串联抑制素基因免疫诱导绵羊孪生的研究

为了研究串联抑制素基因免疫对绵羊孪生的影响，以猪抑制素α（1～32）基因及绵羊补体C3d基因作为选择基因，利用RT-PCR技术构建串联抑制素重组质粒，并对60只绵羊进行免疫试验。结果表明：串联抑制素重组质粒pcDNA-DPPISS-DINH和pcDNA-DPPISS-DINH-sC3d3构建正确，并在BHK-21细胞中获得了分泌型表达。重组质粒pcDNA-DPPISS-DINH和pcDNA-DPPISS-DINH-sC3d3免疫绵羊后，双羔率分别为12.5%和25.0%，均与对照组间差异显著（P〈0.05）。串联抑制素重组质粒的成功构建，为抑制素基因疫苗的研制提供了理论依据和技术支撑。

串联抑制素重组质粒的构建

根据GenBank中报道的猪抑制素基因序列设计两对引物，克隆含有抑制素抗原决定簇基因片段α（1～32）的p1INH和p2INH，在这两个片段中都设有限制性内切酶XbaⅠ的酶切位点，通过XbaⅠ把plINH与p2INH串联起来。串联抑制素基因片段与pcDNA3．1载体通过EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点连接后经过转化DH5a感受态细菌构建重组载体。以重组载体作为模板，以含有EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点的引物进行PCR，产物经验证为含串联的抑制素基因。串联的抑制素基因产生的融合蛋白具有抑制素的免疫原性，且不会与体内其他蛋白发生免疫交叉反应。串联后的基因片段在单位体积内的抗原位点数增多，免疫效果也会加强。可以反馈性地抑制FSH的分泌，提高母畜的排卵数，提高产仔数。