抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法选取9~10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA(shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培养。CCK-8法测定上述2种细胞的增殖能力。Western blotting分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织中MIF、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1及NLRP3蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法测定8月龄各分组小鼠脑皮质组织中β淀粉样蛋白(Aβ)表达。结果3月龄和8月龄时,与WT组小鼠相比,model组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF相对表达水平显著上调,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF的相对表达水平显著降低,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力降低(P<0.05)。与WT组相比,model组小鼠外周血浆中MIF含量显著升高;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1以及NLRP3的蛋白表达水平显著升高;Aβ免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠外周血浆中MIF含量显著降低;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)和NLRP1的蛋白表达水平显著降低,Aβ免疫荧光强度明显降低(P<0.05),而NLRP3蛋白质的表达水平无明显变化(P>0.05)。与model组相比,model+shRNA NT组小鼠上述所有检测指标差异均无显著性(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF因子表达上调与脑皮质内NLRP1炎症小体激活成正相关,敲低lncRNA TUG1可缓解阿尔茨海默病的进展。

lncRNA TUG1靶向调节miR-31-5p对急性胰腺炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在急性胰腺炎(AP)中的作用机制。方法:体外培养小鼠胰腺腺泡细胞系(MPC-83),用脂多糖(LPS,10μg/ml)和雨蛙素(Caerulein,100 nmol/L)处理3 h,建立AP模型。实验分为对照组(control组)、AP组、AP+sh-NC组、AP+sh-TUG1组、AP+sh-TUG1+inhibitor-NC组、AP+sh-TUG1+miR-31-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA TUG1和miR-31-5p之间的靶向关系。构建AP小鼠模型,给予相应的干预后,qRT-PCR检测胰腺组织中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;试剂盒检测血清中炎症因子IL-1β、TNF-α含量和淀粉酶(AMY)和脂肪酶(Lipase)活性;HE染色观察胰腺组织病理学变化;TUNEL检测胰腺组织中细胞凋亡。结果:在Caerulein和LPS共同处理的MPC-83细胞中lncRNA TUG1水平、细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-31-5p水平、细胞活力降低(均P<0.05);敲低lncRNA TUG1可上调miR-31-5p,增加细胞活力,降低IL-1β和TNF-α水平,抑制细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-31-5p表达可减弱敲低lncRNA TUG1对细胞炎症反应的抑制作用。miR-31-5p是lncRNA TUG1的直接靶标。在体内敲低lncRNA TUG1表达可上调AP小鼠胰腺组织中miR-31-5p表达,降低IL-1β、TNF-α水平,减少细胞凋亡,改善胰腺组织损伤。结论:敲低lncRNA TUG1可能通过上调miR-31-5p表达水平,抑制炎症反应,改善AP。

LncRNA TUG1靶向AKT/mTOR信号通路促进卵巢癌细胞增殖和转移的研究

目的探究长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)通过介导蛋白激酶B/磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信号通路对卵巢癌细胞增殖和转移的影响及可能机制。方法收集112例行卵巢癌根治术患者的卵巢癌组织及癌旁组织,采用RT-PCR检测两组织、卵巢癌细胞(OC3,SKOV3,A2780,HO-8910)及人正常卵巢上皮细胞IOSE80中TUG1表达。选择SKOV3细胞并分为si-TUG1组(转染TUG1 shRNA)和NC组(转染空载体质粒),采用CCK8、流式细胞术、划痕实验检测2组细胞增殖水平、细胞周期及细胞转移能力,Western blot检测2组蛋白激酶B(AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-AKT、p-mTOR、细胞周期相关蛋白(Cyclin D1,Cyclin B1,CDK6)、转移相关蛋白(MMP-2,Snail)的相对表达量。结果RT-PCR检测结果显示,卵巢癌组织中TUG1表达高于癌旁组织(P<0.05),卵巢癌细胞OC3,SKOV3,A2780,HO-8910中TUG1表达均高于IOSE80细胞,且SKOV3中TUG1表达最高(P<0.05)。si-TUG1组细胞增殖水平、G_(2)/M期比例、细胞迁移距离均低于NC组,细胞G_(0)/G_(1)期比例高于NC组(P<0.05);si-TUG1组p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、Cyclin D1、Cyclin B1、CDK6、MMP-2,Snail蛋白表达低于NC组(P<0.05)。结论下调lncRNA TUG1表达能降低卵巢癌细胞增殖、转移能力,这可能与其能抑制AKT/mTOR信号通路有关。

lncRNA-TUG1作为竞争性内源RNA在心血管疾病中的研究进展

长链非编码RNA(long no-coding RNA,lncRNA)是指长度超过200个核苷酸的RNA分子,虽然本身并不具备直接编码蛋白质的作用,却可通过参与多种生物过程,包括细胞增殖、分化、凋亡等介导疾病的发生[1]。lncRNA-牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)被认为与人类疾病进展密切[2]。此外,过表达lncRNA-TUG1是心血管疾病后心脏预后不良的生物标志物[3]。

