动脉灌注化疗栓塞联合放射粒子植入治疗原发性肝癌患者疗效及其对肝组织TRF1和TRF2表达的影响

目的探讨动脉灌注化疗栓塞术(TACE)联合放射粒子植入治疗原发性肝癌(PLC)患者疗效及其对肝组织端粒重复序列结合因子(TRF)1和TRF2表达的影响。方法 2012年12月～2015年12月我院诊治的108例PLC患者,采用抛硬币法随机分为观察组54例和对照组54例。对照组接受单纯TACE治疗,观察组在TACE治疗的基础上接受^(125)I放射粒子植入治疗。肝穿取得肝组织,采用SP法检测肝组织TRF1和TRF2表达情况。结果在治疗3 m末,观察组客观缓解率为79.6%,显著高于对照组的61.1%(x2=4.441,P<0.05);观察组血清CEA和AFP水平分别为(273.7±38.1) ng/ml和(820.4±130.3)μg/L,显著低于对照组的【(312.5±33.9) ng/ml和(1080.1±121.3)μg/L,P<0.01】;观察组癌旁肝组织TRF1表达量为(9.7±2.3),显著高于癌组织的【(4.2±1.8),P<0.01】,而观察组癌组织TRF2表达量为(9.2±2.2),显著高于癌旁肝组织的【(3.8±2.6),P<0.01】;观察组1 a生存率显著高于对照组[96.3%(52/54)对85.2%(46/54),x^2=3.967,P=0.046]。结论采用TACE联合放射粒子植入术治疗PLC患者安全有效,能够有效降低外周血肿瘤标志物水平,调节肝癌组织TRF1和TRF2表达,抑制肿瘤组织的生长,阻止病情进展,有利于患者康复。

端粒酶逆转录酶和端粒重复结合因子2在大鼠心肌细胞发育过程中的表达

目的:观察大鼠心肌细胞发育过程中端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒重复结合因子2(TRF2)的表达,探讨TERT活性与心肌细胞分化和发育的关系。方法:应用免疫组化方法分别检测胎鼠孕16d、出生后2、5、10、20d的大鼠心脏标本,观察TERT和TRF2的表达和分布。结果:TERT分布于胎鼠心肌细胞的胞质和细胞核中,出生后2～20d,TERT在胞质的表达呈下降趋势。TRF2主要分布在胎鼠心肌细胞的胞核中,出生后5～20d,TRF2表达阳性的心肌细胞数目逐渐减少。结论:在大鼠心肌细胞发育过程中,TERT和TRF2的表达下调促使部分细胞永久地退出细胞周期而进入终末分化;TERT活性受到了心肌细胞发育过程的调节。

端粒保护蛋白TRF2在肿瘤发生和治疗中作用机制的研究进展

端粒重复序列结合因子2(telomeric-repeat binding factor 2,TRF2)是一种重要的端粒保护蛋白,与端粒保护蛋白1(protection of telomeres 1,POT1)、端粒重复序列结合因子1(telomeric-repeat binding factor 1,TRF1)、相互作用核蛋白2(TRF1-interacting nuclear protein 2,TIN2)、阻滞活化蛋白1(repressor activator protein 1,Rap1)以及TPP1,5个核心蛋白通过一系列相互作用共同形成端粒保护蛋白复合体(shelterin)以维持端粒结构和功能的稳定性和完整性。越来越多的研究显示TRF2在多种肿瘤中异常表达并与肿瘤的发生,肿瘤细胞的耐药以及肿瘤血管的生成密切相关。因此,本文就TFR2的结构与生理功能,以及其在肿瘤发生,发展与治疗中的作用研究进展进行综述,以期为肿瘤的预防和治疗提供新的思路。

定量实时RT-PCR检测非霍奇金淋巴瘤端粒结合因子2 mRNA的表达

目的 :建立定量实时 RT- PCR,研究非霍奇金淋巴瘤 (NHL)患者肿瘤组织端粒结合因子 2 (TRF2 )m RNA表达。方法 :用 RT- PCR扩增目标基因 c DNA,电泳后切胶、纯化作为标准品 ,建立待测基因标准曲线 ;用实时 RT- PCR测定 32例 NHL和 8例反应性淋巴结炎患者淋巴组织 TRF2的表达。结果 :实时 RT- PCR标准曲线中 ,模板 c DNA含量和扩增时产生的荧光信号相关系数为 0 .996。实时 RT- PCR终点产物凝胶电泳的基因条带灰度值和模板 c DNA含量的相关系数为 0 .779(P<0 .0 5 )。在 NHL患者中 ,滤泡型淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和弥漫性大 B细胞淋巴瘤 TRF2 m RNA表达量分别为 (2 2 .94 3± 9.4 2 4 ) amol、(2 3.181± 5 .983) amol和 (18.339± 7.910 ) amol,与良性反应性淋巴结炎组织 [(2 1.796± 4 .80 0 ) amol]相比无显著性差异 (P>0 .0 5 )。但 Burkitt淋巴瘤 TRF2 m RNA表达量为 (33.170± 12 .84 1) amol,显著高于良性反应性淋巴结炎组织和其他类型恶性淋巴瘤 (P<0 .0 5 )。结论 :定量实时 RT- PCR能精确测定目标基因 m RNA表达。在 NHL中 ,Burkitt淋巴瘤 TRF2 m RNA表达量明显高于滤泡型淋巴瘤、套细胞性淋巴瘤、弥漫性大 B细胞淋巴瘤。

