一测多评法同时测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分

目的建立一测多评法测定丹参配方颗粒中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量,验证其准确性及可行性。方法采用HPLC法,色谱柱为Waters Xselect HSS T3(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为1.2 mL·min^(-1);检测波长为286 nm。以原儿茶醛为内参物,计算其他6个成分的相对校正因子。同时采用外标法和一测多评法测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分的含量,比较两种方法的测定结果是否存在差异。结果丹参素、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r>0.999);相对校正因子分别为7.36、1.18、2.82、1.99、2.82、3.31。一测多评法与外标法测得12批样品中7个酚酸类成分的含量结果无显著差异,丹参素、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B相对误差分别在0.43%~0.53%、0.00%~3.70%、0.00%~0.34%、1.71%~2.01%、2.53%~2.93%、1.69%~1.73%。结论建立的一测多评法测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分简便稳定,可用于丹参配方颗粒的定量分析及质量控制。

人参皂苷Rg1-丹参素保肝作用机制研究

目的运用代谢组学及生物效应网络方法研究人参皂苷Rg1-丹参素(GRg1-T)的保肝作用机制。方法将24只大鼠作为研究对象,采用简单随机化法将其分为空白组、模型组、GRg1-T组、联苯双酯(DDB)组,每组各6例。模型组给予CCl4油溶液。观察大鼠状态,测定生化指标;采用液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)结合偏最小二乘辨别分析法,考察各组大鼠血清中的内源性代谢差异,筛选出肝损伤的生物标志物;将标志物代入到干预组中,寻找抗肝损伤潜在的生物标志物。结果模型组的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平高于空白组,差异有统计学意义(P<0.001);GRg1-T和DDB组的ALT、AST水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.001)。鉴定出8种肝损伤的生物标志物;4种代谢物对肝损伤起到保护作用,分别为氨基丙酸、L-鸟氨酸、吡哆醛、卵磷脂。结论GRg1-T可能通过影响氨基酸、胆固醇的代谢及醛氧化酶的表达发挥肝保护作用。

丹参素与川芎嗪对心血管系统的协同作用

目的探讨丹参素与川芎嗪在心血管方面的协同效应,为其复方制剂提供科学依据。方法通过大鼠颈静脉插管滴注受试药(丹参素、川芎嗪、丹参素+川芎嗪),观察对在体大鼠平均动脉压(MAP)、心率(HR)的影响;采用lange-ndorff离体心脏灌流技术对大鼠心脏灌流给予受试药,lab-chart生物信号采集仪器记录观察各受试药对左心室收缩压(LVSP)、左心室发展压(LVDP)、心率(HR)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)以及冠脉流量(CF)等心功能指标的影响。结果在体实验中,丹参素组平均动脉压降低约7%,川芎嗪组降低约12%,而丹参素+川芎嗪组降低约26%,但各组均对大鼠心率影响不明显。在离体心脏灌流实验中,丹参素+川芎嗪组与空白对照组、丹参素组和川芎嗪组相比,具有较强的负性肌力作用,能明显降低LVSP、LVDP、+dp/dtmax和HR,且升高-dp/dtmax和CF,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论丹参素、川芎嗪联合应用对心血管的效应有协同作用。

HPLC同时测定冠心丹参胶囊中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量

目的：建立同时测定冠心丹参胶囊（丹参，三七，降香）中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和丹参酮ⅡA含量的HPLC方法。方法：采用HPLC法，色谱柱：VP—ODS（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：0．03mol／L醋酸铵溶液（甲酸调pH2．4）（A）-乙腈（B），梯度洗脱；流速：1．0mL／min；检测波长：280nm。结果：丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和丹参酮ⅡA分别在3．310—18．66μg（r=0．9999）、0．03950—0．2370μ（r=0．9996）、0．7500～4．500μg（r=0．9995）和0．05920～0．3550μg（r=0．9999）范围内呈良好线性关系；平均回收率分别为99．73％（RSD=1．05％）、100．20％（RSD=1．25％）、99．97％（RSD=1．12％）、99．89％（RSD：1．34％）。结论：本方法简便，结果准确，可用于冠心丹参胶囊的质量控制和治疗药物监测。

