基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS结合分子网络的炮制前后石榴皮化学成分分析

目的:分析生石榴皮、石榴皮炭化学成分及差异性成分。方法:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)采集数据,借助GNPS平台分析并生成可视化分子网络图,根据高分辨质谱精确分子量及碎片信息、对照品、文献、在线数据库等鉴定化学成分,利用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)进行模式识别筛选差异性化学成分。结果:共鉴定出86种化合物,含鞣质类42种,黄酮类29种,酚酸类10种,其他类5种,其中13个化合物为首次在石榴皮中发现;PCA、OPLS-DA结果表明石榴皮炮制前后化学成分存在明显差异,共筛选出22个炮制前后差异性化学成分。结论:该研究建立了一种快速、全面表征石榴皮及其炮制品化学成分的方法,为探讨石榴皮炮制机制提供了基础。

石榴皮水提物对猪源多重耐药大肠杆菌的抑菌作用研究

【目的】筛选腹泻仔猪中携毒力基因且多重耐药的大肠杆菌菌株,评估中药水提物对该菌株的抑菌活性,并探索中药抑菌机制。【方法】通过PCR方法与Kirby-Bauer(K-B)药敏纸片法评估临床大肠杆菌菌株的肠毒素基因携带情况和耐药性;通过微量肉汤稀释法评估中药水提物对多重耐药大肠杆菌菌株的抑菌活性,确定最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC);通过电导率仪以及相关试剂盒检测评估石榴皮水提物对多重耐药菌株作用不同时间后菌液电导率、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)含量及菌体内ATP含量的变化;通过SDS-PAGE和蛋白含量检测评估菌体内可溶性蛋白的含量变化;通过扫描电镜观察大肠杆菌形态变化。【结果】PCR检测14株临床大肠杆菌中肠毒素基因携带率达到78.57%,抗生素药敏试验结果显示,所有菌株至少对2种抗生素耐药,均属于多重耐药菌株。中药药敏试验结果显示,黄连、黄芩、石榴皮水提物对多重耐药菌株抑菌活性较好,其中石榴皮水提物的MIC和MBC分别为31.25和62.5 mg/mL。石榴皮水提物在1/2MIC和MIC浓度下能显著抑制质控菌株和多重耐药菌株的生长繁殖。在石榴皮水提物作用大肠杆菌3 h内,菌液电导率相比于对照组极显著上升(P<0.01)。AKP与ATP检测结果显示,与对照组相比,石榴皮水提物在作用大肠杆菌6 h内,菌液中AKP含量极显著增加(P<0.01),菌体内ATP含量极显著降低(P<0.01)。SDS-PAGE和蛋白含量检测结果显示,随着石榴皮水提物刺激时间增加,菌体内可溶性蛋白含量减少。扫描电镜结果显示,石榴皮刺激后菌体形态发生碎裂和溶解。【结论】本研究结果表明,石榴皮水提物能显著抑制多重耐药且携带肠毒素基因的大肠杆菌生长,为临床治疗大肠杆菌性仔猪腹泻提供理论参考和药物开发依据。

石榴皮阴道栓剂的毒理学实验研究

石榴皮水提液急性毒性试验结果显示，大鼠口服给药ＬＤ＿（５０）为４．７８５ｇ／ｋｇ；小鼠腹腔给药ＬＤ＿（５０）。为７９９．９９ｍｇ／ｋｇ。生殖毒性试验无致突变作用和致畸现象。作为局部阴道给药的石榴皮栓剂，药物吸收量小，毒性程度更低，且长期毒性多指标观察未见明显毒性反应。局部短期和长期刺激试验提示，中、小剂量石榴皮栓剂对阴道粘膜无影响，可推荐临床应用。

石榴皮多糖提取过程的动力学分析

目的以动力学模型分析热水浸提石榴皮多糖的参数值。方法石榴皮石油醚脱脂后不同温度条件下进行恒温提取多糖,以总糖和还原糖为检测指标,求解提取动力学的速率常数k、相对萃余率、表面扩散系数DS、表观活化能Ea和半衰期t1/2等数值。结果石榴皮多糖提取过程的动力学基本符合一级动力学方程。提取系统温度越高,石榴皮多糖质量浓度达到平衡所需要的时间越短,k值和DS值呈现逐渐增大的趋势,相对剩余量下降越快,Ea值大体上呈现下降趋势,t1/2值均随之减小。结论所得石榴皮多糖提取动力学参数值提示溶质的内扩散为浸提过程的关键控制步骤。