血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年糖尿病肾病患者肾脏损伤及预后的相关性

目的探讨血清长链非编码RNA(LncRNA)无远端同源框6反义RNA 1(Dlx6os1)、LncRNA牛磺酸上调基因1(TUG1)水平与老年糖尿病肾病(DN)患者肾脏损伤及预后的相关性。方法选取2019年1月—2021年1月西安交通大学第一附属医院榆林医院肾病学科收治的老年DN患者201例作为DN组,同期单纯T2DM患者112例作为单纯T2DM组,同期体检健康的老年人105例作为健康对照组,随访3年根据预后将老年DN患者分为不良预后亚组(61例)和良好预后亚组(140例)。检测血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1和肾脏损伤指标[计算肾小球滤过率(eGFR)、尿白蛋白肌酐比(UACR)]水平;采用Spearman相关系数分析血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年DN患者肾损伤的相关性;以老年DN患者预后为因变量,建立多因素非条件Logistic回归模型分析其影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平对其的预测价值。结果健康对照组、单纯T2DM组、DN组血清LncRNA Dlx6os1和UACR水平依次升高,血清LncRNA TUG1和eGFR依次降低(F/P=870.484/<0.001、566.671/<0.001、271.117/<0.001、196.722/<0.001);Spearman相关性显示,老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平与eGFR呈负相关、与UACR呈正相关(r/P=-0.816/<0.001、0.809/<0.001),血清LncRNA TUG1水平与eGFR呈正相关、与UACR呈负相关(r/P=0.832/<0.001、-0.806/<0.001);随访截至2024年1月,老年DN患者201例不良预后发生率为30.35%(61/201);多因素非条件Logistic回归显示,慢性肾脏病≥4期、UACR升高、LncRNA Dlx6os1升高为老年DN患者不良预后的独立危险因素[OR(95%CI)=5.758(1.480~22.401)、1.013(1.005~1.022)、1.426(1.201~1.693)],eGFR升高、LncRNA TUG1升高为保护因素[OR(95%CI)=0.958(0.939~0.978)、0.418(0.254~0.689)];ROC曲线显示,血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1及二者联合预测老年DN患者不良预后的AUC分别为0.774、0.777、0.852,二者联合预测的AUC最大(Z/P=2.930/0.003、3.335/0.001)。结论老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平升高、LncRNA TUG1水平降低,与肾脏损伤加重和不良预后风险增加有关,血清LncRNA Dlx6os1联合LncRNA TUG1水平预测老年DN患者不良预后的效能较高。

外周血lncRNA TUG1、miR-34b-5p水平与非小细胞肺癌患者术后发生肺部感染的关系研究

目的探讨外周血长链非编码核糖核酸(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)、微小核糖核酸(miRNA)-34b-5p表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者术后发生肺部感染的关系。方法选择2017年4月至2023年4月于该院接受手术治疗的951例NSCLC患者,根据术后是否发生肺部感染将患者分为感染组(106例)和非感染组(845例)。检测所有研究对象外周血中lncRNA TUG1、miR-34b-5p水平,采用Pearson相关分析lncRNA TUG1与miR-34b-5p之间的相关性;采用多因素Logistic回归分析NSCLC患者术后发生肺部感染的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA TUG1、miR-34b-5p诊断NSCLC患者术后发生肺部感染的价值。结果感染组外周血lncRNA TUG1水平低于非感染组(P<0.05),miR-34b-5p水平高于非感染组(P<0.05)。感染组外周血lncRNA TUG1水平与miR-34b-5p水平呈负相关(r=-0.516,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,手术时间过长、miR-34b-5p水平升高是NSCLC患者术后发生肺部感染的危险因素(P<0.05),lncRNA TUG1水平升高是NSCLC患者术后发生肺部感染的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,lncRNA TUG1、miR-34b-5p单项及联合检测诊断NSCLC患者术后发生肺部感染的曲线下面积分别为0.821(95%CI:0.771~0.866)、0.775(95%CI:0.720~0.820)、0.913(95%CI:0.877~0.946),2项指标联合检测诊断的AUC大于lncRNA TUG1、miR-34b-5p单项诊断(Z=3.220、2.895,P<0.05)。结论NSCLC患者外周血lncRNA TUG1水平下调、miR-34b-5p水平上调,均与患者术后发生肺部感染有关,2项指标可能是判断NSCLC患者术后发生肺部感染的潜在标志物。

