双黄连注射液不良反应样品筛查方法研究

目的:建立双黄连注射液不良反应样品筛查方法,为产品质量控制、临床安全用药提供参考。方法:采用鞣质检测和细胞响应谱法对双黄连注射液正常与不良反应样品进行筛查,以改良干酪素法进行鞣质检测,另选取肥大细胞RBL-2H3作为模式生物,使用xCELLigence实时细胞分析系统对双黄连注射液诱导的RBL-2H3脱颗粒效应进行了实时监测。结果:鞣质检测无法有效区分正常样品与不良反应的样品,细胞响应谱法可准确分辨不良反应样品。结论:基于肥大细胞脱颗粒效应的细胞响应谱方法操作简便、高通量、准确可靠,为双黄连注射液质量控制和临床安全用药提供参考。

巴西橡胶树树皮单宁细胞结构和发育

利用光学和电子显微镜技术,对巴西橡胶树树皮中单宁细胞的形态结构和发育过程进行研究。结果表明:除伴胞外,次生韧皮部中几乎所有的薄壁细胞都含有单宁类物质,乳管周围的薄壁细胞中尤其易积累单宁,石细胞和周皮中的木栓层以及栓内层细胞中也有大量单宁积累。电镜下,单宁细胞中央大液泡中积累的单宁可分为絮状、不规则状、颗粒状和板块状4种类型。在单宁细胞发育过程中,单宁首先在细胞质中产生,中央大液泡形成后则成为积累单宁的主要场所并最终被单宁类物质充满。机械伤害、强割、外施乙烯利以及茉莉酸(JA)都能大幅提升单宁类物质的积累,可见橡胶树对这些因子都能做出防御性应答。

柿单宁细胞形态特征及发育动态研究

观察了4个类型(PCNA,PVNA,PCA,PVA)103个柿品种果实中单宁细胞的形态特征。结果表明,单宁细胞与果肉细胞不论是否染色均有明显区别,即使在花期子房中单宁细胞与果肉细胞也能明显区分;单宁细胞随着果实发育而增大;不同品种不同果实及同一果实内,单宁细胞的外形、大小、表面特征表现得多种多样,成熟果实软化后的单宁细胞形状大致可分为6类,即细长形、长形、椭圆形、近圆形、多角形、尖头形;单宁细胞的表面形态也分为棘刺状、瘤状、凹陷状和自然平滑状。成熟果实中单宁细胞的大小是幼果期单宁细胞的3倍左右;在果实中,单宁细胞主要存在于中果皮,中果皮的单宁细胞无论何种形状,均较外果皮中形状相似的单宁细胞大2倍左右;除以单个分散形式存在外,在有些品种中单宁细胞以单宁细胞束或单宁细胞团的形式存在。完全甜柿与完全涩柿单宁细胞的发育动态不尽相同。

单宁细胞形态与部分柿属种及品种相关性研究

采用软柿果肉直接压涂法,在光学显微镜下对204个柿属种及品种果实中的单宁细胞形态特征进行观察分析.结果显示:(1)在6个种柿属植物果实中,均含有单宁细胞,其外形大多属于短形和近圆形,但在数量、大小和颜色上存在差异,其中,油柿(Diospyros oleifera Cheng.)、君迁子(D.lotus Linn.)、柿(D.kaki Thunb.)、浙江柿(D.glaucifolia Metc.)的单宁细胞通常无色,而黑柿(D.nitida Mcrr.)为黄绿色,乌材(D.eriantha Champ.)为紫红色,乌柿(D.eathayensis Stheward.)为淡紫色;单宁细胞从大到小依次为油柿>君迁子>浙江柿>乌材>黑柿>乌柿.(2)单宁细胞在不同品种类型间差异明显,其中涩柿单宁细胞多为无色,单宁细胞比较宽大;甜柿品种均会出现褐变的单宁细胞,单宁细胞较小或瘦长;完全甜柿品种大多存在着凝固型褐变单宁细胞,仅少数凝聚呈球形,且单宁细胞分散存在于果肉中,果肉中的褐斑较细小;不完全甜柿在种子周围的褐斑处,可以看到大量的表面凹形且褐变的收缩型单宁细胞,且常以单宁细胞束的形态存在于果肉中,使果肉中的褐斑大而密;原产我国的完全甜柿中不存在凝聚型的单宁细胞,只有凝固型的单宁细胞.(3)聚类分析结果表明,单宁细胞的特征可以作为不同类型柿属种的分类依据.

