的EST-SSRs进行引物设计,并以麦红吸浆虫基因组DNA为模板,对从中选出的26对SSR引物进行多态性检测。结果有20对(76.92%)引物能扩增出清晰的目的条带,并且其中9对(45%)引物表现出多态性。多态性分析结果表明,从9对EST-SSR引物中,共检测到51个等位基因,平均每个位点含有等位基因数为5.67,平均期望杂合度为0.65,平均多态信息含量为0.60。本研究能够为今后麦红吸浆虫的种群遗传结构与遗传多样性研究提供帮助。 展开更多
关键词 麦红吸浆虫 表达序列标签 est-SSR 分子标记 多态性
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鼻咽癌中染色体3p21区域一个表达下调的EST的鉴定 被引量:14
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作者 贺修胜 陈主初 +6 位作者 田芳 肖志强 贺智敏 关勇军 李峰 何春梅 袁建辉 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-5,共5页
背景与目的:研究显示鼻咽癌细胞3p14-25存在高频率杂合性丢失位点。本研究拟寻找与筛选染色体3p21区域与鼻咽癌相关的表达序列标签(expressedsequencetag,EST),为定位候选克隆鼻咽癌相关新基因奠定基础。方法:充分利用网上的生物信息资... 背景与目的:研究显示鼻咽癌细胞3p14-25存在高频率杂合性丢失位点。本研究拟寻找与筛选染色体3p21区域与鼻咽癌相关的表达序列标签(expressedsequencetag,EST),为定位候选克隆鼻咽癌相关新基因奠定基础。方法:充分利用网上的生物信息资源,采用定位查找ESTs,对ESTs进行同源性比较分析、筛选;运用逆转录PCR(reversetranscription-PCR,RT-PCR)方法,检测ESTs在鼻咽癌和正常鼻咽组织中的表达;并用Northernblot杂交方法,检测EST在人其他正常组织及肿瘤细胞系的表达状况。结果:在3p21区域筛选到一个在鼻咽癌中表达下调的EST(N31985),在60.00%(3/5)的鼻咽癌细胞株及47.06%(16/34)的鼻咽癌活检组织检测到有EST(N31985)表达下调,与正常鼻咽上皮组织相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:染色体3p21区域EST(N31985)在鼻咽癌中表达下调,提示其可能参与鼻咽癌癌变过程。 展开更多
关键词 基因表达 RT-PCR 鼻咽癌 3p21区域 est
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缢蛏(Sinonovacula constricta)EST-SSR分布特征及引物开发利用 被引量:28
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作者 刘博 邵艳卿 +2 位作者 滕爽爽 柴雪良 肖国强 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期132-137,共6页
采用CAP3软件对NCBI上的5296条缢蛏ESTs序列进行了微卫星特征分析。结果表明,经拼接、去冗得到非冗余EST序列3453条,含SSR位点的EST序列267条,共307个SSR位点,检出率为8.89%,平均每6.83kb出现1个SSR位点。设计了40对EST-SSR引物并进行PC... 采用CAP3软件对NCBI上的5296条缢蛏ESTs序列进行了微卫星特征分析。结果表明,经拼接、去冗得到非冗余EST序列3453条,含SSR位点的EST序列267条,共307个SSR位点,检出率为8.89%,平均每6.83kb出现1个SSR位点。设计了40对EST-SSR引物并进行PCR扩增,29对引物能扩增出理想的PCR产物,其中多态性引物14对。利用14对多态性引物分析了乐清湾缢蛏遗传多样性,共检测到等位基因数(Na)61个,每个位点的等位基因数为2—12个。二核苷酸、三核苷酸和四核苷酸重复是最主要的重复类型,分别占15.96%、37.13%和35.50%。乐清湾缢蛏群体观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和多态信息含量(PIC)分别为0.569、0.490和0.449,表明乐清湾缢蛏遗传多样性较丰富。 展开更多
关键词 缢蛏 表达序列标签(est) 简单重复序列(SSR)
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亚洲带绦虫成虫全长cDNA质粒文库的构建及EST测序 被引量:44
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作者 黄江 胡旭初 +4 位作者 包怀恩 余新炳 李丽 郎书源 廖兴江 《热带医学杂志》 CAS 2007年第2期116-118,184,共4页