石榴皮鞣质对大鼠肝药酶活性的影响

目的:研究石榴皮鞣质对正常大鼠肝药酶活性的影响。方法:将30只Wistar大鼠随机分为5组:空白对照组,石榴皮鞣质高、中、低剂量组,苯巴比妥钠阳性对照组。空白对照组给予生理盐水,石榴皮鞣质高、中、低剂量组分别按150,100,75mg·kg^(-1)·d^(-1)连续灌胃给药7 d,苯巴比妥钠组给予苯巴比妥钠注射液,按80 mg·kg^(-1)·d^(-1)连续腹腔给药5 d。实验结束后采用UV法测定各组大鼠肝脏微粒体中Ⅰ相代谢酶和Ⅱ相代谢酶活性。结果:与空白对照组相比,石榴皮鞣质高、中、低剂量组均能降低细胞色素P450(CYP450)总蛋白和细胞色素b5(CYPb5)含量及抑制氨基比林N-脱甲基酶(ADM)活性,差异有统计学意义(P<0.01);石榴皮鞣质高、中剂量组能显著抑制红霉素N-脱甲基酶(ERD)活性,差异有统计学意义(P<0.01);石榴皮鞣质高剂量组能显著降低谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:石榴皮鞣质对正常大鼠肝药酶活性具有一定抑制作用,能降低CYP3A和CYP2E1的表达,且与给药剂量有关。

新疆石榴皮HPLC指纹图谱研究

目的建立新疆石榴皮HPLC指纹图谱。方法采用Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%三氟乙酸溶液,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长370 nm,进样量10μL,测定12批石榴皮样品,运用相似度分析软件建立石榴皮指纹图谱共有模式,并对色谱峰进行指认。结果建立了石榴皮HPLC指纹图谱,标定了18个共有峰,3个色谱峰得到指认,分别为α-安石榴苷、β-安石榴苷、鞣花酸。结论本研究建立的石榴皮HPLC指纹图谱方法稳定可行,可用于控制石榴皮质量。

石榴皮、石榴子质量标准提高研究

目的:提高石榴皮、石榴子的质量标准。方法:采用显微鉴别法、薄层色谱法鉴别石榴子药材;按照《中国药典》2010年版(一部)附录方法,测定石榴子药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含量;采用HPLC法测定石榴皮、石榴子的鞣花酸含量。结果:确定了石榴子药材的显微特征,建立了石榴子的薄层鉴别方法,建立了石榴皮、石榴子的鞣花酸含量测定方法。结论:本研究建立的定性、定量方法,可用于石榴皮、石榴子药材质量控制。

石榴皮多酚提取物的制备工艺研究

目的探索石榴皮多酚提取物的最佳制备工艺。方法以总酚和鞣花酸含量为指标,采用静态吸附-解吸方法,考察17种大孔吸附树脂的吸附-解析效果,并系统研究大孔树脂动态吸附性能及洗脱参数。结果 HPD-300型大孔吸附树脂分离效果最好,以2BV/h吸附速率吸附在径高比为1∶6的树脂柱上;上柱量为12BV(树脂床体积);吸附好的树脂先用4BV水,以5BV/h的流速洗净树脂,再用6BV的60%乙醇进行洗脱效果最佳。经HPD-300型树脂处理后的石榴皮提取物总酚含量可达到70%,鞣花酸含量为4.6%。结论该法简单易行,周期短,成本低,所得多酚纯度高。

复合酶提取石榴皮中原花青素工艺优化及其动力学模型建立

目的优化复合酶(纤维素酶-果胶酶)提取石榴皮中原花青素的工艺,并建立其动力学模型。方法以原花青素得率为评价指标,Plackett-Burman设计筛选影响因素,Box-Behnken设计对加酶量、酶解温度和酶解时间进行优化。建立4种提取工艺的动力学模型(Allometric1、Expdec1、Logistic、Sweibull1),通过精准因子(A)、偏差因子(B)、根平均方差(RMSE)、决定系数(R2)分析模型的适用性。结果最佳条件为加酶量1.5%、酶解温度48℃、酶解时间270 min,原花青素得率为1.88%。Logistic模型和Sweibull1模型拟合精度均较高,并且后者在最佳酶解温度(48℃)下预测效果更好。结论所建立的优化条件和动力学模型均可用于石榴皮中原花青素提取工艺的工程放大和优化控制。

诃子·石榴皮提取物对家兔离体肠管运动的对比试验研究

[目的]探索不同剂量诃子、石榴皮提取物对家兔离体肠管运动的影响。[方法]采用离体肠管试验法,将家兔的十二指肠、空肠和回肠置于加有台氏液的麦氏浴皿内,然后注入不同剂量的诃子、石榴皮提取物,使溶液终浓度为5、10、20、30、40、50mg/ml,观察离体肠管运动的反应。[结果]诃子和石榴皮提取物均能抑制肠管的运动,使其张力降低,收缩频率减小。相同浓度的诃子和石榴皮提取物对不同部位肠管的运动影响存在差异,浓度增加其影响增大;石榴皮提取物对肠管运动的影响较诃子提取物弱。[结论]探明了2种药物对小肠平滑肌运动的影响,可为诃子和石榴皮的临床应用提供可靠的生理学依据。

