Anti-tumor effects induced by gene vaccines co-expressing truncated human prostate specific membrane antigen gene and mouse 4-1BBL

Objective To investigate the influence of m4-1BBL on anti-tumor effects induced by truncated human prostate specific membrane antigen ( tPSMA ) gene in mice. Methods A eukaryotic expression plasmid encoding tPSMA and m4-1BBL ( pDC316-tPSMA-IRES m4-1BBL) ,pDC316-tPSMA and pDC316 were constructed.

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对食管鳞癌ECa109细胞增殖及TIG1基因表达与甲基化状态的影响

目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxy-cytidine,5-aza-CdR)对食管鳞癌细胞株ECa109增殖抑制作用,以及对ECa109中TIG1基因甲基化状态及其mRNA表达的影响。方法:实验组分别使用10、20、50、100μmol/L的5-aza-CdR处理ECa109细胞,对照组用不添加5-aza-CdR培养基培养;采用MTT法检测两组细胞生存率的变化;MSP检测TIG1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测TIG1基因mRNA表达水平。结果:5-aza-CdR可以显著抑制ECa109的生长,实验组细胞生存率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。实验组同种药物浓度,作用时间延长,生存率显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);同一作用时间,随着药物浓度增加,细胞生存率降低,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组ECa109细胞TIG1基因处于高甲基化状态,经过10μmol/L及20μmol/L的5-aza-CdR处理细胞株120h后,TIG1基因的甲基化部分解除。对照组ECa109细胞中无TIG1 mRNA表达,采用10μmol/L及20μmol/L浓度药物处理72、120、168h后细胞株中TIG1 mRNA恢复表达,且20μmol/L处理组细胞较10μmol/L组TIG1 mRNA表达增强。结论:5-aza-CdR可以抑制ECa109细胞生长,且具有剂量及时间依赖性;ECa109中TIG1基因甲基化阳性,其mRNA的表达缺失;经5-aza-CdR干预后可使TIG1基因发生去甲基化修饰,恢复表达,去甲基化修饰具有时间及剂量依赖效应。

食管鳞癌组织中TIG1基因甲基化及其mRNA表达的研究

目的:探讨他扎罗汀诱导基因1(tazarotene-induced gene-1,TIG1)基因甲基化及表达与食管鳞癌发生、发展的关系。方法:采用甲基化特异性PCR检测43例食管鳞癌组织、20例癌旁组织和15例正常组织中TIG1基因甲基化状态;实时荧光定量PCR法法检测TIG1 mRNA的表达。结果:食管鳞癌组织TIG1基因启动子甲基化率为25.6%(11/43),癌旁组织5.0%(1/20),正常组织中未检测到其甲基化,差异有统计学意义(P<0.05);其甲基化水平与患者性别、年龄、肿瘤生长部位和分化程度无关(P>0.05),但与患者TNM分期(P<0.01)及淋巴结转移(P<0.05)有关。鳞癌组织TIG1 mRNA显著低于癌旁组织(P<0.05)及正常组织(P<0.01),甲基化组织TIGI mRNA表达显著低于非甲基化组织(P<0.01)。结论:甲基化可能是食管鳞癌中TIG1基因失活的重要机制,与患者病理分期及淋巴结转移有关。

银屑病皮损中TIG1 mRNA表达及其与异常分化的关系

目的检测银屑病中抑癌基因TIG1的表达变化以揭示其在寻常型银屑病发病机制中的作用。方法用原位杂交的方法检测正常组皮肤组织、银屑病组未受累皮肤组织和皮损中TIG1m RNA的表达。结果在正常组皮肤组织中,TIG1表达于表皮全层;在银屑病组未受累皮肤组织和银屑病边缘皮损中,可见TIG1表达于基底上层,在银屑病中间皮损中无表达。TIG1在银屑病边缘皮损和未受累组织基底层中的表达低于其在正常组皮肤基底层中的表达(P<0.01);TIG1在银屑病中间皮损基底上层中的表达低于其在未受累皮肤和正常组皮肤的表达(P<0.01)。结论TIG1可保持表皮正常分化功能,TIG1的降低可能与银屑病角质形成细胞的异常分化相关。

颅内原始神经外胚叶肿瘤中TIG1启动子的高甲基化

目的检测颅内原始神经外胚叶肿瘤(primitive neuroectodermal tumor,PNET)中TIG1(tazarotene induced gene-1)基因启动子的甲基化状态。方法使用甲基化特异PCR(MSP)法检测25例原发髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)、9例原发幕上原始神经外胚叶肿瘤(supratentorial primitive neuroectodermal tumor,SPNET)和7株PNET细胞系中TIG1的甲基化水平。用RT-PCR方法检测PNET细胞中TIG1的转录水平。并用去甲基化试剂处理PNET细胞,观察基因转录水平与甲基化状态间的关系。结果原发MB及SPNET中TIG1启动子的异常甲基化率分别为40%(10/25)和44%(4/9)。该基因在PNET中的甲基化异常是肿瘤特异性的。PNET细胞系中均有TIG1高甲基化,并伴有转录水平的表达减少或丢失(7/7)。TIG1的表达水平与启动子甲基化状态呈明显负相关。并且,这种相关性得到去甲基化试剂处理实验的支持。经去甲基化试剂5-aza-2′-deoxycyti-dine处理的全部细胞系中TIG1的表达都得到了恢复。结论大部分PNET细胞系中都有TIG1表达的减少和缺失,且该基因缺失与启动子高甲基化密切相关。同时,TIG1的高甲基化率在原发PNET中也能检测到,提示TIG1可能在颅内PNET的肿瘤发生中起重要作用。

