三肽基肽酶1和环状RNA Tau-微管蛋白激酶2在食管癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨三肽基肽酶1(TPP1)和环状RNA Tau-微管蛋白激酶2(circ-TTBK2)在食管癌组织中的表达及与患者预后的关系。方法 取100例食管癌患者的食管癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组化法检测TPP1的表达情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测circ-TTBK2的相对表达量,并分析TPP1和circ-TTBK2的表达与患者临床特征的关系。随访3年,记录食管癌患者的预后情况,采用Cox风险比例回归模型分析影响食管癌患者预后的危险因素。结果 食管癌组织中TPP1的阳性表达率明显高于癌旁正常组织,circ-TTBK2的相对表达量明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。分化程度为低中分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、浸润深度为T_(3~4)食管癌患者食管癌组织中TPP1蛋白阳性表达率和circ-TTBK2相对表达量分别高于分化程度为高分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、浸润深度为T_(1~2)的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。随访3年,100例食管癌患者生存68例,死亡32例,病死率为32.00%。多因素Cox风险比例回归模型分析结果显示,浸润深度为T_(3~4)、分化程度为低中分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、circ-TTBK2高表达、TPP1蛋白阳性表达均为食管癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论 TPP1在食管癌中阳性表达,circ-TTBK2在食管癌中高表达,二者与食管癌患者的临床特征密切相关,circ-TTBK2高表达、TPP1蛋白阳性表达均为食管癌患者预后的独立危险因素。

磷酸酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B/鼠双微体基因2信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联

目的探究磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/鼠双微体基因2(MDM2)信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联。方法回顾性分析2017年6月至2019年6月江苏大学附属医院收治的130例胃癌患者手术切除胃癌组织及癌旁组织。采用GEPIA数据库分析PTEN、p-AKT、p-MDM2在胃癌组织中的表达,比较癌旁组织、胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。随访至2022年6月,按照复发转移情况将患者分为复发转移组和无复发转移组。比较两组患者胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。采用Logistic回归分析法分析胃癌复发转移的影响因素。结果GEPIA分析TCGA数据库和GTEx项目来源的数据发现,胃癌组织的PTEN水平低于正常组织,p-AKT、p-MDM2水平均高于正常组织(P<0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。与无复发转移组比较,复发转移组胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。对130例患者进行随访,随访时间36~60个月,平均随访时间(49.31±8.35)个月,中位随访时间为46个月。其中复发转移患者59例,无复发转移患者71例。与无复发转移组比较,复发转移组Ⅲ-Ⅳ期、中低分化、浸润深度T 3-T 4构成比升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,TNM分期(OR=2.125,95%CI:1.101~3.150)、分化程度(OR=2.659,95%CI:1.365~3.953)、浸润深度(OR=3.037,95%CI:1.254~4.821)、p-AKT(OR=3.142,95%CI:2.379~3.906)、p-MDM2(OR=6.666,95%CI:3.241~10.091)均是胃癌复发转移的危险因素;PTEN是胃癌复发转移的保护因素(OR=0.394,95%CI:0.014~0.774,P<0.05)。结论胃癌中PTEN/AKT/MDM2信号通路PTEN表达下调,p-AKT、p-MDM2表达上调,与胃癌复发转移密切相关,可能作为候选治疗靶点。

微RNA-126介导磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2及磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B信号与肿瘤关系的新进展

磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2(PIK3R2)是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的家庭成员之一,通过PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路参与血管的形成、维护以及改造的调控,是组织器官正常发育、损伤以及肿瘤发生的一个重要的基因调控靶目标。不同类型的肿瘤,微RNA(miRNA)126介导的PIK3R2调控水平及趋势存在差异,可能与肿瘤的发生存在联系,是肿瘤研究中有前景的调控靶目标之一。