目的构建亚洲带绦虫成虫全长cDNA质粒文库,为获取亚洲绦虫成虫的基因信息,建立基因表达谱,并为筛选疫苗基因和诊断抗原基因奠定基础。方法提取亚洲带绦虫成虫mRNA,构建pBluescript II SK全长cDNA质粒文库,测定扩增文库的滴度;用载体克... 目的构建亚洲带绦虫成虫全长cDNA质粒文库,为获取亚洲绦虫成虫的基因信息,建立基因表达谱,并为筛选疫苗基因和诊断抗原基因奠定基础。方法提取亚洲带绦虫成虫mRNA,构建pBluescript II SK全长cDNA质粒文库,测定扩增文库的滴度;用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建文库的质量。随机挑选质粒文库转化的阳性重组克隆,进行较大规模的5′端测序,归并unigene。结果测定文库的滴度为1011pfu/μl,插入片段的大小主要在1000bp以上。共测1495个克隆,获得有效EST序列1126个,归并为643条unigene。结论已成功获得一高质量的亚洲带绦虫成虫全长cDNA表达文库,并获得了较丰富的成虫表达基因数据。 展开更多
关键词 亚洲带绦虫 全长cDNA质粒文库 表达序列标签(est)
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鸡下丘脑cDNA文库的构建及部分克隆ESTs序列初步分析 被引量:7
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作者 赵志辉 李宁 +2 位作者 刘兆良 张玉静 吴常信 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-305,共5页
以鸡下丘脑为实验材料,以λgt10为载体,构建了鸡下丘脑cDNA文库。结果表明,文库的滴度为3.8×106,重组率为80%,插入片段大小集中在1.0~3.0kb之间。从cDNA文库中随机挑取10个克隆,并对其ES... 以鸡下丘脑为实验材料,以λgt10为载体,构建了鸡下丘脑cDNA文库。结果表明,文库的滴度为3.8×106,重组率为80%,插入片段大小集中在1.0~3.0kb之间。从cDNA文库中随机挑取10个克隆,并对其ESTs进行了测定和初步分析。经BLASTn和FASTA3分析后发现,4个ESTs在鸡中已有同源序列,4个在人或其他物种中也可以找到同源序列,有两个为未知功能基因。所测10个ESTs序列均已录入GenBank。 展开更多
关键词 下丘脑 CDNA文库 表达序列标签 功能基因
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茶苗嫩根cDNA文库的构建和EST分析 被引量:14
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作者 史成颖 宛晓春 +1 位作者 江昌俊 张正竹 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期126-130,共5页
以茶苗嫩根为材料,采用SMART技术构建了cDNA文库并对其质量进行了鉴定。结果显示,该文库的重组率为92%,库容量为5×105,平均插入片段长度超过1 kb,是一个较高质量的文库。从文库中随机挑取克隆并从5′端单向测定2 651个克隆,获得2 ... 以茶苗嫩根为材料,采用SMART技术构建了cDNA文库并对其质量进行了鉴定。结果显示,该文库的重组率为92%,库容量为5×105,平均插入片段长度超过1 kb,是一个较高质量的文库。从文库中随机挑取克隆并从5′端单向测定2 651个克隆,获得2 600个有效的EST(expressed sequence tag),序列的平均长度为703 bp,用Phrap软件进行拼接,结果获得404个contigs、610个singlets。通过与NCBI的非冗余核酸数据库进行Blastx比对,初步确定已知功能基因734个,推定功能基因102个,未知功能基因178个。该结果既为进一步分离克隆茶树根部功能基因奠定了基础,又为以后的差异杂交获取茶树根部特定代谢途径的酶基因及相关的调控基因提供了平台。 展开更多
关键词 CDNA文库 嫩根 茶树 表达序列标签 测序
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猪带绦虫成虫cDNA质粒文库的构建及EST测序 被引量:14
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作者 黄江 胡旭初 +4 位作者 徐劲 余新炳 包怀恩 郎书源 廖兴江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1126-1128,共3页
目的构建猪带绦虫(Taeniasolium)成虫全长cDNA表达文库,为获取猪带绦虫成虫的基因信息,建立基因表达谱,并为筛选疫苗基因和诊断抗原基因奠定基础。方法提取猪带绦虫成虫mRNA,构建pBluescriptIISK全长cDNA质粒文库,测定扩增文库的滴度;... 目的构建猪带绦虫(Taeniasolium)成虫全长cDNA表达文库,为获取猪带绦虫成虫的基因信息,建立基因表达谱,并为筛选疫苗基因和诊断抗原基因奠定基础。方法提取猪带绦虫成虫mRNA,构建pBluescriptIISK全长cDNA质粒文库,测定扩增文库的滴度;用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建文库的质量。随机挑选质粒文库转化的阳性重组克隆,进行较大规模的5’端测序,归并unigene。结果文库库容达到1×106pfu/ml,插入片段的大小主要在1000bp以上。获得有效EST序列2000条,归并为1171条unigene。结论已成功获得一高质量的猪带绦虫成虫全长cD-NA表达文库,并获得了较丰富的成虫表达基因数据。 展开更多
