HPLC-MS/MS法测定磷酸特地唑胺中基因毒性杂质含量

目的:建立高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)方法测定磷酸特地唑胺中基因毒性的含量。方法:采用Waters Acquity BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以20 mmol醋酸铵溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),正离子模式下选择离子监测(SIM)采集,对m/z 389.1、m/z 310.0离子进行选择性监测。结果:基因毒性杂质TDZA010、TDZA046在限度的30%~150%范围内线性关系良好;检测限均为1 ng·mL^(-1),定量限均为3 ng·mL^(-1);回收率在89.8%~105.3%之间,RSD(n=12)分别为5.3%、4.6%;重复性(n=6)RSD分别为0.4%、3.3%。结论:本方法操作简便、专属性好、灵敏度高,可用于磷酸特地唑胺中基因毒性杂质TDZA010、TDZA046含量的检测。

噁唑烷酮类抗菌药泰地唑胺(tedizolid)的合成研究

目的改进泰地唑胺的合成工艺。方法以4-溴-3-氟苯胺为起始原料,经加成、环合、酯水解得到关键中间体(R)-3-(4-溴-3-氟-苯基)-5-羟甲基-1,3-噁唑烷-2-酮,该中间体再与2-(2-甲基-2H-四氮唑-5-基)-5-溴吡啶通过Suzuki偶联反应得到目标产物泰地唑胺。结果与结论目标化合物及部分中间体的结构经1H-NMR、13C-NMR、IR及MS谱确证。总收率为20.1%(以4-溴-3-氟苯胺计),纯度为99.6%(HPLC法)。该路线所用原料廉价易得、操作简便、条件温和、对环境污染少、收率较高,为中试放大实验奠定了一定基础。

特地唑胺对利奈唑胺不敏感革兰阳性球菌的体外抗菌活性研究

目的检测利奈唑胺不敏感革兰阳性球菌对新型噁唑烷酮类抗菌药物特地唑胺的敏感性,并探讨特地唑胺不敏感菌株的耐药机制。方法收集临床分离非重复革兰阳性球菌170株,包括利奈唑胺耐药头状葡萄球菌46株、利奈唑胺敏感头状葡萄球菌19株、利奈唑胺不敏感肠球菌55株、利奈唑胺敏感肠球菌12株、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌19株、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌18株、利奈唑胺耐药金黄色葡萄球菌1株。采用微量肉汤稀释法检测所有菌株对特地唑胺和利奈唑胺的最小抑菌浓度(MIC),并比较两种药物的抗菌活性。采用PCR结合Sanger测序技术分析特地唑胺不敏感革兰阳性球菌cfr、optrA基因携带情况及23S rRNA V区突变。结果利奈唑胺耐药头状葡萄球菌(MIC_(90)>256μg/mL)对特地唑胺的MIC值为4~32μg/mL;利奈唑胺不敏感肠球菌(MIC值4~16μg/mL)中,特地唑胺的敏感率为10.9%,其MIC值为0.5~2μg/mL;1株利奈唑胺耐药金黄色葡萄球菌对特地唑胺敏感,MIC值为0.5μg/mL。特地唑胺对利奈唑胺敏感的金黄色葡萄球菌和肠球菌的MIC值均为0.5μg/mL,对利奈唑胺敏感头状葡萄球菌的MIC值为0.125μg/mL。耐药基因分析显示,特地唑胺耐药头状葡萄球菌cfr基因携带率为87.0%(40/46),23S rRNA V区G2576T的突变率为100%;特地唑胺不敏感肠球菌optrA基因携带率为85.7%(42/49),显著高于特地唑胺敏感株的22.2%(P<0.001);1株利奈唑胺耐药特地唑胺敏感的金黄色葡萄球菌携带cfr基因。结论对于利奈唑胺不敏感的革兰阳性球菌,特地唑胺的抗菌活性是利奈唑胺的8~32倍,其耐药机制可能与携带optrA基因及23S rRNA V区G2576T突变有关。