糖尿病大鼠脑细胞周期依赖性蛋白激酶5和蛋白激酶A参与调节Tau蛋白磷酸化

细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase5,Cdk-5)及蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)是调节Tau蛋白磷酸化的重要激酶,其对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠脑内Tau蛋白磷酸化的作用如何,目前尚不明确.为探讨胰岛素缺乏的DM大鼠海马Cdk-5及PKA对Tau蛋白磷酸化的作用,用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DM大鼠模型,Fura-2负载及荧光测定细胞内游离Ca2+浓度,免疫沉淀法测定Cdk-5活性,放射性配体结合实验检测PKA的活性,蛋白质印迹检测Tau蛋白磷酸化的水平.结果提示:在DM大鼠海马神经元,Ca2+浓度升高,Cdk-5及PKA活性升高,Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202和Ser396/Ser404位点的磷酸化增强.Cdk-5的特异性抑制剂roscovitine可降低DM大鼠Cdk-5活性,但不能降低PKA活性,使Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点磷酸化水平降低,但不降低Ser396/Ser404位点的磷酸化,roscovitine处理正常大鼠后,上述酶的活性及Tau蛋白的磷酸化无明显变化.首次从整体水平上证实DM大鼠海马Cdk-5及PKA活性升高,协同促进Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点和Ser396/Ser404位点的磷酸化,神经元内游离Ca2+浓度升高可能起重要作用.

大鼠蛛网膜下腔出血后细胞外调节蛋白激酶1/2激活介导海马区神经细胞自噬

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)激活与神经细胞自噬的关系。方法 120只雄性SD大鼠随机分成假手术组、SAH组、ERK1/2抑制剂U0126组、自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)组。采用枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型;U0126组和Rap组分别于造模前30min侧脑室注射U0126(5μg/μL)和Rap(10nmol/μL)。光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测海马区磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2 mRNA和自噬标志蛋白(Beclin-1和Beclin-1mRNA、LC3-Ⅱ和LC3mRNA)表达水平。结果与假手术组比较,SAH组神经细胞死亡率增加(14.9%±5.7%,28.3%±9.8%,44.2%±10.9%)(q值依次为27.56、35.65、44.81;均P<0.05),ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA水平增加(1.83±0.01,2.82±0.06,1.34±0.04;1.46±0.02,1.76±0.02,1.35±0.02;1.52±0.04,1.89±0.01,1.31±0.04)(q值依次为42.99、60.66、48.08,71.26、72.46、49.50,48.49、82.40、41.18;均P<0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平增加(均P<0.05);与SAH组比较,U0126组神经细胞死亡率增加(19.6±6.5%,36.2±7.7%,58.2±12.7%)(q值依次为9.59、10.43、14.66;均P<0.05),U0126组ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA表达降低(1.23±0.02,1.40±0.02,1.12±0.02;1.22±0.04,1.48±0.06,1.24±0.03;1.34±0.04,1.33±0.02,1.14±0.04)(q值依次为75.66、65.35、31.11,37.18、26.70、15.56,16.79、51.85、22.58;P<0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平降低(P<0.05);与SAH组比较,Rap组神经细胞死亡率降低(9.1%±4.6%,18.8%±8.6%,28.21%±9.2%)(q值依次为11.86、12.54、16.74;均P<0.05),Rap组Beclin-1mRNA和LC3mRNA增加(1.78±0.02,2.27±0.05,1.86±0.04;1.97±0.06,2.31±0.08,1.85±0.00)(q值依次为49.57、48.63、72.12、41.96、38.88、71.73;P<0.05),Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白增加(P<0.05),ERK1/2 mRNA变化差异无统计学意义(q值依次为2.63、2.65、2.83,P>0.05),p-ERK1/2蛋白变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SAH后激活的ERK1/2激活,可促进Beclin-1和LC3-Ⅱ表达介导神经细胞丢失。

大鼠蛛网膜下腔出血后海马区磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2表达与细胞自噬的关系

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达与神经细胞自噬的关系。方法采用枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型,将120只雄性SD大鼠采用数字表法分成假手术组(Sham)、SAH组、U0126(ERK1/2抑制剂)低剂量组及U0126高剂量组。低剂量和高剂量U0126组分别于造模前30min侧脑室注射U0126 5和10g/L。水迷宫行为学测试大鼠的行为学变化;光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和自噬标志蛋白(Beclin-1及LC3-Ⅱ)的表达水平。结果与Sham组比较,SAH组大鼠在72h的逃避潜伏期时间明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且SAH组p-ERK1/2,Beclin-1及LC3-Ⅱ表达均增加,于24h达高峰;与SAH组比较,低、高剂量U0126组大鼠相应时间点的潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),各时间点神经元存活比率均明显降低,且p-ERK1/2,Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及存活神经细胞比率降低(P<0.05);与低剂量U0126组比较,高剂量U0126组的大鼠相应时间点的逃避潜伏期明显延长、穿台次数明显减少(P<0.05),p-ERK1/2及存活神经细胞比率降低(P<0.05),但2组间的Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白比较差别均无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠SAH后海马区p-ERK1/2激活对神经细胞有保护作用,且这种保护作用与神经细胞自噬有关。