石榴皮半仿生提取工艺的优化

目的优化石榴皮半仿生提取工艺。方法在均匀设计基础上,以一煎pH、二煎pH、三煎pH、提取总时间为影响因素,鞣花酸、没食子酸、总酚含量及干浸膏得率的综合评分为评价指标,AHP-CRITIC混合加权法优化提取工艺。结果最佳条件为一煎pH 6.0,二煎pH 7.4,三煎pH 9.0,提取总时间4.0 h,综合评分为1.251 8。结论该方法合理稳定,重复性好,可用于半仿生法提取石榴皮。

石榴皮泡腾颗粒剂的研制

[目的]研究石榴皮泡腾颗粒剂的制备工艺。[方法]采用超声法提取石榴皮,以乙醇浓度、提取次数、料液比和提取温度为因素,以总黄酮的含量为指标,采用L9(34)正交试验优选最佳提取工艺参数;将提取物精制,浓缩,加辅料混合制成泡腾颗粒,并检测泡腾颗粒的休止角、水分、溶化性和粒度。[结果]超声提取法的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%、提取1次、料液比1∶25(g/ml)、提取时间30 min;颗粒剂处方为:石榴皮稠膏10 g、乳糖74 g、蔗糖46 g、柠檬酸33 g、碳酸氢钠25 g、聚乙二醇6000 14 g、浓度70%乙醇适量;制得的颗粒休止角为29.6o,流动性好,颗粒剂水分、粒度和溶化性均符合药典规定。[结论]石榴皮泡腾颗粒的制备工艺简便,质量稳定、可控,适合于工业化生产。

石榴皮和松子壳中抑菌物质最佳提取条件的研究

目的以水为浸提溶剂,选择不同的石榴皮和松子壳比例、料液比、提取温度和时间4个因素进行试验,研究石榴皮和松子壳中抑菌物质的最佳提取条件。方法采用牛津杯法,设置双层培养基,通过测量抑菌圈直径研究石榴皮和松子壳混合提取液对大肠杆菌(革兰阴性菌)和枯草芽孢杆菌(革兰阳性菌)的抑制作用。结果石榴皮和松子壳中抑菌物质的最佳提取条件为:石榴皮和松子壳的比例3:1、料液比1:5、温度50℃、提取时间4 h。结论石榴皮和松子壳提取物有一定的抑菌效果,将其作为天然防腐剂应用于食品是可行的。

石榴皮鞣质改善慢性肾小球肾炎大鼠的尿液代谢组学的通路分析

目的:探讨石榴皮鞣质改善慢性肾小球肾炎大鼠尿液代谢组学的通路。方法:运用KEGG数据库进行信号通路分析,用HMDB数据库对代谢产物分子注释、相关的酶或转运蛋白及其相关性质进行分析,Met PA网络软件对代谢产物路径进行可视化作图。结果:12个差异性代谢产物共参与了16条代谢途径,其中"色氨酸代谢"、"三羧酸循环"、"苯丙氨酸代谢"、"半胱氨酸和甲硫氨酸代谢"的代谢通路影响显著(P<0.05)。结论:石榴皮鞣质干预下的慢性肾小球肾炎大鼠中"色氨酸代谢"、"三羧酸循环"、"苯丙氨酸代谢"、"半胱氨酸和甲硫氨酸代谢"发生变化参与其病理过程。

天然植物提取物光毒性评价研究

为探讨4种植物提取物石榴皮提取物、黄岑提取物、银杏叶提取物以及西洋参提取物的紫外吸收特征及其光毒性,利用紫外吸光光度法对这4种植物提取物的紫外吸收特征进行了研究,并利用体外3T3细胞中性红摄取光毒性试验对其急性光毒性进行评价。结果发现石榴皮提取物、银杏叶提取物、黄岑提取物以及西洋参提取物均对紫外线有不同程度的吸收作用,且银杏叶提取物、黄岑提取物的PIF值分别为0.61和1.15,石榴皮提取物和西洋参提取物的>PIF值分别为0.59和0.93。4种植物提取物均具有不同程度的紫外吸收作用,且不具有光毒性,显示了在防晒化妆品中的良好应用前景。