关键词 猪带绦虫成虫 全长cDNA质粒文库 表达序列标签(est)
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利用GenBank中大量葡萄EST序列分离有效基因的电子表达分析平台 被引量:10
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作者 上官凌飞 王晨 +3 位作者 房经贵 李晓颖 王西成 宋长年 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期2748-2759,共12页
【目的】充分利用GenBank上的大量葡萄EST序列,建立本地化基因电子表达分析平台,实现基因表达模式的大规模快速分析。【方法】利用生物信息学方法对GenBank上的362 193条葡萄EST序列进行本地化及后续处理,建立电子分析平台,并通过RT-PC... 【目的】充分利用GenBank上的大量葡萄EST序列,建立本地化基因电子表达分析平台,实现基因表达模式的大规模快速分析。【方法】利用生物信息学方法对GenBank上的362 193条葡萄EST序列进行本地化及后续处理,建立电子分析平台,并通过RT-PCR技术对其电子分析准确性进行验证。【结果】建立了包含叶、花等11个组织类别和GA3等5个胁迫类型的基因电子表达分析平台。通过VvAG、VvCHS、VvF3H、VvLDOX等4个葡萄基因的RT-PCR和电子表达分析结果比较发现,平台预测效率较高,在预测EST来源数较多的果实、花序、花组织的表达效果较好,而对叶等EST来源较少的组织的预测效果需结合试验判断。随着dbEST库中源于葡萄各组织EST序列数量的大量增加,平台的预测效果将更加符合基因表达的实际情况。【结论】葡萄基因电子表达分析平台预测效率较高,为葡萄基因大规模快速表达分析以及重要相关信息的挖掘提供了很好的分析工具。 展开更多
关键词 葡萄 电子表达分析 表达序列标签(est) 生物信息学
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植物EST-SSR技术及其应用 被引量:21
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作者 姜春芽 廖娇 +3 位作者 徐小彪 辜青青 刘善军 陈金印 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期125-129,共5页
EST是指从EST cDNA文库中随机挑取克隆进行单轮自动测序所获得的短的、常常是未加编译的cDNA序列。目前,大约有200种植物共超过1500多万条的EST的序列,研究表明对EST进行大规模研究已成为功能基因组学研究的最佳途经之一。分析和比较ES... EST是指从EST cDNA文库中随机挑取克隆进行单轮自动测序所获得的短的、常常是未加编译的cDNA序列。目前,大约有200种植物共超过1500多万条的EST的序列,研究表明对EST进行大规模研究已成为功能基因组学研究的最佳途经之一。分析和比较EST序列就可以得到关于基因的表达、功能及进化信息,利用大量的EST序列已经成为发现新基因及了解植物新陈代谢一种简便有效的方法。通过介绍基于植物表达序列标签(EST)的微卫星(SSR)标记的研究现状,并对一些植物中利用EST-SSR标记在遗传图谱构建、遗传多样性、通用性等方面的应用进行了综合评述。同时也提出利用EST存在的一些不足及发展趋势。 展开更多
关键词 表达序列标签(est) 简单重复序列(SSR) est-SSR
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适用于大豆疫霉菌遗传分析的新EST-SSR标记 被引量:9
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作者 蔺宇 徐静静 +3 位作者 王晓鸣 武小菲 李彦舫 朱振东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期2294-2301,共8页
【目的】开发大豆疫霉菌SSR标记,为深入了解大豆疫霉菌遗传变异提供理想分析工具。【方法】用SSRIT软件对28197条大豆疫霉菌EST进行SSR搜索,选择含有SSR的合适EST设计、合成引物和PCR扩增。【结果】发现1454条EST含有SSR,其中3个碱基重... 【目的】开发大豆疫霉菌SSR标记,为深入了解大豆疫霉菌遗传变异提供理想分析工具。【方法】用SSRIT软件对28197条大豆疫霉菌EST进行SSR搜索,选择含有SSR的合适EST设计、合成引物和PCR扩增。【结果】发现1454条EST含有SSR,其中3个碱基重复基元类型最多,有855个,占鉴定总数的54.3%。设计合成140对引物,用10个大豆疫霉菌菌株基因组DNA进行PCR检测,有111对引物(79.3%)扩增出SSR特征条带。通用性检测表明有33对引物在检测的1个或多个其它疫霉菌或腐霉菌中产生扩增产物。【结论】大豆疫霉菌EST含有丰富的SSR位点,本研究从EST中开发了111个新大豆疫霉菌SSR标记,可有效地用于大豆疫霉菌及其相关种的遗传变异研究。 展开更多