蛋白质酪氨酸激酶2通过PI3K/AKT/Gsk3b信号调控Tau磷酸化

目的探究蛋白质酪氨酸激酶2(protein tyrosine kinase,Pyk2)在学习记忆障碍小鼠模型中的表达及对神经元细胞Tau蛋白磷酸化的影响和分子机制。方法免疫组化检测APPswe/PS1ΔE9(APP/PS1)双转基因AD和WT小鼠脑组织Pyk2蛋白表达;免疫印迹检测Pyk2、Tau5、Tau46、CP13、AT180、PHF-1、12E8和AT270蛋白表达;免疫印迹检测SHSY-5Y细胞共转染pcDNA6.2-Pyk2-GFP和pcDNA6.2-hTau(2N4R)-V5质粒24h后Tau5、Tau46、CP13、AT180、PHF-1、12E8和AT270蛋白表达;包装PLOK1-Pyk2 shRNA慢病毒,转染SHSY-5Y细胞构建Pyk2敲低细胞系,转染hTau(2N4R)质粒24h后,Western blot检测Tau5、Tau46、CP13、AT180、PHF-1、12E8、AT270、P110α、P110β、P85α、p-P85α、AKT、p-AKT(Ser473)、p-AKT(Thr308)、Gsk3β和p-Gsk3β(Ser9)蛋白表达。结果与WT组相比,APP/PS1双转基因AD小鼠皮质和海马组织中Pyk2蛋白表达明显增加。海马CA1和CA3功能区Pyk2蛋白表达明显增加。海马DG功能区Pyk2蛋白表达明显减少。与WT组相比,APP/PS1双转基因AD小鼠海马组织中Tau5、Tau46 CP13[Phospho-Tau(Ser202)]、AT180[Phospho-Tau(Thr231)]、PHF-1[Phospho-Tau(Ser396/404)]、12E8[Phospho-Tau(Ser262/356)]和AT270[Phospho-Tau(Thr181)]蛋白表达明显增加。与转染0.6μg Tau-V5相比,共转染0.6μg Tau-V5和0.3μg Pyk2-GFP组的V5、Tau5、Tau46 CP13[Phospho-Tau(Ser202)],AT180[Phospho-Tau(Thr231)]和AT270[Phospho-Tau(Thr181)]蛋白表达没有明显变化。共转染0.6μg Tau-V5和0.3μg Pyk2-GFP组的PHF-1[Phospho-Tau(Ser396/404)]和12E8[Phospho-Tau(Ser262/356)]蛋白表达明显增加。与转染1.0g Tau-V5的WT SHSY-5Y细胞相比,共转染1.0g Tau-V5和Pyk2 KDSHSY-5Y细胞组的V5、Tau5、Tau46、CP13[Phospho-Tau(Ser202)]、AT180[Phospho-Tau(Thr231)]和AT270[Phospho-Tau(Thr181)]蛋白表达没有明显变化。PHF-1[Phospho-Tau(Ser396/404)]和12E8[Phospho-Tau(Ser262/356)]蛋白表达明显减少。与转染1.0g Tau-V5的WT SHSY-5Y细胞相比,共转染1.0g Tau-V5和Pyk2 KD SHSY-5Y细胞组的P110β、P85α、p-AKT(Thr308)、AKT、和GSK3β蛋白表达没有明显变化。p-P85α、P110α、p-AKT(Ser437)和p-GSK3β(Ser9)蛋白表达明显减少。结论Pyk2在雄性APP/PS1双转基因AD小鼠模型中高表达,且Pyk2通过PI3K/AKT/Gsk3b信号调控Tau蛋白PHF-1[Phospho-Tau(Ser396/404)]和12E8[Phospho-Tau(Ser262/356)]磷酸化。

蛋白磷酸酶2A对微管相关蛋白tau的作用在阿尔茨海默病中的研究进展(英文)