肝纤维化中丹参素对TGFβ_1/Smads/ERK信号通路的影响及其相互关系

目的探讨肝纤维化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ,TGFβ1)/Smads/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的相互作用。方法体外分离培养大鼠肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),MTT法筛选丹参素最适浓度;以最适浓度丹参素及ERK阻断剂(PD98059)作用于经TGFβ1处理的HSC,CCK-8法检测各组HSC增殖;免疫细胞化学染色法检测各组HSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle sctin,α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;RT-PCR检测各组HSC的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达量;Western blot法检测各组Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化及Smad7蛋白水平。结果 0.062 5～0.25 mmol/L的丹参素可有效抑制HSC增殖,作为最适处理浓度;PD98059(100μmol/L)可抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,丹参素剂量依赖性抑制TGFβ1诱导的HSC增殖(P<0.01);TGFβ1促进细胞内α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,PD98059及丹参素降低TGFβ1诱导的α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平;PD98059可拮抗TGFβ1诱导的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),丹参素下调Smad2、Smad3 mRNA水平,但上调Smad7 mRNA水平(P<0.01);PD98059及丹参素抑制TGFβ1诱导的Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化(P<0.01),但对TGFβ1诱导的Smad7蛋白表达上调有不同效应(P<0.01)。结论 TGFβ1上调Smad2、Smad3 mRNA表达及蛋白磷酸化,进而诱导HSC增殖、活化及胶原合成,ERK通路可能参与HSC中TGFβ1诱导Smad基因表达及蛋白磷酸化过程。丹参素对TGFβ1/Smad/ERK信号通路具有抑制效应。

UPLC法同时测定丹参注射剂中6个成分的含量

目的:建立用超高效液相色谱(UPLC)同时测定丹参注射剂中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸 B 和丹酚酸A 6个主要化学成分的方法。方法:采用 UPLC 色谱系统,BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm);流动相为1%甲酸-乙腈梯度洗脱(乙腈:0 min 为2%,2.2 min 为4%,2.3 min 为8%,10 min 为18%,10.2 min 为42%,15 min 为54%,16 min 为80%,17 min 为80%);流速为0.6 mL·min^(-1);检测波长为280 nm。结果:本方法可在17 min 内完成1次色谱分析,各主要成分色谱峰之间有良好的分离度,6个成分的浓度和各自峰面积之间有着良好的线性关系,精密度、重复性及加样回收率的 RSD均小于1.0%。结论:本方法快捷、准确,重复性好,能同时测定丹参注射剂中6个主要化学成分,可较全面地控制丹参注射剂这些化学成分的含量。

丹参素对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影响

目的观察丹参素对IL-1β刺激的肝星状细胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影响,探讨丹参素抗肝纤维化的分子机制。方法用原位-密度梯度离心法提取肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs),以不同浓度的丹参素作用于IL-1β刺激的HSCs,MTT法、AO/EB免疫荧光和Annexin V-FITC/PI分别检测HSCs的增殖和凋亡;免疫细胞化学、ELISA法、Western blot分别检测Ⅲ型胶原的生成、NF-κB核转位及细胞质p-IκBα、细胞核NF-κB p65的表达。结果与对照组相比,IL-1β刺激组HSCs增殖明显增加(P<0.01),凋亡率明显减低(P<0.05),Ⅲ型胶原的合成和分泌明显增加(P<0.01);不同浓度丹参素作用24 h后HSCs增殖明显减低(P<0.01),凋亡明显增加(P<0.01),以早期凋亡为主,Ⅲ型胶原的合成和分泌亦明显减少(P<0.05,P<0.01);Western blot结果显示IL-1β作用30 min时细胞质p-IκBα、细胞核NF-κB p65蛋白表达明显增加(P<0.01),出现核转位;免疫细胞化学显示细胞核内p65阳性染色细胞增多浓染,提示IL-1β可以诱导HSCs的NF-κB活性;丹参素组细胞质p-IκBα、细胞核NF-κB p65蛋白表达明显减低(P<0.05,P<0.01),核转位减少,细胞核内p65阳性染色细胞数减少淡染,提示丹参素可以抑制IL-1β诱导的HSCs NF-κB活性。结论丹参素抑制IL-1β诱导的HSCs增殖,促使HSCs凋亡,减少Ⅲ型胶原的合成和分泌,其机制可能与抑制NF-κB活性有关。

dl-丹参素的合成

目的探讨dl-丹参素新的合成工艺。方法以3,4-二羟基苯甲醛为起始原料,经过苄基保护、Darzens反应、Lewis酸选择性开环、NaBH4还原、水解、氢化6步反应得到丹参素。结果与结论目标化合物dl-丹参素的结构经1H-NMR确证,总收率为48.4%。