石榴皮水提物的镇痛实验研究

探讨石榴皮水提物的镇痛作用。采用小鼠热板法、小鼠醋酸扭体法和小鼠热水甩尾法,观察经胃给予0.06、0.6、6和12 mg/ml四种浓度的石榴皮水提物的镇痛作用。结果表明:0.6、6和12 mg/ml三种浓度的石榴皮水提物均可使热板所致小鼠舔足反应潜伏期明显延长(P<0.01),与给药前相比,潜伏期提高率最高达71.12%;可使醋酸所致小鼠扭体潜伏期明显延长(P<0.05),扭体次数明显减少(P<0.01),对扭体次数的抑制率最高达64.74%;可使热水所致小鼠甩尾潜伏期明显延长(P<0.01),与给药前相比,潜伏期提高率最高达112.59%;0.06 mg/ml浓度组对三个疼痛模型均无明显影响。说明0.6~12 mg/ml浓度的石榴皮水提取物具有镇痛作用,但0.06 mg/ml浓度的作用则不明显。

几种中草药对刺参幼参的急性毒性试验

为探究刺参Apostichopus japonicus对中草药的毒性反应,在水温13~15℃下采用水生生物急性毒性试验方法对体质量为(2.36±0.41)g的刺参幼参进行了5种中草药急性毒性试验。结果表明:单方中草药对刺参幼参的毒性大小依次为五倍子>乌梅>石榴皮>黄芩>甘草;五倍子、乌梅、石榴皮、黄芩和甘草对刺参幼参的48 h半致死浓度分别为0.340、2.027、2.149、2.234、4.900 g/L,安全浓度分别为0.055、0.272、0.166、0.271、0.605 g/L;6组复方药物中毒性最大的是五倍子+甘草,其次是五倍子+黄芩、甘草+黄芩、石榴皮+五倍子,乌梅+石榴皮、五倍子+乌梅两组复方的毒性最低。研究表明,在安全浓度范围内,单方中草药五倍子、乌梅,复方五倍子+乌梅、石榴皮+乌梅可用作刺参细菌性疾病的防治药物。

石榴皮与诃子联合制剂对铜绿假单胞菌抑菌作用的研究

目的:探讨石榴皮与诃子水煎剂单独及联合制剂对铜绿假单胞菌的体外抑菌作用,为中药联合治疗临床上铜绿假单胞菌感染提供参考数据及实验依据。方法:采用杯碟法、常量稀释法和微量棋盘法,测量抑菌圈直径和石榴皮和诃子水煎剂单独的最小抑菌浓度(MIC),计算二者连用时的抑菌指数(FIC),分析石榴皮和诃子水煎剂单独及联合制剂对铜绿假单胞菌的抑菌作用。结果:石榴皮与诃子单独制剂及联合制剂对铜绿假单胞菌有一定的抑菌作用。杯碟法结果显示,牛津杯周围可见明显的抑菌环,且抑菌环直径大小与药物浓度呈正比,其抑菌效果依次为:二者联合>诃子>石榴皮;常量稀释法和微量棋盘法结果显示,石榴皮水煎剂MIC为250 mg/mL;诃子水煎剂MIC为62.5 mg/mL,FIC为0.25。结论:石榴皮与诃子单独水煎剂对铜绿假单胞菌均有一定的抑菌作用,且抑菌效果强度与药物浓度呈正比;二者联合后彼此为协同效应,提示二者联合后可提高对铜绿假单胞菌的抑菌效果。

石榴皮醇提物对胃癌SCG-7901细胞增殖的影响

目的探讨石榴皮醇提物对胃癌SCG-7901细胞增殖的影响及其机制。方法体外培养人胃癌SCG-7901细胞。制备石榴皮醇提物,药物最终浓度为100、80、60、40、20、10μg/m L,并设置不加药的阴性对照组(0μg/m L),采用四唑盐法、集落形成试验观察比较石榴皮醇提物对SCG-7901细胞增殖和克隆形成能力的影响;采用倒置显微镜观察提取物作用细胞48 h后的形态变化;采用流式细胞仪检测提取物作用48 h后细胞周期的变化。结果石榴皮醇提物对SCG-7901细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;且石榴皮醇提物显著抑制SCG-7901细胞集落形成率。不同浓度的药物作用后,SCG-7901细胞数目减少,部分细胞死亡,细胞核固缩;细胞周期发生改变,与阴性对照组比较,S期细胞比例减少,G0/G1期细胞增多,出现明显G0/G1期阻滞。结论石榴皮醇提物可以抑制胃癌SCG-7901细胞增殖,干扰细胞G1期向S期转化。

石榴皮药材的快速多信息梯度薄层鉴别方法

目的建立石榴皮药材的快速、多信息薄层鉴别方法。方法采用薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别,分别以环己烷-乙酸乙酯-浓氨试液(5∶3∶0.5,V/V/V)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶2∶4∶0.5,V/V/V/V)和三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(1∶2∶4∶0.5,V/V/V/V)为梯度展开剂,通过紫外光灯(365 nm)、日光和透过灯光检视石榴皮的信息斑点。结果共检出脂溶性、中极性和水溶性成分斑点17个。结论该方法简便、快捷、实用,可多指标、快速鉴别石榴皮药材的真伪,控制质量。