微管相关蛋白tau(Microtubule-associated protein tau,tau)的过度磷酸化是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)脑内的主要病理变化之一。研究证实,tau蛋白的过度磷酸化出现在AD的早期阶段,并且认为抑制tau蛋白过度磷酸化是AD治疗的关键。然而,tau蛋白过度磷酸化及其磷酸化后的聚集机制尚不完全清楚。重要的是,大量研究表明,蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)活性的降低在tau蛋白过度磷酸化的形成中发挥至关重要的作用。因此,我们综述了PP2A功能紊乱和tau蛋白病理,重点阐述了PP2A功能紊乱在tau蛋白过度磷酸化中的作用。此外,改善PP2A功能紊乱可成为AD治疗的一个策略。

海马注射Aβ25-35对大鼠CA1区tau蛋白和MAP2影响的研究

目的采用β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)25-35注射法建立Alzheimer病(Alzheimer disease,AD)大鼠模型,观察该AD模型中tau蛋白和微管相关蛋白2(microtubule-associated protein-2,MAP2)表达情况。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分成健康对照组、假手术组及AD模型组,以凝聚状态的Aβ25-35经大鼠右侧海马注射制作AD模型,造模2周后应用HE染色和免疫组化方法,观察AD模型鼠脑中海马CA1区病理形态以及tau蛋白和MAP2的表达。结果AD模型组大鼠海马CA1区锥体细胞层紊乱、变稀、中断、数量减少,同时可见许多细胞体积缩小,胞核固缩且染色加深。AD模型鼠海马CA1区AD模型组tau蛋白阳性细胞(62.13±4.1 2)个/HP,较健康对照组[(26.78±3.46)个/HP]与假手术组[(26.36±3.13)个/HP]明显增高(均P<0.01);MAP2阳性细胞吸光度值AD模型组为5.13±4.12,较健康对照组(28.78±3.46)与假手术组(29.36±3.13)明显减少,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论在Aβ诱导的AD模型中tau蛋白表达增高,MAP2表达减低。

缺氧缺血性脑损伤大鼠脑组织Tau、Bcl-2、Bax蛋白的表达及相关性

目的探讨Tau、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bax蛋白在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)神经元凋亡过程中的作用。方法将80只7日龄SD大鼠随机分为假手术组和HIBD组,每组各40只,HIBD组参照Rice法建立HIBD动物模型,假手术组仅暴露左颈总动脉。两组均于造模后3、6、12、24、48 h断头取脑,制备脑组织切片。采用HE染色法观察各组各时间点脑组织病理变化,采用免疫组化染色法检测各组脑组织Tau、Bcl-2、Bax蛋白的表达,分析Tau蛋白与Bcl-2、Bax蛋白的相关性。结果 HIBD组3、6、12、24、48 h时Tau、Bcl-2、Bax蛋白表达均高于假手术组(P均<0.05)。Tau蛋白与Bcl-2蛋白(r=0.901,P<0.05)、Bax蛋白(r=0.899,P<0.05)均呈正相关。结论 Tau、Bcl-2、Bax蛋白高表达均可促进HIBD后神经元凋亡,Tau蛋白与Bcl-2、Bax蛋白存在协同作用。

蛋白激酶在小鼠囊胚形成中的作用机制

在小鼠8-细胞胚向囊胚发育的过程中发生第1次细胞系分化。蛋白激酶(Akt)是一种功能强大的激酶,其在囊胚形成期间的作用尚未明确。本研究中结果显示,Akt蛋白特异性定位于桑葚胚的外层细胞。Akt特异性抑制剂MK2206可显著抑制小鼠囊胚形成,并导致滋养外胚层标志基因Cdx2表达水平降低、核蛋白ERα出现胞质内粗颗粒状表达。采用siRNA显微注射的方式敲低ERα也可导致小鼠囊胚发育率降低,并伴有Yap蛋白表达水平降低。