柿自然脱涩能力与单宁细胞发育规律的研究

研究了三种不同甘、涩类型柿果实中可溶性单宁含量、单宁细胞和薄壁细胞发育规律，结果表明：完全甜柿和不完全甜柿的主要脱涩期明显不同，前者在果实发育的早期，后者在近熟期；完全甜柿自然脱涩主要是由于薄壁细胞的持续增大和单宁细胞的早期停止发育，造成单宁细胞占果肉面积比下降所致，而不完全甜柿的树上脱涩主要依赖果实成熟前单宁的凝固作用。在涩柿中这两种机制都不存在，因而不能自然脱涩。在杭州地区，细胞发育及脱涩过程略早于原产地。

涩柿生长、脱涩及返涩单宁细胞形态的变化

以甜柿为对照 ,观察了涩柿 (牛心柿 )在生长、脱涩和返涩中单宁细胞的形态变化。结果表明 :涩柿单宁细胞在生长期体积不断增大 ,数量不断增多 ,涩味加强 ,在 9月初细胞停止生长 ;4种不同方法脱涩的柿 ,其单宁细胞的变化基本相同 ,都是体积缩小 ,最后变成疏散的小颗粒 ;返涩的柿 ,单宁从单宁细胞中溢出 ,呈网状结构分布于果肉组织中。

粗叶悬钩子Rubus aleaefolius Poir.中三个新的细胞周期抑制剂 :一个新的和两个已知的水解鞣质(英文)

通过跟踪分离活性成分 ,从粗叶悬钩子RubusaleaefoliusPoir .中分到一个新的鞣花酸鞣质化合物 1和两个已知的没食子酸鞣质 1,2 ,3,6 tetra O galloyl β D glucopyranose(2 )和 1,2 ,3,4 ,6 penta O galloyl β D glucopyranose(3) ,并通过谱学手段确定了新化合物 1的化学结构。化合物 1～ 3将tsFT2 10癌细胞的细胞周期抑制在G0 /G1期 ,MIC值分别为2 2 1μmol·L-1(1) ,7 9μmol·L-1(2 )和 6 6 μmol·L-1(3) ,系三个新的G0 /G1期抑制剂。化合物 1～ 3作为鞣质类化合物的细胞周期抑制剂亦属首例 。

超声波细胞破碎法提取香蕉皮中水解单宁的工艺研究

以香蕉皮粉末为原料,用超声波细胞破碎法提取水解单宁。选取有机溶剂种类、料液比、体积分数、提取时间和超声功率作为影响因子,以水解单宁的提取率作为响应值,进行单因素实验,在此基础上进行Box-Behnken设计和响应面分析。结果表明,香蕉皮中水解单宁的最佳提取工艺条件为料液比1∶30(g/mL)、丙酮体积分数50%、提取时间15min、超声功率120 W,提取率的预测值为78.03%,实际值为78.11%,说明响应面分析能够很好地对香蕉皮中水解单宁的提取工艺进行优化。

荔枝泥蜂透翅蛾发生为害与不同龙眼品种的关系

通过对广西13个龙眼品种调查及对龙眼树皮的测定分析,明确了荔枝泥蜂透翅蛾(Sphecosesialitchivora)对龙眼不同品种为害有选择性,其中东壁、乌龙岭、普明庵3个品种受害较重,而目前广西推广种植的大乌圆、石硖、储良等品种受害仍较轻;不同龙眼品种受害轻重与其树皮的厚薄、树皮中含石细胞团平均厚度、石细胞团占树皮横切面积及含单宁细胞所占树皮横切面积比例大小有关.龙眼品种树皮越厚,石细胞团厚度越小、石细胞团及单宁细胞占树皮横切面积比例越小者,受害越重.