磷酸特地唑胺有关物质的合成研究

为了控制磷酸特地唑胺产品的质量,本研究制备合成有关物质A和有关物质B,即(R)-3-{4-[2-(四唑-5-基)吡啶-5-基]-3-氟苯基}-5-羟甲基噁唑烷-2-酮二氢磷酸酯和(R)-3-{4-[2-(1-甲基四唑-5-基)吡啶-5-基]-3-氟苯基}-5-羟甲基噁唑烷-2-酮二氢磷酸酯。以5-溴-2-氰基吡啶(2)为起始原料,在三(二亚苄基丙酮)二钯催化下生成N-[4-(6-氰基吡啶-3-基)-3-氟苯基]氨基甲酸苄酯(10)。后续反应与R-丁酸缩水甘油酯反应得到(5R)-3-{3-氟-[4-(6-四氮唑-5-基)吡啶-3-基]苯基}-5-羟甲基-1,3-恶唑烷-2-酮(12)。12用三氯氧磷磷酸化得到有关物质A。N-氟-4-[6-(2-甲基-2H-1,2,3,4-四唑-5-基)吡啶-3-基]苯基氨基甲酸苄酯(8)与R-丁酸缩水甘油酯反应是可能会产生过烷基化相关物质(5R)-3-{3-氟-4-[6-(2-甲基-四氮唑-5-基)吡啶-3-基]苯基}-5-羟甲基-1,3-恶唑烷-2-酮(13)。13在三乙胺存在条件下与三氯氧磷反应得到有关物质B。结构经IR、MS、1H-NMR、13C-NMR谱确证,可用于磷酸特地唑胺原料药的质量研究。

HPLC法测定磷酸特地唑胺注射剂的含量

目的建立一种RP-HPLC快速测定磷酸特地唑胺注射剂中磷酸特地唑胺含量的方法。方法采用安捷伦Extend-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈:0.02mol/L乙酸铵溶液(p H8.5)(15:85,V/V)为流动相,流速1m L/min,检测波长300nm,进样量:10μL,柱温35℃,以外标法测定磷酸特地唑胺的含量。结果空白溶媒与空白溶剂在磷酸特地唑胺出峰时间附近无干扰峰,定量限为0.4μg/m L,在4~20μg/m L浓度范围内,磷酸特地唑胺响应与浓度线性良好,平均回收率97.3%,RSD为1.6%,日内精密度RSD为0.6%,日间精密度RSD为0.7%。结论本方法简单、准确且快速,适用于磷酸特地唑胺注射剂含量测定。

粪肠球菌临床株对泰利唑胺体外抗菌活性的研究

目的评价泰利唑胺体外抗粪肠球菌的活性,探讨泰利唑胺不敏感粪肠球菌的耐药机制及其多位点序列分型分布情况。方法收集2011年1月1日-2016年6月30日深圳市南山区人民医院临床分离的粪肠球菌菌株,使用自动化仪器法及微量肉汤稀释法对分离菌株的耐药性进行检测。应用聚合酶链式反应(PCR)方法检测恶唑烷酮类抗生素耐药基因的携带情况,并采用多位点序列分型(MLST)对分离菌株进行分型。结果共获得289株粪肠球菌,来源科室主要为外科(57.4%),标本来源主要为中段尿(126株,43.6%)。289株粪肠球菌对泰利唑胺敏感率为94.1%,对氨苄西林、呋喃西林和万古霉素有较高的敏感性(敏感率为97.9%~99.7%)。MLST结果显示,共分为47个ST型,优势ST分型为ST16和ST179,分别占29.1%(84株)和24.9%(72株),在泰利唑胺不敏感粪肠球菌中,ST16的比例高于ST179(P<0.05)。共检出泰利唑胺不敏感粪肠球菌17株,其携带optrA基因比例高于敏感株。结论泰利唑胺对粪肠球菌的抗菌活性整体优于利奈唑胺,但对携带optrA基因的粪肠球菌则未显示出良好的抗菌活性。