CX3CR1对创伤性骨髓炎大鼠骨骼肌微纤维、ERK/MAPK信号通路及炎症反应的影响

目的探索CX3CR1对创伤性骨髓炎大鼠骨骼肌微纤维、ERK/MAPK信号通路及炎症反应的影响。方法选取30只SPF级SD雄性大鼠,依据随机数字表法分为健康组、模型组、CX3CR1抑制组,每组10只。除健康组外,其余各组均建立创伤性骨髓炎模型。其中健康组、模型组大鼠均每日常规腹腔注射生理盐水,CX3CR1干预组向残腔内注射CX3CR1中和抗体进行处理。采用ELISA法检测血清中IL-6、IL-10、IL-1β、TGF-β水平,应用改良X线Norden评分检测骨骼肌微纤维,HE染色观察病理变化,免疫印迹及PCR检测股骨组织中细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinase,ERK1/2)、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)蛋白及mRNA表达。结果与健康组比较,模型组TGF-β、IL-1β、IL-10、IL-6等炎症因子含量均升高(P<0.05);与模型组比较,CX3CR1抑制组炎症因子含量降低(P<0.05)。与健康组比较,模型组随时间推移X线Norden评分升高(P<0.05);与模型组比较,CX3CR1抑制组X线Norden评分降低(P<0.05)。HE染色显示,健康组骨质完好;模型组可见大量炎性细胞浸润、灶性脓肿及坏死灶;CX3CR1抑制组大鼠的骨质明显改善,炎症反应降低。与健康组比较,模型组ERK1/2、MAPK蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,CX3CR1抑制组ERK1/2、MAPK蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。结论抑制CX3CR1可改善创伤性骨髓炎大鼠的疾病反应,可能与降低炎症反应、ERK/MAPK信号通路以及改善骨骼肌微纤维相关。

阿里红多糖组分对APP/PS1双转基因模型小鼠海马区AKT/GSK3β/Tau/P-tau蛋白表达的影响

探究阿里红多糖组分(FOPS-a和FOPS-b)对阿尔茨海默症模型小鼠海马区AKT/GSK3β/Tau/P-tau蛋白表达的影响。实验选用64只3月龄雄性APP/PS1双转基因AD模型小鼠,随机分为模型组、多奈哌齐组(0.65 mg/kg)、阿里红多糖a组分(FOPS-a)与阿里红多糖b组分(FOPS-b)高、中、低(60、30、15 mg/kg),同月龄野生型C57BL/6J小鼠为正常组,每组8只,各组分别给与药物和生理盐水灌胃给药90天。6月龄时通过跳台、旷场实验检测小鼠行为学的变化,采用尼氏染色观察各组小鼠海马区神经元形态变化,应用RT-PCR法检测小鼠海马区AKT、GSK3β、Tau mRNA转录水平,Western-blot法检测AKT、GSK3β、Tau、P-tau蛋白的表达。结果发现阿里红多糖组分(FOPS-a和FOPS-b)均能明显改善小鼠学习与记忆功能并保护海马区神经元的损伤,上调AKT mRNA转录水平和蛋白表达,下调GSK3β、Tau mRNA转录水平和GSK3β、Tau、P-tau蛋白表达。研究表明阿里红多糖组分(FOPS-a和FOPS-b)通过减少海马区神经元纤维缠结从而保护神经元的损伤,发挥拮抗AD的作用。

铁螯合剂对脑出血后继发性脑损伤大鼠记忆功能及海马神经元骨架蛋白的影响

目的探讨铁螯合剂(去铁胺)对脑出血后继发性损伤大鼠模型记忆功能及海马区神经元骨架蛋白表达的影响。方法采用胶原酶Ⅶ注射构建脑出血大鼠模型;成功造模后,对照组以21.6 mg/kg毗拉西坦生理盐水溶液灌胃处理,去铁胺(低、中、高剂量)组分别以50、100、200 mg/kg去铁胺灌胃处理,假手术组和模型组每日以生理盐水灌胃给药,连续4 w。跳台试验仪、避暗自动测试仪检测大鼠的记忆功能;尼式染色检测海马区神经元细胞的活性,末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)染色检测脑组织中细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量;Western印迹检测各组脑脏组织中一般调控阻遏蛋白激酶(GCN)2和β-微管蛋白(Tubulin)的表达。结果与假手术组相比,模型组、去铁胺(低、中、高)剂量组、对照组记忆潜伏时间、神经元细胞的活性、β-Tubulin表达明显下降,错误次数、神经元细胞的凋亡率、血清中TNF-α和IL-1β含量、GCN2表达明显升高(均P<0.05);与模型组相比,去铁胺(低、中、高)剂量组、对照组记忆潜伏时间、神经元细胞的活性、β-Tubulin表达明显升高,错误次数、神经元细胞的凋亡率、血清中TNF-α和IL-1β含量、GCN2表达明显下降(均P<0.05);并且具有明显的剂量依赖性(均P<0.05)。结论铁螯合剂(去铁胺)能明显降低脑组织中炎症性应激,下调脑组织神经元的凋亡率,增强海马区骨架蛋白β-Tubulin表达,抑制GCN表达,改善实验动物的记忆功能。