地榆鞣质抗肝癌细胞SMMC-7721的MTT及FCM分析

目的：探讨中药成分地榆鞣质（STM，STL）的抗癌活性，并试图建立一种筛选抗癌药物的方法．方法：运用MTT法测定STM及STL对体外培养人肝癌SMMC－7721细胞的杀伤率井通过流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象DNA变化．结果：STM与STL均有明显抗癌活性，与阴性对照组相比有显著差异（P＜0．01），并具有剂量效应关系（RM=0．9615，RL=0．9531）；STM，STL与MMC联合用药抗癌活性显著增强，与单独用药组相比差异显著（P＜0．01）；流式细胞仪（FCM）分析人肝癌细胞分裂周期各时象DNA变化显示，药物作用后S期细胞明显减少，增殖指数（PI）降低，并诱导出凋亡峰（AP峰）．结论：ST的抗癌作用可能是多方面的，FCM的测定技术为筛选抗癌中药提供新的方法．

不同品种柿树果实发育中期的单宁细胞观察

以君迁子和美国柿为对照,在果实发育中期,对41个柿品种、45个样品的果实内单宁细胞,进行了组织学镜检。结果表明,一般甜柿较涩柿的单宁细胞数目少,个小,横径/纵径指数小。从果实顶部到基部,单宁细胞的横径变化不显著,但纵径从小到大,横径/纵径指数由大到小,甜柿一般较涩柿变化明显。作为砧木的君迁子和美国柿,果实内单宁细胞数量为普通柿的3～7倍,横径/纵径指数在0.7以上,但果实不同部位差异很小。

鸡血藤提取物中缩合鞣质的含量测定及其抗肿瘤活性初步研究

对鸡血藤/φ=60%醇提物及不同极性溶剂萃取物中总黄酮和缩合鞣质含量进行测定,并测定它们对肿瘤细胞增殖的抑制活性。采用紫外分光光度法测定各样品中总黄酮含量;采用香草醛硫酸法测定各样品中缩合鞣质含量,结果显示,鸡血藤/φ=60%醇提物、乙酸乙酯不溶物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水层留余物的总黄酮含量分别为(6.49±1.99)%、(7.36±0.13)%、(9.35±0.22)%、(8.41±0.27)%、(4.48±1.53)%;缩合鞣质含量分别为(51.09±0.37)%、(52.34±4.73)%、(73.22±2.72)%、(83.11±5.87)%、(29.74±2.12)%。采用MTT法测定各样品对乳腺癌MCF-7和结肠癌HT-29细胞增殖的抑制活性,结果不同样品对HT-29和MCF-7细胞增殖表现出不同程度的抑制活性,其中正丁醇萃取物对肿瘤细胞增殖的抑制活性最强。

藏药余甘子鞣质部位对人肿瘤细胞凋亡与周期的影响

目的研究藏药余甘子鞣质部位的体外抗肿瘤作用机制。方法余甘子鞣质部位40、80、160μg·m L-1作用于人肿瘤A549及BEL-7402细胞48 h,MTT法测定剂量反应曲线;倒置相差显微镜下观察两种细胞形态学的变化;流式细胞术测定细胞周期及凋亡的情况。结果不同浓度的余甘子鞣质部位作用48 h对A549和BEL-7402细胞均表现明显的细胞毒作用;倒置镜下可见加药组细胞生长受到明显抑制,细胞收缩变小;流式细胞术测定发现余甘子鞣质部位具有显著的诱导细胞早期凋亡和G2/M期阻滞作用。结论余甘子鞣质部位可通过诱导肿瘤细胞凋亡和对细胞周期阻滞而发挥其体外抗肿瘤作用。