注射用磷酸特地唑胺体内抗菌作用研究

目的研究注射用磷酸特地唑胺对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、化脓性链球菌的体内抗菌作用。方法选取SPF级ICR小鼠,选用标准菌株金黄色葡萄球菌(ATCC29213)及金黄色葡萄球菌(n=22)、粪肠球菌(n=18)和化脓性链球菌(n=63)3株临床分离的致病菌,以0.5m L最低致死菌量腹腔注射细菌感染小鼠,建立小鼠败血症模型;于造模1h后,分别静脉注射给予不同浓度的注射用磷酸特地唑胺和利奈唑胺注射液药液,记录给药后1~7d小鼠存活数,用BLISS法计算ED50、ED95及P值。结果注射用磷酸特地唑胺对金黄色葡萄球菌标准菌株及3株临床分离的致病菌的ED50值在1.57~3.52mg/kg,ED95值在3.86~8.21mg/kg,均明显优于对照药利奈唑胺注射液(P<0.01)。结论注射用磷酸特地唑胺对所测标准菌株及临床分离的致病菌有较好的体内抗菌作用,其作用明显优于同类药利奈唑胺注射液。

抗MRSA感染新药的应用与研究进展

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)感染和对多重耐药金黄色葡萄球菌的治疗一直是临床的严峻挑战。头孢洛林、达巴万星、特地唑胺和奥利万星是美国FDA最新批准的用于抗MRSA感染的药物,本文将对它们的结构特点与作用机制、体内外抗菌活性、不良反应以及临床应用与未来发展进行综述,并着重分析其特性和优劣势。

泰地唑胺对革兰阳性球菌的体外抗菌活性研究

目的研究革兰阳性球菌对新型噁唑烷酮类抗菌药物——泰地唑胺的敏感性,并探讨泰地唑胺不敏感菌株的耐药机制。方法收集1069株革兰阳性球菌[耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)202株、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)294株、凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)115株、粪肠球菌206株、屎肠球菌55株、无乳链球菌159株和咽峡炎链球菌群菌株38株]非重复临床分离株。采用微量肉汤稀释法检测所有菌株对泰地唑胺和利奈唑胺的最小抑菌浓度(MIC),分析泰地唑胺和利奈唑胺MIC值的差异,比较2种抗菌药物的抗菌活性;采用聚合酶链反应(PCR)检测泰地唑胺/利奈唑胺不敏感菌株的耐药基因。结果所有葡萄球菌(MIC≤0.5μg/mL)、屎肠球菌(MIC≤0.5μg/mL)和链球菌(MIC≤0.25μg/mL)均对泰地唑胺敏感,粪肠球菌对泰地唑胺的敏感率为94.7%,检测出11株泰地唑胺和利奈唑胺均不敏感粪肠球菌(泰地唑胺MIC=1μg/mL,利奈唑胺MIC=8μg/mL)。泰地唑胺的抗菌活性是利奈唑胺的4~8倍。泰地唑胺/利奈唑胺不敏感菌株只携带optrA基因。结论泰地唑胺作为治疗革兰阳性球菌感染的一种新型抗菌药物,具有较大的应用价值,但携带optrA基因的泰地唑胺不敏感肠球菌值得关注。

磷酸特地唑胺片的处方工艺及体外溶出行为的研究

目的对磷酸特地唑胺片的处方及工艺进行研究,制备磷酸特地唑胺片,并对其体外溶出行为进行研究。方法参照国外上市片"SIBEXTRO"的处方及体外释放行为,对黏合剂、崩解剂、填充剂及包衣增重进行研究,筛选出合理的处方工艺,并对其进行放大。结果最终确定处方工艺为磷酸特地唑胺:200mg,甘露醇:110mg,微晶纤维素:60mg;聚维酮K30:6mg;交联聚维酮:12mg(内加),8mg(外加);硬脂酸镁:4mg;薄膜包衣预混剂:12mg;以纯化水为黏合剂。结论确定了处方工艺的稳定性,适合放大生产,体外溶出行为与市售品相似,处方工艺设计合理。