COX-2、PKC-α和miR-101在胃癌中的表达及相关性

目的探讨miR-101、蛋白激酶C-α(PKC-α)和环氧合酶2(COX-2)在胃癌中的表达及相关性。方法(1)荧光定量RT-PCR法检测57例胃癌组织标本对应的正常胃粘膜标本中miR-101的表达水平;(2)Western blotting检测57例胃癌组织标本对应的正常胃粘膜标本中PKC-α蛋白和COX-2蛋白的表达水平。结果(1)胃癌组织中miR-101表达明显低于正常胃粘膜(P<0.05);胃癌组织中COX-2及PKC-α蛋白表达高于正常胃粘膜(P<0.05);(2)胃癌中COX-2蛋白的表达与其分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤病理分期有关(P<0.05);胃癌中PKC-α蛋白的表达与肿瘤分期和淋巴转移有关(P<0.05);(3)胃癌组织中COX-2蛋白相对表达水平与胃癌组织中PKC-α蛋白表达呈正相关,与胃癌组织中miR-101表达呈负相关,两者相关具有统计学意义(r=0.531,P<0.05;r=-0.627,P<0.05)。结论 miR-101、PKC-α和COX-2可能参与了胃癌的发生发展;miR-101和PKC-α可能是抑制COX-2在胃癌中表达的新靶点。

补阳还五汤类方对氧化应激PC12模型细胞CDK5及凋亡因子的影响

目的观察补阳还五汤类方对氧化应激模型细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及凋亡因子的影响。方法以0.3 mmol·L^-1的H 2O 2与PC12细胞共同作用2 h,成功复制脑缺血体外氧化应激细胞模型,将PC12细胞分成正常组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。酶联免疫法检测胞外培养液中L-LDH的含量和胞内GSH的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量,细胞免疫荧光法检测胞内CDK5、Tau、Bax、Bcl-2蛋白的表达,qPCR法检测胞内凋亡因子caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果补阳还五汤类方能有效降低氧化应激模型细胞培养液中L-LDH的含量,增加胞内GSH、降低胞内ROS、抑制模型细胞内CDK5和Tau蛋白的过表达,下调凋亡因子caspase-3和Bax/Bcl-2。结论补阳还五汤类方可能通过CDK5信号转导途径有效抑制神经细胞凋亡,对脑缺血后神经细胞的损伤发挥保护作用。

知母皂苷对Aβ_(25-35)引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及其机制探讨

目的观察知母皂苷对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)激活小鼠巨噬细胞引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及探讨其作用机制。方法小鼠小脑颗粒细胞与腹腔巨噬细胞联合培养及腹腔巨噬细胞单独培养,损伤组加入Aβ25-35(20μmol/L),保护组同时加入不同质量浓度知母皂苷(10、30、100μmol/L)。联合培养的细胞通过免疫组化染色观察微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达和测定乳酸脱氢酶(LDH)。单独培养的巨噬细胞用ELISA法和Griess法分别测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO)。Western blot检测巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平。结果知母皂苷组可使MAP-2表达阳性的小脑颗粒细胞数目较Aβ25-35组明显增加,LDH漏出量减少;巨噬细胞培养液中IL-1β和NO生成量减少以及巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平明显降低。SB203580也能抑制Aβ25-35引起的IL-1β和NO生成量增加。结论 知母皂苷通过抑制Aβ25-35激活巨噬细胞p38MAPK通路,使IL-1β和NO表达水平降低,从而对小脑颗粒细胞起到保护作用。

Mdm2和pAkt在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中鼠双微体基因2(Mdm2)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)的表达和临床意义。方法:采用免疫组织化学EliVision法测定70例HCC样本和40例癌旁组织样本中Mdm2和pAkt的表达,分析它们与临床病理特征之间的关系。结果:Mdm2在HCC中阳性率为34.3%,显著高于癌旁组织(P<0.01),其表达在肿瘤>5 cm和有淋巴结转移患者的HCC样本中显著增高(P<0.05)。pAkt在HCC中表达率为37.1%,显著高于癌旁组织(P<0.01),其表达在肿瘤大小、病理分级、TNM分期和淋巴结转移等临床病理参数上差异有统计学意义(P<0.05)。Mdm2与pAkt表达在HCC组织中呈正相关关系(r's=0.441,P<0.01)。结论:Mdm2和pAkt与HCC进展有关,有可能作为评价HCC预后的指标。