柿果实单宁细胞特征与总酚和缩合单宁含量的关系

自1981年以来,Haslam等学者认为植物单宁属于多酚类化合物,即存在于柿（Diospyros kaki）果实使其呈涩味的酚类物质称为柿单宁（张宝善等,2008）,并将植物单宁改称为植物总酚。植物总酚已经广泛应用于医学、食品工业、日化工业、制革工业、冶金工业、环境污染治理等领域（张宝善等,2008;石闪闪等,2012）。

植物单宁及其对牧草品质的影响研究进展Ⅰ.植物单宁的性质与作用

介绍了植物单宁的分类与结构、合成途径及关键酶、单宁的细胞形态学特征及单宁的生理作用的研究进展。

柿鞣质水提取液对牙周膜细胞增殖的影响

背景:柿果实中含有丰富的鞣质类物质,鞣质具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、保护黏膜及收敛等多重种功效,其在口腔领域的实用性和安全性已得到多方面的认证。目的:观察不同浓度的柿鞣质水提取液对牙周膜细胞增殖的影响。方法:将青少年因正畸需要拔除的前磨牙放置于无菌的含有DMEM培养基中,体外培养牙周膜细胞。对全柿果实进行超声提取,牙周膜细胞与不同质量浓度(0.013 3,0.025 9,0.038 9,0.088,0.147,0.440,0 g/L)的柿鞣质水条件培养液分别培养24,48,72 h后,采用MTT法、考马斯亮蓝法和碱性磷酸酶法分别观察不同质量浓度柿鞣质水提取液在不同时间点对牙周膜细胞数量、细胞总蛋白合成以及细胞活性的影响。结果与结论:在24,48,72 h 3个时间点,各质量浓度柿鞣质水提取液(0.013 3,0.025 9,0.038 9,0.08 8,0.147及0.440 g/L)均能促进人牙周膜细胞数量增长,促进蛋白质的合成,并使得细胞活性增强,且效应呈浓度依赖性和时间依赖性。结果提示柿鞣质水提取液具有促进人牙周膜细胞增殖的作用。

山茱萸果实发育过程中单宁物质的分布与积累特征

选取不同发育时期的山茱萸果实作为研究对象,采用果实形态观察法、显微及超微技术、组织化学定位法以及紫外分光光度计法对山茱萸果实发育过程中单宁物质分布及积累特征进行观察分析,并以单因素ANOVA检验不同发育时期单宁含量的差异,以揭示单宁物质在山茱萸果实发育中的变化规律,为山茱萸果实涩味调控机制研究提供理论依据。结果表明:(1)山茱萸果实发育过程中果皮颜色和果实体积变化明显,可将其发育过程划分为幼果期、中果期、成熟期3个时期;单宁物质主要分布在山茱萸果实中果皮的单宁细胞中。(2)在山茱萸果实发育过程中单宁细胞数目呈先增后减的变化趋势,幼果期单宁细胞从无到有,随着果实发育单宁细胞数目不断增多,至中果期单宁细胞数目开始减少。(3)单宁含量的变化规律与单宁细胞数目的变化一致,单宁含量在花后120 d时达到最多,随后逐渐减少。(4)单宁物质首先在细胞质的小液泡中积累,中央大液泡形成后则为单宁物质积累的主要场所,其积累形态主要有颗粒状、不规则状和板块状3种;单宁细胞中线粒体数目较多,中果期后期及成熟期在中央大液泡液泡膜附近有电子致密物质积累。研究认为,山茱萸果实中中果皮薄壁细胞为单宁物质积累的专属细胞,即单宁细胞,单宁物质的合成运输与液泡、囊泡以及线粒体的作用密切相关;成熟期山茱萸果实总单宁含量降低,涩味降低,表明单宁物质积累的动态变化与植物对环境的适应性和果实涩味息息相关,可结合代谢组和转录组的方法对山茱萸果实中单宁物质的合成机制进行进一步研究。