长链非编码RNA-TUG1在胃癌发生和发展中的作用及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)TUG1在胃癌发生和发展中的作用及其机制。方法收集2018年10月—2020年9月于上海健康医学院附属嘉定区中心医院普外科行胃癌根治术的60例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织标本。选取其中3例存在淋巴结转移的患者组织样本进行lncRNA芯片检测,筛查胃癌和癌旁组织样本中的差异表达lncRNA。采用qRT-PCR技术检测TUG1基因在胃癌组织和细胞中的表达水平,分析其表达水平与临床及病理因素之间的关系。采用慢病毒Lenti-TUG1、Lenti-TUG1-shRNA转染胃癌细胞NCI-N87和MGC-803。根据慢病毒转染分为Lenti-TUG1处理组与Lenti-TUG1-shRNA处理组,设计不加慢病毒的细胞为对照组。采用细胞增殖实验和动物模型实验检测TUG1基因在体外和体内对NCI-N87和MGC-803生长的影响;采用细胞迁移和侵袭实验检测TUG1基因对NCI-N87和MGC-803细胞迁移和侵袭的影响;采用细胞凋亡实验检测TUG1基因对NCI-N87和MGC-803细胞凋亡的影响;采用蛋白质印迹法检测TUG1基因对凋亡及上皮间质转化(EMT)相关蛋白质表达的影响。结果lncRNA芯片检测结果显示,与癌旁组织比较,胃癌组织中有11种lncRNAs表达上调,有7种lncRNAs表达下调。根据患者胃癌组织中TUG1的中位相对表达量,将胃癌患者分为高表达组(30例)和低表达组(30例)。TUG1高表达组肿瘤体积≥5 cm^(3)、有淋巴结转移、有远处转移、TNM分期为Ⅲ期的患者构成均显著高于TUG1低表达组(P值均<0.05)。细胞增殖实验结果显示,与对照组比较,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的光密度(A)值均显著增高,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的A值均显著降低(P值均<0.01)。细胞迁移和侵袭实验结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞与MGC-803细胞的迁移数量和侵袭数量均显著增多,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞与MGC-803细胞的迁移数量和侵袭数量均显著减少(P值均<0.01)。细胞凋亡实验结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的凋亡比例均显著降低,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的凋亡比例均显著增高(P值均<0.01)。小动物活体成像仪检测结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组的NCI-N87细胞和MGC-803细胞的相对荧光强度均显著增高(P值均<0.01),Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞相对荧光强度均显著降低(P值均<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞中Bax、caspase-3和E-cadherin的蛋白质相对表达量均显著降低,RAB2A、MMP-14和Bcl-2的蛋白质相对表达量均显著增高;Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞中Bax、caspase-3和E-cadherin蛋白质相对表达量均显著增高,RAB2A、MMP-14和Bcl-2蛋白质相对表达量均显著降低(P值均<0.01)。在229例胃癌组织中,TUG1与RAB2A相对表达量呈正相关(r=0.180,P=0.006);miR-186与RAB2A相对表达量呈负相关(r=-0.147,P=0.026)。结论TUG1可能通过调控凋亡、EMT相关信号通路参与胃癌的发生、发展,针对TUG1的靶向治疗设计可能为胃癌治疗提供新的思路。

