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茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析
被引量:
4
1
作者
史成颖
李正国
+4 位作者
徐乾
李海婧
汤之近
邓威威
宛晓春
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期40-47,共8页
在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2...
在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2基因全长为1 710bp,开放阅读框长1 071bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%。(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白。(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺。
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关键词
茶树
谷氨酰胺
茶氨酸
基因克隆
原核表达
酵母表达
酶活性
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职称材料
茶树氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达
被引量:
3
2
作者
马成英
施江
+5 位作者
吕海鹏
张悦
谭俊峰
郭丽
彭群华
林智
《茶叶科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期532-540,共9页
获得了一类茶树氧甲基转移酶基因cDNA全长并构建了该基因的原核表达载体。以从茶树叶片中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR与RACE克隆技术获得氧甲基转移酶(O-methyltransferase)基因cDNA全长1 280 bp,其开放阅读框为1 068 bp,编码355个氨...
获得了一类茶树氧甲基转移酶基因cDNA全长并构建了该基因的原核表达载体。以从茶树叶片中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR与RACE克隆技术获得氧甲基转移酶(O-methyltransferase)基因cDNA全长1 280 bp,其开放阅读框为1 068 bp,编码355个氨基酸,推测的蛋白分子量为39.1 kD,理论等电点为5.68。其氨基酸序列与葡萄和蓖麻氧甲基转移酶基因相似性分别为73%、71%。将该基因片段连接到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21后诱导重组蛋白的表达,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到1条与预测融合蛋白分子量相符的外源蛋白。
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关键词
茶树
氧甲基转移酶
克隆
原核表达
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职称材料
茶树黄酮醇合成酶基因的克隆与原核表达
被引量:
9
3
作者
马春雷
陈亮
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期433-438,共6页
本研究采用EST测序技术和RT-PCR技术,获得了一个茶树茶多酚代谢中的重要基因——黄酮醇合成酶(FLS)基因,在GenBank登录(GenBank accessionNo.EF205150),其序列全长1317bp,其中开放阅读框长996bp,编码331个氨基酸,3'端有一个明显的...
本研究采用EST测序技术和RT-PCR技术,获得了一个茶树茶多酚代谢中的重要基因——黄酮醇合成酶(FLS)基因,在GenBank登录(GenBank accessionNo.EF205150),其序列全长1317bp,其中开放阅读框长996bp,编码331个氨基酸,3'端有一个明显的多聚腺苷酸加尾信号,推测的蛋白分子量约为37.5kD,理论等电点为5.80。序列分析表明它与葡萄FLS基因序列的亲缘关系比较近。将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中进行原核表达,经IPTG诱导、SDS-PAGE检测,结果表明茶树黄酮醇合成酶基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kD的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符。用Ni-NTA亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,得到了纯度在90%以上的纯化蛋白,为进一步研究PET-FLS融合蛋白的活性及功能奠定了基础。
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关键词
茶树
黄酮醇合成酶
基因克隆
序列分析
原核表达
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职称材料
题名
茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析
被引量:
4
1
作者
史成颖
李正国
徐乾
李海婧
汤之近
邓威威
宛晓春
机构
安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期40-47,共8页
基金
国家自然科学基金(31170283
31300576)
文摘
在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2基因全长为1 710bp,开放阅读框长1 071bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%。(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白。(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺。
关键词
茶树
谷氨酰胺
茶氨酸
基因克隆
原核表达
酵母表达
酶活性
Keywords
tea
plant
glutamine
theanine
gene clone
prokaryotic expression
yeast
expression
enzymatic activity
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
茶树氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达
被引量:
3
2
作者
马成英
施江
吕海鹏
张悦
谭俊峰
郭丽
彭群华
林智
机构
中国农业科学院茶叶研究所/茶叶加工工程研究中心
出处
《茶叶科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期532-540,共9页
基金
国家自然科学基金项目(30972404)
现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-23)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2012zl053)
文摘
获得了一类茶树氧甲基转移酶基因cDNA全长并构建了该基因的原核表达载体。以从茶树叶片中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR与RACE克隆技术获得氧甲基转移酶(O-methyltransferase)基因cDNA全长1 280 bp,其开放阅读框为1 068 bp,编码355个氨基酸,推测的蛋白分子量为39.1 kD,理论等电点为5.68。其氨基酸序列与葡萄和蓖麻氧甲基转移酶基因相似性分别为73%、71%。将该基因片段连接到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21后诱导重组蛋白的表达,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到1条与预测融合蛋白分子量相符的外源蛋白。
关键词
茶树
氧甲基转移酶
克隆
原核表达
Keywords
tea
,
o-methyltransferase
,
cloning
,
prokaryotic expression
分类号
S571.1 [农业科学—茶叶生产加工]
Q555 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
茶树黄酮醇合成酶基因的克隆与原核表达
被引量:
9
3
作者
马春雷
陈亮
机构
中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期433-438,共6页
基金
国家863计划(2006AA10Z171)
现代农业产业技术体系建设专项资金共同资助
文摘
本研究采用EST测序技术和RT-PCR技术,获得了一个茶树茶多酚代谢中的重要基因——黄酮醇合成酶(FLS)基因,在GenBank登录(GenBank accessionNo.EF205150),其序列全长1317bp,其中开放阅读框长996bp,编码331个氨基酸,3'端有一个明显的多聚腺苷酸加尾信号,推测的蛋白分子量约为37.5kD,理论等电点为5.80。序列分析表明它与葡萄FLS基因序列的亲缘关系比较近。将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中进行原核表达,经IPTG诱导、SDS-PAGE检测,结果表明茶树黄酮醇合成酶基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kD的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符。用Ni-NTA亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,得到了纯度在90%以上的纯化蛋白,为进一步研究PET-FLS融合蛋白的活性及功能奠定了基础。
关键词
茶树
黄酮醇合成酶
基因克隆
序列分析
原核表达
Keywords
tea
plant (Camellia sinensis), Flavonol synthase, Gene
cloning
, Sequence analysis,
prokaryotic expression
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析
史成颖
李正国
徐乾
李海婧
汤之近
邓威威
宛晓春
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
4
下载PDF
职称材料
2
茶树氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达
马成英
施江
吕海鹏
张悦
谭俊峰
郭丽
彭群华
林智
《茶叶科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
下载PDF
职称材料
3
茶树黄酮醇合成酶基因的克隆与原核表达
马春雷
陈亮
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2009
9
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职称材料
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