UFLC法同时测定参芎葡萄糖注射液中6种主要成分

目的建立超快速液相色谱(UFLC)同时测定参芎葡萄糖注射液(丹参、盐酸川芎嗪)中丹参素、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的方法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,检测波长220 nm,柱温40℃。结果 6种被测成分的线性关系良好(r>0.999),精密度、重复性、稳定性的RSD都低于3%,平均加样回收率在95.19%～101.02%,RSD在0.92%～2.70%(n=6)。结论本方法简便、快速、准确,能有效控制参芎葡萄糖注射液的质量。

丹参素防治去卵巢大鼠牙槽骨骨量的丢失

目的:探讨丹参素对大鼠牙槽骨骨量的影响、丹参素与雌激素防止牙槽骨骨丢失的疗效比较以及丹参素与雌激素是否具有防止牙槽骨骨丢失的协同效应。方法:40只SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)、雌激素组(E2)、丹参素(Tan)及丹参素与雌激素联合用药组(E2+Tan)。雌激素组、丹参素组和丹参素与雌激素联合用药组分别用雌激素100μg.kg-1.d-1、丹参素12.5 mg.kg-1.d-1和丹参素12.5 mg.kg-1.d-1加雌激素50μg.kg-1.d-1给大鼠灌胃,1次/d,共90 d。实验90 d后取大鼠的牙槽骨,脱钙,切片,染色,用骨形态计量学方法测量牙槽骨松质骨的骨量,计算牙槽骨的骨静态参数。结果:与假手术组相比,去卵巢组牙槽骨骨小梁面积百分数减小(P<0.01)和骨小梁分离度增大(P<0.05)。与去卵巢组相比,雌激素组牙槽骨骨小梁面积百分数、骨小梁厚度均增大(P<0.01),丹参素组及联合用药组牙槽骨骨小梁面积百分数增大(P<0.05)。与丹参素组相比,雌激素治疗组及联合用药组各项测量指标差别均没有统计学意义。结论:丹参素都能防治牙槽骨骨质疏松且疗效与雌激素相当,但丹参素与雌激素在防治牙槽骨骨质疏松时没有协同作用。

丹参素通过激活Wnt/β-catenin通路促进大鼠原代成骨细胞的分化

目的探讨丹参素对原代培养大鼠成骨细胞分化的影响。方法用不同浓度的丹参素(0.1~10μmol·L^(-1))处理原代培养的大鼠成骨细胞,采用MTT实验检测丹参素对成骨细胞增殖的影响;运用Real-time PCR法检测Runx2和Osterix基因mRNA的表达;利用碱性磷酸酶染色检测细胞ALP的活性;利用茜素红染色检测细胞钙化结节的形成;通过Western Blotting检测细胞核内β-catenin的含量。结果丹参素对成骨细胞的增殖无明显作用,浓度为1~10μmol·L^(-1)的丹参素能够上调Runx2和Osterix基因mRNA的表达,增强ALP的活性,促进钙化结节的形成,增强β-catenin在细胞核内的表达。结论丹参素浓度为1~10μmol·L^(-1)能够促进成骨细胞的分化,且Wnt/β-catenin信号通路被发现参与其对成骨细胞分化过程的调控。

微流控芯片对丹参滴注液中丹参素和原儿茶醛的测定

建立了微流控芯片非接触电导检测法测定丹参滴注液中丹参素与原儿茶醛含量的分析方法。探讨了缓冲液种类与浓度，添加剂、分离电压等因素对分离检测的影响。优化选择20mmol／L H3BO3 -20mmol／L Tris缓冲溶液，加入1．5mmol／L SDS添加剂，2．5kV分离电压，3min内可实现丹参素和原儿茶醛的快速分离检测。在优化条件下，丹参素的线性范围为10～500mg／L，r为0．986，检出限为5．0mg／L（S／N=3），RSD为2．1％；原儿茶醛的线性范围为50～500mg／L，r为0．993，检出限为10mg／L（S／N=3），RSD为2．8％。