关键词 大豆疫霉菌 表达序列标签(est) SSR标记 通用性
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尖镰孢EST-SSR信息分析及分子标记建立 被引量:8
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作者 李新凤 张作刚 +2 位作者 王建明 高俊明 田宏先 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第20期3982-3991,共10页
【目的】探讨尖镰孢(Fusarium oxysporum)表达序列标签(expressed sequence tag,EST)序列中简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)位点的分布特点,开发尖镰孢EST-SSR引物,为镰孢菌遗传多样性分析提供技术支持。【方法】从NCBI公共... 【目的】探讨尖镰孢(Fusarium oxysporum)表达序列标签(expressed sequence tag,EST)序列中简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)位点的分布特点,开发尖镰孢EST-SSR引物,为镰孢菌遗传多样性分析提供技术支持。【方法】从NCBI公共数据库下载尖镰孢EST 9 304条,利用SSRIT软件查找SSR位点,Primer Premier 5.0软件设计EST-SSR引物,用非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离SSR-PCR扩增产物,并选用能够扩增出与预期产物大小一致且具有多态性的引物,对23株尖镰孢菌株进行SSR遗传多样性分析。【结果】在尖镰孢EST序列中,共搜索到92个SSR位点,分布于90条EST序列中,出现频率为1.0%。其中二核苷酸重复类型是最主要的SSR类型,占总SSR的比例为59.78%。其次为三核苷酸与五核苷酸重复类型,占总SSR的比例分别为17.39%、11.96%。出现频率最高的基序是(AC/GT)(0.51%)。设计合成的30对引物中有20对(66.7%)能够有效扩增,其中14对引物(46.7%)能够扩增出与预期产物大小一致且具有多态性的产物。尖镰孢的遗传多样性分析结果表明,利用筛选出的14对引物扩增出62条条带,其中多态性条带59条,多态性位点比例为95.2%,平均每对引物可扩增4.2条。供试菌株间的遗传相似系数为0.487—0.933,平均为0.686。供试菌株间存在明显的遗传分化。聚类分析结果表明,当遗传相似系数为0.781时,除14号菌株外,所有菌株均根据寄主来源划分为不同的SSR类群。【结论】基于尖镰孢EST序列开发SSR标记是一种简便有效的方法,研究开发的14对引物可用于尖镰孢的遗传多样性分析。 展开更多
关键词 尖镰孢 表达序列标签 简单重复序列 遗传多样性
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紫贻贝EST-SNP的筛选及多态性检测 被引量:8
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作者 李宏俊 梁瑜 +4 位作者 邢坤 苏浩 高祥刚 隋立军 赫崇波 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期348-355,共8页
利用EST数据库开发SNP是筛选SNP标记的重要途径。本研究利用EST数据库开发紫贻贝的SNP标记,利用QualitySNP软件对紫贻贝已有的19 709条EST序列中含有4条以上同源序列的重叠群进行分析,在含有4条以上同源序列的963个重叠群中,筛选得到候... 利用EST数据库开发SNP是筛选SNP标记的重要途径。本研究利用EST数据库开发紫贻贝的SNP标记,利用QualitySNP软件对紫贻贝已有的19 709条EST序列中含有4条以上同源序列的重叠群进行分析,在含有4条以上同源序列的963个重叠群中,筛选得到候选SNP位点4 833个,SNP的平均频率为129.1 bp,其中C/T和A/G突变较多,分别占总数的28.8%和27.4%。根据候选SNP位点设计30组引物,通过等位基因特异性PCR结合溶解曲线分析,在30个野生个体中进行基因分型验证,6组引物(20%)没有扩增产物,10组引物(33%)没有多态性,14组(47%)引物具有二等位基因多态性,稀有等位基因的频率为0.083~0.446,观测杂合度和期望杂合度的范围分别为0.166 7~0.615 4和0.155 4~0.503 2。序列比对结果显示,14组引物中的12个SNP位点位于基因编码区,并且全部为同义突变。研究结果表明,EST数据库中存在大量的SNP位点,差异熔解曲线法是一种高效便捷的SNP分型方法,所筛选的SNP标记可用于紫贻贝遗传学分析。 展开更多
关键词 紫贻贝 单核苷酸多态性 表达序列标签 等位基因特异性PCR 熔解曲线
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