肝硬化病人血清lncRNA TUG1表达水平与肝功能、肝纤维化程度的相关性研究

目的 探讨肝硬化病人血清长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)表达情况及其与肝功能、肝纤维化程度的相关性。方法 选取2020年2月~2022年6月本院收治的乙型肝炎肝硬化病人92例为肝硬化组,均为Child-Pugh分级C级,根据肝纤维化程度分为轻中度组和重度组;同期88例本院健康体检者为对照组。采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血清lncRNA TUG1水平,采用全自动生化分析仪测定肝功能指标血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定肝纤维化指标层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)水平;采用Pearson相关分析肝硬化病人血清lncRNA TUG1与肝功能指标、肝纤维化指标的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA TUG1水平对肝硬化病人肝纤维化程度的评估效能;采用多元Logistic回归分析影响肝硬化病人肝纤维化程度的因素。结果 肝硬化组血清lncRNA TUG1、ALT、AST、TBIL、LN、PⅢP、CⅣ水平均显著高于对照组(P<0.001)。重度组肝硬化病程、HBV DNA、lncRNA TUG1、ALT、AST、TBIL、LN、PⅢP、CⅣ均显著高于轻中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。肝硬化病人血清lncRNA TUG1与HBV DNA、ALT、AST、TBIL、LN、PⅢP、CⅣ均呈正相关(r:0.54、0.50、0.49、0.50、0.51、0.52、0.52,P<0.05)。lncRNA TUG1评估肝硬化病人肝纤维化程度发展为重度的曲线下面积(AUC)为0.91,截断点为2.61。lncRNA TUG1、LN与肝硬化病人肝纤维化程度发展为重度有关(P<0.05)。结论 血清lncRNA TUG1水平与肝硬化病人肝功能、肝纤维化程度均相关,检测血清lncRNA TUG1水平有利于评估病人肝纤维化的发展趋势。

轻度认知障碍和阿尔茨海默病患者血清lncRNA TUG1、NLRP1的差异及诊断价值

目的研究轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)、Nod样受体蛋白3(NLRP1)的差异及诊断价值。方法选择河北省第三荣军优抚医院一般资料匹配的56例AD患者(AD组)、56例MCI患者(MCI组)和56名健康志愿者(对照组),采用简易精神状态量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估认知功能。比较三组血清中lncRNA TUG1、NLRP1、甘油三酯、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、同型半胱氨酸、尿酸水平的差异。结果三组血清lncRNA TUG1、NLRP1、TC水平:AD组>MCI组>对照组,差异有统计学意义(F=136.423、147.519、31.392,P<0.05);三组MMSE评分、MoCA评分、HDLC水平:AD组<MCI组<对照组,差异有统计学意义(F=136.481、119.571、22.572,P<0.05);血清lncRNA TUG1、NLRP1、TC与MMSE评分、MoCA评分呈负性相关(r=-0.341、-0.440、-0.229、-0.408、-0.374、-0.236,P<0.05),血清HDLC与MMSE评分、MoCA评分呈正性相关(r=0.283、0.273,P<0.05);血清lncRNA TUG1、NLRP1单独诊断MCI的曲线下面积(AUC)为0.841、0.841,联合诊断MCI的AUC为0.913,联合诊断的AUC高于单独诊断(P<0.05);血清lncRNA TUG1、NLRP1单独鉴别MCI和AD的AUC为0.767、0.827,联合鉴别MCI和AD的AUC为0.911,联合鉴别MCI和AD的AUC高于单独鉴别(P<0.05)。结论MCI和AD患者血清lncRNA TUG1、NLRP1水平增加且与认知功能下降相关,血清lncRNA TUG1、NLRP1对诊断MCI、鉴别AD具有一定临床价值。