顶空毛细管气相色谱法同时测定磷酸特地唑胺原料药中4种有机溶剂的残留量

目的建立同时测定磷酸特地唑胺原料药中甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环4种有机溶剂残留量的方法。方法采用顶空毛细管气相色谱法。色谱柱为DB-624毛细管柱,检测器为氢火焰离子化检测器(FID),柱温采用程序升温(初始温度50℃,保持5min,以15℃/min的速度升温至220℃,再保持5min),进样口温度为200℃,检测器温度为250℃,载气使用高纯氮气,流速为3.0mL/min,分流比设置为5:1,顶空瓶温度设置为100℃,平衡时间设定为30min,顶空进样体积为1.0mL。结果甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环4种有机溶剂峰之间的分离度符合要求,线性关系良好(r≥0.9990),定量限分别为0.5716、0.8190、0.3625和0.6133μg/mL,检测限分别为0.1715、0.2457、0.1087和0.1840μg/mL;精密度试验的RSD<2.0%,稳定性、重复性试验中只检出甲醇,RSD<2.0%;平均回收率在97.12%～104.83%范围内,RSD分别为0.92%、1.64%、0.70%和1.72%,3批磷酸特地唑胺原料药检测结果均符合限度要求。结论该方法快速、灵敏、准确,适用于磷酸特地唑胺原料药中残留溶剂的检测。

FDA批准上市获得QIDP认证的新药概况

目的了解FDA批准上市的QIDP认证的8种新抗菌药概况。方法查阅近年来国内外相关文献75篇,对其进行归纳、总结和分析。结果目前全球已上市8种QIDP认证的抗菌药,适用于治疗由耐药致病菌引起的严重感染,抗菌谱广,抗菌活性强,耐受性良好。结论 FDA批准上市的8种QIDP认证抗菌药在全球面临耐药菌的威胁下值得进一步研究。

泰地唑胺的合成工艺改进

以4-溴-3-氟苯胺为原料,用氯甲酸苄酯保护氨基后,采用一锅两步法制得关键中间体——N-苄氧羰基-3-氟-4-[2-(2-甲基四唑-5-基)吡啶-5-基]苯胺(6);6在二异丙基氨基锂作用下与(R)-丁酸缩水甘油酯经环合反应合成了泰地唑胺,总收率53.2%,含量98.5%,其结构经1H NMR和LC-MS确证。

磷酸特地唑胺的合成新方法

以(5R)-3-(4-溴-3-氟苯基)-5-羟甲基噁唑烷-2-酮为起始原料,在[Pd Cl2(dppf)]·CH2Cl2催化下与联硼酸频那醇酯反应得到硼化物,继而与5-溴-2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶进行Suzuki反应得到特地唑胺,收率82.9%。分别考察了催化体系对硼化反应和Suzuki反应的影响,确定了较佳的反应条件。特地唑胺与二苄基N,N-二异丙基亚磷酰胺反应得到二苄基保护的磷酸特地唑胺,随后经Pd/C脱苄得到磷酸特地唑胺,总收率66.2%。

QbD理念在新型抗菌药磷酸特地唑胺工艺研究中的应用

目的抗菌药磷酸特地唑胺的工艺研究。方法 QbD理念指导工艺研究,以中间体A和焦磷酸四苄酯为原料合成磷酸特地唑胺。结果以58%的总收率实现了磷酸特地唑胺的制备,HPLC纯度为99.2%。结论新开发的工艺反应条件温和,有效地避免了水解杂质、二聚体杂质的产生,保证了磷酸特地唑胺的产品质量。

磷酸特地唑胺关键中间体的合成

合成磷酸特地唑胺关键中间体5-溴-2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-吡啶并对其工艺优化。以5-溴-2-氰基吡啶为起始原料,经醇解、胺解和亚硝酸钠重氮化成环三步合成关键中间体。所得的目标化合物经核磁共振氢谱、质谱确认,总收率达64.1%。该关键中间体合成方法,反应条件温和,产率高,适合于工业化生产。