缺氧对人胃癌细胞HIF-1α及DEC1表达的影响

目的研究缺氧对人胃癌细胞株BGC823缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及分化型胚胎软骨发育基因1(DEC1)表达的影响。方法将细胞株BGC823分为实验组(缺氧24 h组、缺氧48 h组)、对照组(常氧24 h组、常氧48 h组)和阴性对照组(PBS作为一抗)。实验组置于5%CO2、0.5%O2缺氧培养箱培养,对照组于37℃、5%CO2的培养箱中培养。用RT-PCR及Western blotting的方法检测两组细胞HIF-1α与DEC1各水平的表达。另外,用免疫细胞化学的方法进一步检测HIF-1α与DEC1的表达并进行相关性分析。结果缺氧处理后,HIF-1α和DEC1的mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。HIF-1α及DEC1 mRNA表达水平随缺氧时间增加而上升,HIF-1α及DEC1蛋白表达水平随缺氧时间增加而下降。实验组HIF-1α及DEC1阳性率明显高于对照组(P<0.05)。结论缺氧条件下,胃癌细胞株BGC823中HIF-1α、DEC1各水平的表达增加,二者具有显著相关性。缺氧可能通过诱导HIF-1α的大量表达,转录激活DEC1的表达。DEC1作为HIF-1α的下游靶基因,在胃癌细胞适应缺氧环境中发挥重要作用。

启动子甲基化调控胰腺癌他扎罗汀诱导基因1表达的研究

目的研究他扎罗汀诱导基因1(tazarotene-induced gene-1,TIG1)在胰腺癌中的表达情况及启动子在胰腺癌细胞中的甲基化状态。方法收集67组胰腺癌和对应癌旁组织,用SP法进行TIG1蛋白检查并分析TIG1在癌、癌旁组织的表达差异。培养胰腺癌细胞株PANC1、Bx PC3和SW1990,提取细胞总DNA,甲基化修饰后亚硫酸盐测序PCR(BSP)分析启动子Cp G岛甲基化状态;筛选细胞总RNA,用实时定量PCR(real-time PCR)依次测各细胞株、经5-杂氮-2-脱氧胞嘧啶(5-aza-d C)干预前后TIG1 mRNA的表达差异。结果 TIG1在癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05)。TIG1的表达与胰腺癌的大小、分期无相关性,但与部位存在相关性(P<0.05)。TIG1在Bx PC3和SW1990细胞中存在高甲基化状态,分别为(92±2)%和(86±2)%,在PANC1细胞甲基化率为(40±2)%。TIG1甲基化的Bx PC3和SW1990细胞经5-aza-d C处理后TIG1表达明显上调(P<0.05),而甲基化的PANC1细胞经同样处理后TIG1的表达变化不明显。结论癌组织中TIG1的表达显著低于癌旁组织。不同部位胰腺癌TIG1的表达存在差异。TIG1基因在Bx PC3和SW1990胰腺癌细胞中的低表达与甲基化有关。TIG1基因甲基化可能是调控胰腺癌细胞TIG1表达的重要分子机制之一。

白细胞介素22对HaCaT细胞他扎罗汀诱导基因3表达的影响

目的探讨白细胞介素22（IL-22）对HaCaT细胞他扎罗汀诱导基因3（TIG3）表达的影响。方法用12．5。100μg/LIL-22、IL-22＋PD98059（MAPK—ERK1／2通路抑制剂）及IL-22＋AG490（JAK2／sTAT3通路抑制剂）干预处理HaCaT细胞24h后，分别提取HaCaT细胞总蛋白及总RNA，用免疫荧光、Western印迹法、ELISA法检测TIG3的蛋白水平，用实时荧光定量RT—PCR检测TIG3mRNA水平的改变。结果免疫荧光检测显示，HaCaT细胞内TIG3蛋白主要表达在细胞质。用Western印迹法检测，用12．5、25、50、100μg／L的IL-22干预处理后，HaCaT细胞中TIG3蛋白表达分别为0．743±0．035，0．678±0．040，0．582±0．041和0．328±0．032，均低于对照组0．839±0．045（P〈0．05）。酶联免疫法检测的结果示，上述浓度的IL-22干预处理后，TIG3蛋白水平变化的趋势与Western印迹法的结果一致。定量RT—PCR检测示TIG3mRNA分别为对照组的0．838±0．036，0．686±0．061，0．565±0．047，0．457±0．033（P〈0．05）。加入信号通路抑制剂后，TIG3蛋白和mRNA水平降低程度较无抑制剂组减少，差异有统计学意义。结论IL-22可剂量依赖抑制HaCaT细胞TIG3的表达，其机制可能与MAPK—ERK1／2和JAK2／STAT3通路有关。