lncRNA TUG1吸附microRNA-144对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)吸附microRNA-144(miR-144)对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响机制。方法 B6.MRL-FaslprNju系统性红斑狼疮模型小鼠20只和C57BL/6健康小鼠5只在适应性条件下喂养5 d。每天收集B6.MRL-FaslprNju系统性红斑狼疮模型小鼠24 h尿量,尿蛋白浓度> 1 mg/L表明狼疮肾炎发病,为狼疮肾炎组。C57BL/6小鼠为正常组。分离纯化两组小鼠肾小球系膜细胞。对lncRNA TUG1实施亚细胞定位,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测狼疮肾炎组和正常组小鼠肾组织中lncRNA TUG1和miR-144 mRNA相对表达量。狼疮肾炎组小鼠肾小球系膜细胞转染并分为NC组(肾小球系膜细胞转染阴性对照序列)、TUG1过表达组(肾小球系膜细胞转染TUG1)、shTUG1组(肾小球系膜细胞转染sh-TUG1)、miR-144 mimic组(肾小球系膜细胞转染miR-144 mimic)、TUG1过表达+miR-144 mimic组(肾小球系膜细胞转染TUG1和miR-144 mimic)。双荧光素酶报告实验验证lncRNA TUG1和miR-144的靶向关系,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。Western blotting法检测纤维化标记因子Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(FN)的蛋白相对表达量。MTT法检测各组细胞增殖活力,Transwell实验检测各组细胞侵袭数,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果与正常组小鼠比较,狼疮肾炎组小鼠肾组织中的miR-144 mRNA相对表达量升高,lncRNA TUG1 mRNA相对表达量降低(P <0.05)。lncRNA TUG1与miR-144存在靶向结合关系。NC组、TUG1过表达组、sh-TUG1组、miR-144 mimic组、TUG1过表达+miR-144 mimic组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平比较,差异有统计学意义(P <0.05);与NC组比较,TUG1过表达组TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低,miR-144 mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P <0.05)。各组的ColⅣ、FN蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P <0.05);与NC组比较,TUG1过表达组ColⅣ和FN蛋白相对表达量降低,miR-144 mimic组ColⅣ、FN蛋白相对表达量升高(P <0.05)。各组不同时间点的肾小球系膜细胞增殖活力比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点的肾小球系膜细胞活力有差异(P <0.05);(2)各组肾小球系膜细胞活力有差异(P <0.05);(3)各组的细胞活力变化趋势有差异(P <0.05);与NC组48 h和72 h比较,TUG1过表达组48 h和72 h细胞增殖活力降低(P <0.05),sh-TUG1组48 h和72 h细胞增殖活力增强(P <0.05),miR-144 mimic组48 h和72 h细胞增殖活力增强(P <0.05)。各组肾小球系膜细胞侵袭数和细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P <0.05);与NC组比较,TUG1过表达组的细胞侵袭数减少(P <0.05),细胞凋亡率升高(P <0.05);sh-TUG1组细胞侵袭数增多(P <0.05),细胞凋亡率降低(P <0.05);miR-144 mimic组细胞侵袭数增多(P <0.05)、细胞凋亡率降低(P <0.05)。结论 lncRNA TUG1吸附miR-144进而抑制狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌,减少细胞增殖并促进凋亡。

牛磺酸上调基因1(TUG1)对肝纤维化的作用及其机制

目的:探讨牛磺酸上调基因1(TUG1)在肝纤维化中的作用机制。方法:按照文献建立TGF-β1(5 ng/ml)刺激的活化肝星状细胞模型和经典的1%DMN(1 ml/kg/d)致大鼠肝纤维化模型,将肝纤维化大鼠和活化肝星状细胞(HSC)均分为模型对照组、阴性对照组(沉默TUG1阴性对照)、siRNA干扰组(TUG1基因沉默组)。实验结束后利用苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠肝脏组织病理变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白免疫印记(Western blot)分别测定大鼠肝组织及活化肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TUG1、I型胶原蛋白(collagenI)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、Smad2、Smad3表达水平。结果:肝组织病理学检查显示,沉默TUG1能够明显缓解肝脏纤维化病理改变,Western blot结果显示,沉默TUG1能够显著降低大鼠肝组织和活化肝星状细胞中TUG1、α-SMA、collagenI、MMP-2、TIMP-1、Smad2、Smad3基因与蛋白表达水平(P<0.05)。与模型对照组相比,阴性对照组的TUG1、α-SMA的蛋白与基因水平明显升高(P<0.05)。与模型对照组和阴性对照组相比,siRNA干扰组中TUG1,α-SMA,collagenI,MMP-2,TIMP-1,Smad2 and Smad3的蛋白和基因水平显著降低(P<0.05),而在模型对照组和阴性对照组中TUG1,α-SMA,collagenI,MMP-2,TIMP-1,Smad2 and Smad3的蛋白和基因表达水平之间差异无显著性。结论:TUG1在肝纤维化组织和活化的肝星状细胞中显著上调,沉默TUG1可能通过抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路改善1%DMN致大鼠肝纤维化病理损伤,降低活化肝星状细胞中纤维化相关蛋白水平,发挥抗肝纤维化的作用。