单宁酸对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响

研究旨在探讨单宁酸对猪卵母细胞体外成熟质量及其胚胎发育能力的影响。在猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)体外成熟培养液中添加不同浓度(0、1、10、100μg/mL)单宁酸培养42 h后,检测COCs的扩散程度和卵丘细胞扩散指数,统计COCs的体外成熟率,检测成熟卵母细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)和生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)的水平,并统计孤雌激活及体外受精胚胎48和168 h的卵裂率、囊胚率及囊胚总细胞数。结果显示,与对照组相比,10μg/mL单宁酸组卵丘细胞扩散指数显著提高(P<0.05),100μg/mL单宁酸组显著降低(P<0.05);1和10μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),100μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率显著降低(P<0.05);1和10μg/mL单宁酸组GSH和GDF9水平显著提高(P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.05)。孤雌胚胎和体外受精胚胎发育能力结果显示,与对照组相比,各单宁酸组卵裂率差异不显著(P>0.05),10μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚率及体外受精胚胎囊胚率显著提高(P<0.05),100μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚细胞数及体外受精胚胎囊胚细胞数均显著低于其他各组(P<0.05)。以上结果表明,10μg/mL单宁酸可通过提高卵丘细胞扩散能力及GSH和GDF9水平、降低卵母细胞内ROS水平,改善猪卵母细胞成熟质量,提高孤雌胚胎及体外受精胚胎的发育能力。

酶处理方式对模拟酒中蓝莓细胞壁吸附单宁的影响

为探究水解酶(果胶酶、纤维素酶)的不同添加方式(单独、顺序和同时添加)对蓝莓细胞壁结构及其吸附单宁能力的影响,采用扫描电镜(SEM)、甲基纤维素沉淀法和高效液相色谱法(HPLC)分别对细胞壁多糖的结构、单宁的含量和组成进行分析。结果表明,酶处理后模拟溶液中半乳糖醛酸和总糖的含量较未添加酶处理显著增加(P<0.05),单宁吸附率显著下降(P<0.05)。相比于其他添加方式,同时添加果胶酶和纤维素酶溶液中的半乳糖醛酸和总糖含量最高,分别为16.52 mg/g和2.93 mg/g,细胞壁对单宁的吸附率最低为30.4%,溶液中剩余单宁的平均聚合度最高为4.03。扫描电镜观察发现,在顺序添加方式中,优先添加果胶酶再添加纤维素酶使蓝莓细胞壁分解得更破碎。

鞣料云实酸治疗胆汁淤积的分子机制研究

目的探讨鞣料云实酸在体外通过法尼酯衍生物X受体(FXR)相关通路对肝内胆汁淤积的改善作用。方法用不同浓度(25、50、100μg/mL)的鞣料云实酸处理LO2细胞。在细胞实验中,FXR表达由慢病毒转导或GW4064处理上调,由siRNA技术或guggulsterones治疗下调。采用实时PCR和Western blot检测FXR、SHP1、SHP2、CYP7A1、NTCP的mRNA和蛋白水平。结果鞣料云实酸增加了FXR、SHP1、SHP2的mRNA和蛋白表达水平,并降低了CYP7A1、NTCP的mRNA和蛋白表达水平。在使用不同的方法对FXR进行上调或下调后,鞣料云实酸仍然可以增加FXR、SHP1、SHP2的mRNA和蛋白表达水平,同时降低CYP7A1和NTCP的蛋白表达水平,特别是在高浓度的时候。结论鞣料云实酸在肝细胞中发挥保护作用,可以通过刺激FXR相关的通路阻止肝内胆汁淤积的有害活动。