基于RANKL-RANK-OPG轴研究丹参素防治牙槽骨骨质疏松的作用

目的:探讨RANKL-RANK-OPG轴在丹参素防治牙槽骨骨质疏松中的作用。方法:SD大鼠随机分为3组:对照组、去卵巢组和丹参素治疗组。实验90d后取大鼠牙槽骨,HE染色观察牙槽骨组织形态学改变,组织化学染色方法检测牙槽骨组织中TRAP的活性,免疫组化的方法检测牙槽骨组织中RANKL和OPG的表达情况。结果:与去卵巢组相比:丹参素治疗组牙槽骨骨量明显增多,TRAP阳性的破骨细胞数减少,RANKL/OPG减小。结论:丹参素防治牙槽骨骨质疏松可能与其调控RANKL-RANK-OPG轴有关。

丹参素拮抗氧化应激所致骨质疏松并通过PI3k/Akt通路减少成骨细胞的凋亡

目的探讨丹参素拮抗醋酸泼尼松所致大鼠骨质疏松的作用机理。方法 60只雌性4月龄大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组(醋酸泼尼松5 mg/kg体重)、丹参素高中低剂量组(30 mg/kg体重、20 mg/kg体重、10 mg/kg体重)和对照药白藜芦醇组(5 mg/kg体重)。丹参素组和白藜芦醇组每日先给予模型组同样剂量的醋酸泼尼松,然后给予不同浓度药物处理。连续14w。将成骨细胞MC3T3-E1细胞随机分为A组(正常组)、B组(醋酸泼尼松组)、C组(醋酸泼尼松+丹参素干预组),D组(醋酸泼尼松+丹参素+Ly294002组)。采用双能X线骨密度检测仪检测腰椎及股骨的骨矿物密度(BMD);采用TUNEL原位标记骨质疏松大鼠中骨组织检测细胞凋亡情况;同时采用Western-blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C表达情况;免疫荧光和Western-blot检测成骨细胞MC3T3-E1中PI3/Akt信号通路相关蛋白pAkt表达情况。结果与模型组相比,不同浓度的丹参素和白藜芦醇均能升高BMD值(均P<0.05),降低骨质疏松大鼠骨细胞凋亡率(P<0.05),抑制凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C的表达(均P<0.05)。与A组相比,B组和D组成骨细胞凋亡率和凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C表达均增高(均P<0.05);与B组相比,C组成骨细胞凋亡率和凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C表达均明显降低(均P<0.05);免疫荧光和Western-blot检测显示C组pAkt表达量与B组相比明显增加(P<0.05),具有统计学意义。结论丹参素能够拮抗醋酸泼尼松诱导氧化应激所致骨质疏松大鼠中成骨细胞的凋亡,并且在体外是通过活化PI3k/Akt通路而减少成骨细胞的凋亡。

丹参中丹参素的提取工艺优化研究

目的:采用单因素实验、正交实验等方法筛选丹参中的丹参素的提取工艺条件。方法:采用紫外分光光度法建立丹参中丹参素含量测定的方法,以丹参素为指标成分,在对多种提取工艺(传统水煎法、乙醇回流法、超声波法、水提醇沉法)的优选,在此基础上,通过单因素实验、正交实验等对丹参素的提取工艺进行优化。结果:水提醇沉法提取丹参中丹参素的提取率较高,优选出的最佳工艺为:加水量8倍,提取时间90 min,浓缩体积1∶1.5,乙醇浓度70%。结论:优化的丹参素提取工艺,为丹参素的进一步开发和利用提供了一定的理论和实验基础。

丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的研究丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用线栓法制备SD大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型。实验SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、丹参素组(1.2 mg·kg-1)、川芎嗪组(60mg·kg-1)、丹参川芎嗪注射液组[(1.2mg丹参素+60mg川芎嗪)kg-1]、尼莫地平注射液组(1.2mg·kg-1)。造模24 h后,测定神经行为学评分、脑组织含水量、脑梗塞体积、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)含量,并进行组织病理学检查。结果与模型组相比,丹参素组、川芎嗪组、丹参川芎嗪注射液组大鼠的神经行为明显改善,脑含水量和脑梗塞体积显著降低(P<0.05或0.01),血清中SOD活性升高,Glu含量降低(P<0.05或0.01),HE染色显示组织间隙较小,病理损伤小于模型组。丹参川芎嗪注射液组保护作用最优,说明两单味药配伍使保护作用增强。结论丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血有协同的保护作用。

丹参素对肝肺综合征大鼠肺脏的保护作用

目的:探讨丹参素减轻肝肺综合征大鼠肺组织炎性损伤的作用。方法:SD大鼠被随机分为正常对照组(n=8)、肝肺综合征组(n=11)和丹参素干预组(n=9)。采用HE染色观察肝及肺组织病理改变,计数肺组织巨噬细胞;测定血浆丙氨酸转氨酶(ALT)的活性以及内毒素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和同型半胱氨酸(Hcy)的浓度及肺组织匀浆中TNF-α、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)的含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果:与正常对照组相比,肝肺综合征组动物肺泡腔变小、间隔增厚、肺泡腔内和间隔内有大量巨噬细胞聚集,且体积明显增大。与肝肺综合征组相比,丹参素干预组肺组织巨噬细胞数量明显减少、病理改变显著减轻。肝肺综合征组大鼠血浆ALT的活性和内毒素、TNF-α、Hcy的浓度以及肺组织中TNF-α、NO和MDA含量以及iNOS的活性,均高于正常对照组,而使用丹参素干预后各指标均明显降低。结论:丹参素可能通过降低肠源性内毒素,减轻肺组织的炎性反应,延缓肝肺综合征的进展。

反相高效液相色谱法同时测定丹参中5种成分含量

目的建立高效液相色谱法同时测定丹参中3种水溶性和2种脂溶性成分。方法采用反相高效液相色谱法,WelchromC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相梯度洗脱:0~15 min,10%→12%A;~35 min,12%→20%A;~45 min,20%→60%A;~65 min,60%→65%A;~80 min,65%→80%A;~90 min,10%A。流速1 m L·min-1,检测波长280 nm,柱温30℃。结果丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮及丹参酮ⅡA分别在0.0595~2.380 0,0.346 0~13.840 0,0.656 0~26.240 0,0.420 0~16.800 0,0.414 0~16.560 0μg范围内线性良好,r=0.999 9,加样平均回收率98.69%~100.91%,RSD均<1.2%(n=6)。结论该方法快速、准确、重复性好,可用于同时测定丹参中水溶性和脂溶性成分,较全面控制丹参质量。

丹参素对血管内皮细胞氧化应激损伤保护作用的实验研究

目的研究丹参素对过氧化氢(H2O2)所致人脐静脉内皮细胞(ECV-304)损伤的保护作用。方法体外培养ECV-304,用H2O2孵育细胞,建立氧化诱导内皮细胞损伤和凋亡模型。用此模型筛选出浓度适合的丹参素。应用噻唑蓝(MTT)法检测内皮细胞生长和增殖活性;比色法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性及细胞内丙二醛(MDA)含量。结果丹参素可明显减轻H2O2所致的ECV-304细胞损伤,中、高浓度的丹参素均可使MDA含量明显下降,SOD活性明显升高,与模型组比较均有显著性差异(P均<0.01)。结论丹参素对H2O2所致ECV-304损伤具有明显的保护作用,其机制与减少MDA生成,提高SOD活性有关。

丹参素对博莱霉素致大鼠肺纤维化的治疗作用

目的探讨丹参素对博莱霉素致大鼠肺纤维化的治疗作用及可能作用机制。方法采用气管内注入博莱霉素5 mg/kg致大鼠肺间质纤维化的造模方法,将40只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、丹参素组,并分别给药。各组动物于饲养28 d后处死取材,行肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(HYP)含量测定,以观察丹参素对肺纤维化形成的影响。结果与正常组比较,丹参素组肺组织SOD活性显著增加,MDA、HYP含量显著减少(P均<0.05);丹参素治疗组与地塞米松治疗组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹参素能够抑制或延缓博莱霉素致大鼠肺纤维化的发生和发展。