lncRNA TUG1和PCAT-1表达水平与多发性骨髓瘤预后的关系及其诊断价值分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)和前列腺癌相关转录产物1(PCAT-1)在多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的表达水平及与预后的关系,并探讨其诊断价值。方法选取2013年1月至2016年11月于该院住院治疗的MM患者90例作为MM组,另选取90例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清lncRNA TUG1和PCAT-1的表达水平;分析lncRNA TUG1和PCAT-1的表达水平与临床病理特征的关系;分析lncRNA TUG1和PCAT-1的表达水平与MM患者预后的关系;采用COX风险回归模型分析影响患者预后的危险因素;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析TUG1和PCAT-1对MM的诊断价值。结果MM组患者的血清lncRNA TUG1和PCAT-1表达水平高于对照组(P<0.05);lncRNA TUG1高表达组与低表达组、lncRNA PCAT-1高表达组与低表达组在年龄、β2微球蛋白和Ca2+水平方面比较,差异均有统计学意义(P<0.05);lncRNA TUG1高表达组3年生存率低于lncRNA TUG1低表达组(P<0.05),lncRNA PCAT-1高表达组3年生存率低于lncRNA PCAT-1低表达组(P<0.05)。多因素COX风险回归模型分析显示,年龄较大、β2微球蛋白水平较高、lncRNA TUG1高表达和PCAT-1高表达是影响MM患者预后的危险因素(P<0.05)。血清lncRNA TUG1的曲线下面积为0.777(95%CI:0.704~0.850);血清lncRNA PCAT-1的曲线下面积为0.648(95%CI:0.566~0.729)。结论血清lncRNA TUG1和PCAT-1在MM患者中高表达,lncRNA TUG1辅助诊断MM的价值优于lncRNA PCAT-1,血清lncRNA TUG1和PCAT-1表达水平与MM患者的预后相关。

长链非编码RNA TUG1对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(long non-coding RNA taurine up-regulated gene 1,lncRNA TUG1)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集2016年3月至2017年12月在江西省赣州市人民医院行胃部手术的病理检查确诊胃癌患者40例,取患者胃部肿瘤组织及其相应癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm处),用qPCR检测胃癌组织标本和胃癌AGS细胞中lncRNA TUG1表达水平。向AGS细胞中转染lncRNA TUG1过表达质粒和TUG siRNA,借助CCK-8、qPCR和流式细胞术检测lncRNA TUG1对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。结果:胃癌组织中lncRNA TUG1表达水平显著高于癌旁组织,其与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤浸润程度、淋巴转移、肿瘤分化程度和TNM分期等因素均不相关。过表达lncRNA TUG1显著抑制AGS胃癌细胞中CDKN1A、BAX和Caspase-3表达、减少G1期细胞比例和增加S期细胞比例、提高细胞增殖活力、降低细胞凋亡率;而干扰敲减lncRNA则显著促进细胞中CDKN1A、BAX和Caspase-3表达、增加G1期细胞比例和减少S期细胞比例、降低细胞增殖活力、升高细胞凋亡率。结论:胃癌组织中高表达的lncRNA TUG1促进胃癌细胞增殖而抑制细胞凋亡。

胃腺癌组织长链非编码RNA TUG1表达变化及其与p53蛋白的关系

目的观察胃腺癌组织长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(TUG1)表达变化,并分析其与p53蛋白的关系。方法收集108例胃腺癌患者肿瘤组织及其癌旁正常组织,采用real-time PCR法检测各组织TUG1表达,采用免疫组化法检测各组织p53表达,分析胃腺癌组织TUG1表达与患者临床病理特征及p53表达的关系。结果胃腺癌组织TUG1相对表达量为2. 36±1. 01、高表达90例,高于癌旁正常组织的0. 93±0. 54、18例(P均<0. 01)。TUG1相对表达量在胃腺癌低分化者高于高分化者,浸润深度T3、T4者高于T1、T2者,有区域淋巴结转移者高于无区域淋巴结转移者,有远处转移者高于无远处转移者,临床分期高者高于临床分期低者(P均<0. 05),但不同年龄、性别、肿瘤直径及有无脉管侵犯、神经侵犯患者TUG1相对表达量比较差异均无统计学意义(P均> 0. 05)。胃腺癌组织p53阳性表达率为61%,高于癌旁正常组织的39%(P <0. 01)。Pearson相关分析显示,TUG1高表达与p53阳性表达呈正相关关系(r=0. 204,P <0. 05)。结论长链非编码RNA TUG1在胃腺癌组织中表达升高,且与p53表达呈正相关关系,有可能成为胃腺癌靶向治疗的新靶标。

