烟草有效成分的提取及烟草绿原酸的初步分离

采用正交实验方法对烟草中绿原酸、烟碱和茄尼醇3种有效成分进行超声波辅助提取工艺研究,并利用大孔吸附树脂对烟草绿原酸进行初步分离.结果表明,超声波辅助提取的最佳工艺条件为:以pH 4的95%乙醇进行提取,料液比1∶15,80℃提取2次,每次45 min.通过对8种大孔吸附树脂进行静态吸附实验,表明XDA_1树脂为吸附分离烟草绿原酸的理想树脂.

烟草根结线虫病产量损失估计的初步研究

根结线虫病对烟草产量及品质性状影响的研究结果表明,受根结线虫危害后,烟叶中蛋白质含量升高,而还原糖和烟碱含量下降.根据研究结果组建了根结线虫初始密度与烟草相对产量、线虫初始密度与病情,以及病情与产量损失率之间关系的数学模型.

烟草NtTkr尾部T1084缺失和替换突变原核表达载体的构建及诱导表达

已知烟草驱动家族新成员NtTkr尾部第3个卷曲螺旋(Coiled-coil,CC3)第1084位苏氨酸(T1084)对靶蛋白的结合至关重要,通过对NtTkr尾部的酵母双杂交筛选得到多个与Ntkr互作的候选蛋白。为确定T1084缺失(T1084d)或替换(T1084A)突变对NtTkr与这些候选蛋白体外互作的重要性,首先以pBI121-NtTkr为模板,通过重叠延伸PCR扩增得到烟草NtTkr尾部T1084d、T1084A片段并将其克隆入质粒pUC19,经蓝白斑筛选、SmaⅠ-BamHⅠ双酶切鉴定后送去测序,获得正确的T1084缺失和替换的NtTkr尾部;然后将重组的pUC19-T1084d、pUC19-T1084A与pMXB10进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切,回收目的片段和载体片段并连接,连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选得到重组子,进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切鉴定,最终成功构建pMXB10-NtTkr-T1084A和pMXB10-NtTkr-T1084d原核表达载体;最后将原核表达载体pMXB10-T1084d和pMXB10-T1084A转入BL21(DE3)中,分别经0.05,0.06mmol/LIPTG浓度诱导,12%SDS-PAGE电泳检测蛋白质表达情况,结果证明获得了NtTkr-T1084d-1317和NtTkr-T1084A-1320的成功表达,且IPTG浓度大于0.06mmol/L时,均可高效表达约77ku的NtTkr-T1084A-1320和76.2ku的NtTkr-T1084d-1317蛋白量。