注射用磷酸特地唑胺细菌内毒素检查

目的:注射用磷酸特地唑胺用于特定的敏感细菌引起的成人急性细菌性皮肤和皮肤结构感染,被美国FDA批准磷酸特地唑胺上市,临床研究也进入了临床Ⅱ期,用于严重革兰氏阳性菌感染的治疗。该药尚未在中国上市。未被《中国药典》2015年版收录,亦没有与之相关的质量标准,本文建立了该药品的检验方法,以完善医药市场对药物的质量监管要求。方法:参照中国药典2015年版四部通则试验要求,拟定了质量标准,并对细菌内毒素的检查方法进行了方法学验证。结果:拟定本品的细菌内毒素限值为1.5 EU·mg^(-1),当采用灵敏度为0.5 EU·mL^(-1)的鲎试剂,样品浓度为含磷酸特地唑胺4 mg·mL^(-1)时,对内毒素与鲎试剂的反应无干扰。结论:当采用两个鲎试剂生产厂家的试剂对样品进行干扰试验,灵敏度为0.5 EU·mL^(-1),样品浓度为含磷酸特地唑胺4 mg·mL^(-1)时,对内毒素与鲎试剂的反应无干扰。此限值为可靠限值。

HPLC法测定磷酸特地唑胺对映异构体

目的:建立了高效液相色谱法测定磷酸特地唑胺原料药对映异构体的方法。方法:采用CHIRALPAK■AGP(150 mm×4.0 mm,5μm)色谱柱,以磷酸二氢铵缓冲液为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,检测波长300 nm。结果:在该色谱条件下,特地唑胺和对映异构体之间的分离度均能达到1.5以上;对映异构体的检测限为相当于主成分浓度的0.02%;对映异构体在0.5~20μg/mL范围内线性良好,(r≥0.990,n=6);对映异构体的准确度在95.0%~100.0%之间,(RSD≤5.0)。结论:本方法可用于特地唑胺对映异构体的检测。

磷酸特地唑胺片的制备及其初步质量评价

目的优化磷酸特地唑胺片的制备工艺,并进行工业化生产。方法制备工艺采用流化床制粒,随后压片、包衣的工艺流程。对关键性辅料粘合剂、崩解剂及原料药粒度、素片硬度和包衣增重等进行优化,并对优化后处方进行放大生产。结果最终确定处方为磷酸特地唑胺200 mg、微晶纤维素78 mg、甘露醇78 mg、聚维酮K3016 mg、交联聚维酮12 mg(内加)、交联聚维酮12 mg(外加)、硬脂酸镁4 mg、薄膜包衣预混剂16 mg,制粒工艺为流化床制粒,润湿剂为纯化水。结论本品制备工艺简单,放大生产显示工艺稳定,重现性好,同时体外多介质溶出曲线与原研制剂相似。

磷酸特地唑胺片在中国健康受试者中的生物等效性研究

目的评估2种磷酸特地唑胺片200 mg在中国健康受试者中的生物等效性及安全性。方法本研究采用开放、随机、双周期、双交叉设计,空腹组和餐后组均纳入24例健康成年受试者分别单次口服磷酸特地唑胺片受试制剂或参比制剂200 mg。用LC-MS/MS法测定血浆中特地唑胺的浓度,用SAS 9.4处理血浆中特地唑胺的浓度-时间数据,以非房室模型法计算特地唑胺药代动力学参数,并进行生物等效性及安全性评价。结果空腹试验受试制剂和参比制剂的特地唑胺C_(max)分别为(2405.00±433.00)和(2409.00±469.00)ng·mL^(-1),t_(max)分别为3.00和1.50 h,t_(1/2)分别为(9.84±1.30)和(9.86±1.05)h,AUC_(0-t)分别为(26578.00±7127.00)和(26322.00±6358.00)ng·mL^(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(27612.00±7706.00)和(27301.00±6800.00)ng·mL^(-1)·h;餐后试验受试制剂和参比制剂的特地唑胺C_(max)分别为(2218.00±426.00)和(2201.00±343.00)ng·mL^(-1),t_(max)分别为3.25和3.00 h,t_(1/2)分别为(9.92±1.19)和(10.03±1.29)h,AUC_(0-t)分别为(28635.00±5407.00)和(28605.00±5677.00)ng·mL^(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(29784.00±5878.00)和(29790.00±6200.00)ng·mL^(-1)·h。空腹组和餐后组受试制剂和参比制剂主要药代动力学参数的几何均值比值的90%置信区间均落在80.00%~125.00%。空腹组和餐后组不良事件发生率分别为20.83%和45.83%。结论中国受试者在空腹与餐后状态下,单次口服受试和参比磷酸特地唑胺片均具生物等效性,且安全性良好。