长链非编码RNA TUG1在肝细胞癌中的生物信息学分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)在肝细胞癌(HCC)中的意义,并对TUG1进行靶基因预测,为TUG1在HCC中的进一步研究提供借鉴。方法利用UALCAN数据库分析TUG1在HCC中的差异表达,并对TUG1进行生存分析。利用RegRNA 2.0生物学软件、HMDD、targetscan、microT-CDS进行TUG1的靶基因预测,构建lncRNA TUG1-microRNAs-mRNAs调控网络。并运用FunRich平台对预测的靶基因进行Gene Ontology(GO)分析和KEGG信号转导通路富集分析。结果 TUG1在HCC中表达明显增高,随着肿瘤分级增高TUG1的表达呈上升趋势。lncRNA TUG1低表达患者的总生存期较高表达患者明显延长。TUG1上存在hsa-mir-122-5p、hsa-mir-200a-3p、hsa-mir-34c-3p、hsa-mir-629-3p这4个与HCC相关microRNAs的可能结合位点,从而调节下游245个靶基因,形成了lncRNA TUG1-microRNAs-mRNAs调控网络。在生物学过程中,microRNAs靶基因高度富集到碱基、核苷、核苷酸和核酸代谢调节等过程。KEGG pathway分析中,microRNAs靶基因高度富集到Syndecan、TRAIL等介导的信号通路。结论TUG1在HCC中表达水平增高,并与不良预后有关。利用生物信息学方法,可以从分子水平探究肿瘤发生机制,可为后续实验及临床诊疗提供有价值的信息。

LncRNA TUG1靶向miR-138-5p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(TUG1)和微小RNA 138-5p(miR-138-5p)在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-qPCR法检测胰腺癌组织及其细胞系中TUG1和miR-138-5p表达水平。通过小干扰RNA下调PANC-1细胞中TUG1水平或转染miR-138-5p mimics至PANC-1细胞,MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TUG1和miR-138-5p的靶向关系。共转染TUG1-siRNA和miR-138-5p mimics至PANC-1细胞,MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在胰腺癌组织及其细胞系中,TUG1表达上调(P<0.05)而miR-138-5p表达下调(P<0.05)。在PANC-1细胞中敲减TUG1或过表达miR-138-5p,细胞活力、迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明,TUG1可靶向调控miR-138-5p表达。MTT、Transwell实验结果显示,降低miR-138-5p的表达可逆转TUG1-siRNA对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:敲减TUG1能够通过上调miR-138-5p水平抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

鼻咽癌外泌体通过LncTUG1促进内皮细胞增殖和血管生成

目的探讨鼻咽癌来源外泌体通过长非编码RNA牛磺酸上调基因1(LncTUG1)促进内皮细胞(HUVECs)增殖和血管生成的作用及其可能的作用机制。方法采用脂质体转染法转染CNE1细胞并将其分为Blank组、sh-NC组、sh-LncTUG1-1组、sh-LncTUG1-2组和sh-LncTUG1-3组。将HUVECs与外泌体共孵育,设为PBS组和CNE1-Exo组或PBS组、CNE1-Exo-sh-NC组和CNE1-Exo-sh-LncTUG1组。RT-PCR实验检测人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、HONE1、正常鼻咽上皮NP69和人脐静脉HUVECs中LncTUG1的表达;透射电镜观察外泌体形态;Nanosight纳米粒度颗粒跟踪分析仪检测外泌体粒径;PKH67试剂盒检测HUVECs对外泌体的摄取情况;Western blot检测外泌体标志性蛋白CD63、CD9和TSG101蛋白表达;CCK-8试剂盒检测HUVECs细胞活力;EdU实验检测HUVECs细胞增殖;Matrigel血管形成实验检测HUVECs血管形成能力。结果CNE1、CNE2和HONE1细胞中LncTUG1表达水平均高于NP69细胞(P<0.01),且CNE1细胞中LncTUG1表达水平最高。成功分离NP69来源外泌体(NP69-Exo)和CNE1来源外泌体(CNE1-Exo、CNE1-Exo-sh-NC、CNE1-Exo-sh-LncTUG1),外泌体呈圆形囊泡结构,直径均约为100 nm,且高表达CD63、CD9和TSG101蛋白。PKH67标记的外泌体可被HUVECs摄取。CNE1-Exo组HUVECs中LncTUG1的表达、细胞活力、EdU阳性细胞率、管状网络结构数量明显高于PBS组(P<0.05)。CNE1-Exo-sh-NC组HUVECs中LncTUG1的表达、细胞活力、EdU阳性细胞率和管状网络结构数量明显高于PBS组(P<0.05),CNE1-Exo-sh-LncTUG1组中HUVECs中LncTUG1表达、细胞活力、EdU阳性细胞率和管状网络结构数量明显低于CNE1-Exo-sh-NC组(P<0.05)。结论鼻咽癌外泌体通过LncTUG1促进内皮细胞增殖和血管生成,在鼻咽癌中发挥重要作用。

急性心肌梗死患者血清中LncRNA TUG1的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)在急性心肌梗死(AMI)患者血清中的表达及临床意义。方法选取2018年3月至2020年10月于平顶山市第一人民医院收治的AMI患者(AMI组)145例作为研究对象,另选取同期在我院体检的健康志愿者(健康对照组)150例作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清LncRNA TUG1水平,酶联免疫(ELISA)法检测血清心肌损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;Pearson法分析AMI组受试者血清LncRNA TUG1水平与CK-MB、cTnI水平的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线评估血清LncRNA TUG1水平对AMI的诊断价值。结果与健康对照组相比,AMI组受试者血清LncRNA TUG1、CKMB、cTnI水平均显著升高(P<0.05);AMI组受试者血清LncRNA TUG1水平与CK-MB、cTnI水平均呈显著正相关(r=0.563、r=0.485,P<0.05);血清LncRNA TUG1水平诊断AMI的ROC曲线下面积为0.975(95%CI:0.956~0.995),最佳截断值为1.415,敏感度为96.6%,特异性为90.7%,约登指数为0.873。结论LncRNA TUG1在AMI患者血清中表达上调,与心肌损伤指标水平关系密切,对AMI早期诊断具有一定参考价值。

长链非编码RNA TUG1在结肠直肠癌组织中的表达与分析

目的:检测结肠直肠癌组织长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(taurine upregulated gene1,TUG1)的表达,并探讨其与结肠直肠癌临床病理因素及预后的相关性及临床意义。方法:采用实时定量聚合酶链反应检测106例结肠直肠癌病人的癌组织与相应的癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm)TUG1表达。分析TUG1表达与临床病理的相关性以及TUG1表达与结肠直肠癌预后的相关性。术后随访3~60个月。结果:TUG1在结肠直肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(P=0.003),表达水平与肿瘤直径(P<0.001)、CEA水平(P=0.049)以及TNM分期(P=0.005)密切相关。TUG1高表达的结肠直肠癌病人,生存率低于低表达病人(P=0.002 5)。多因素分析表明,TUG1可作为结肠直肠癌病人的独立预后因素。结论:TUG1在结肠直肠癌的发生发展中起重要作用,可作为反映结肠直肠癌生物学行为的有效指标。

lncRNA TUG1在溃疡性结肠炎患儿血清中的表达及意义

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)在溃疡性结肠炎患儿血清中的表达及意义。方法选择活动期溃疡性结肠炎患儿89例(研究组),同期选择体检的健康儿童101例为对照组。根据溃疡性结肠炎患儿病情复发情况,分为复发组52例和未复发组37例。实时荧光定量PCR检测血清中lncRNA TUG1表达。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。Pearson法分析血清lncRNA TUG1与IL-1β、IL-6的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA TUG1水平诊断溃疡性结肠炎的价值。结果与对照组相比,研究组血清lncRNA TUG1相对表达水平、IL-1β、IL-6水平较高(P<0.05)。与轻度组相比,中度组、重度组血清lncRNA TUG1相对表达水平较高(P<0.05),与中度组相比,重度组血清lncRNA TUG1相对表达水平较高(P<0.05)。Pearson法分析显示,lncRNA TUG1与IL-1β、IL-6呈正相关(P<0.05)。ROC曲线显示,lncRNA TUG1诊断溃疡性结肠炎的曲线下面积(AUC)为0.861,其敏感度为82.00%,特异度为89.10%。与未复发组相比,复发组血清lncRNA TUG1相对表达水平较高(P<0.05)。结论lncRNA TUG1在溃疡性结肠炎患儿血清中表达上调,lncRNA TUG1对溃疡性结肠炎具有诊断价值,其可能影响患儿体内炎症反应及预后。