TRF2小干扰RNA载体的构建及表达

目的:构建TRF2小干扰RNA载体,观察其在胃癌细胞中的表达．方法:根据pSilencer3．1-H1载体要求设计两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点．经双酶切及测序鉴定后分别转染多药耐药衍生胃癌细胞SGC7901／ADR和SGC7901/VCR． G418选择培养液培养2 mo选取转染组及对照组细胞克隆．MTT法检测转染对细胞生长增殖速度的影响．细胞用阿霉素和足叶乙甙处理 6h后Western blot法检测TRF2表达．结果:成功构建TRF2小干扰RNA载体,建立稳定转染细胞株,转染后TRF2表达明显降低,对细胞的生长增殖速度无明显影响(P>0．05)．结论:成功构建TRF2小干扰RNA载体及稳定转染细胞株．

Irisin与老年2型糖尿病

Irisin是一种新发现的肌源性糖基化多肽,能促使白色脂肪细胞解偶联蛋白表达,诱导脂肪小滴形成,增加线粒体密度,增加脂肪细胞氧耗,导致白色脂肪细胞棕色样变,促进β细胞再生,从而抑制肥胖和胰岛素抵抗的发生;Irisin还能增加脑源性神经营养因子,激活参与学习和记忆的基因,从而改善认知;还能延长端粒从而延缓衰老等。本文综述了Irisin与老年2型糖尿病的关系,以期为老年2型糖尿病的有效防治提供参考。

P53与TRF1、TRF2的体外结合及P53结合功能区的分析

通过分析端粒结合蛋白TRF1、TRF2与P5 3的体外结合 ,探讨P5 3 端粒途径调节细胞生命活动的分子机制 .GST和 4种人P5 3 GST融合蛋白经大肠杆菌表达、谷胱甘肽 SepharoseTM4B纯化后 ,进行SDS PAGE和考马斯亮篮染色 .人P5 3包括野生型 (1～ 393)、C端缺失体P5 3N5 (2～ 2 93)、N端缺失体P5 32C(95～ 393)、单个氨基酸突变体P5 3R175H(175R→H) .各纯化蛋白的分子量与预计的完全一致 ,且纯化率达 90 %以上 .将纯化的GST和P5 3 GST融合蛋白与人乳腺癌细胞MCF 7细胞蛋白进行体外结合反应 ,Western印迹检测反应物中P5 3和TRF1、TRF2的结合 .野生型P5 3和P5 3 R175H均能沉淀MCF 7中的TRF1、TRF2 ,且结合力相似 ,而单独的GST则无沉淀TRF1、TRF2的作用 .与野生型P5 3和P5 3R175H相比 ,P5 32C与TRF1、TRF2的结合力明显增加 ,P5 3N5与TRF1、TRF2的结合力大大减弱 .表明P5 3和TRF1、TRF2可以进行直接而特异的体外结合 ,且它们的结合为P5 3C端 (2 93～ 393)结构域依赖性 .P5 3和TRF1、TRF2这种结构域依赖性的结合可能与端粒动态变化所诱导的细胞活动有关 .

脐血铅对端粒长度影响及其与TRF1和TRF2相关性

目的研究低水平脐血铅对新生儿端粒长度的影响及其与端粒重复序列结合因子1(TRF1)、端粒重复序列结合因子2(TRF2)的相关性。方法收集孕期无急慢性疾病的足月顺产儿脐血88例,采用原子吸收光谱法测定脐血铅浓度,以脐血铅浓度30μg/L为界分为安全浓度组(脐血铅浓度<30μg/L)48例、中毒浓度组(脐血铅浓度≥30μg/L)40例,采用全血提取基因组法提取两组脐血DNA,荧光定量PCR法测定基因组DNA的端粒长度,ELISA法测定TRF1、TRF2的浓度。结果安全浓度组端粒长度长于中毒浓度组,差异有显著性(t=2.479,P<0.05)。端粒长度与脐血铅浓度呈负相关(r=-0.301,P<0.05),TRF1与脐血铅浓度呈正相关(r=0.528,P<0.05),TRF2与脐血铅浓度呈负相关(r=-0.361,P<0.05)。结论脐血铅可通过增加TRF1表达、减少TRF2的表达来干扰新生儿端粒长度的延长,进而导致端粒长度的缩短。

端粒重复因子2-P53信号通路在糖尿病心肌病中的作用

目的探讨端粒重复因子2-P53(TRF2-P53)信号通路在糖尿病心肌病(DCM)中的作用。方法体内研究予以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制造1型糖尿病小鼠模型,9周后超声检测明确DCM模型构建成功。小鼠心脏样本采用免疫印迹(WB)检测TRF2表达水平,采用免疫荧光检测P53表达水平。体外研究予以高糖刺激乳鼠心肌细胞,并采用WB检测TRF2表达水平,采用免疫荧光检测P53表达水平。TRF2 siRNA降低乳鼠心肌细胞TRF2的表达后,采用TUNEL检测凋亡情况,采用衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测衰老情况,采用WB检测P53表达水平。结果体内研究发现,与WT小鼠相比,DCM小鼠TRF2表达下降,P53表达增加。体外研究发现,高糖刺激引起乳鼠心肌细胞TRF2表达下降,P53表达增加。TRF2 siRNA转染降低乳鼠心肌细胞TRF2水平后可促进凋亡和衰老,增加P53表达。结论TRF2-P53信号通路在DCM中起了重要的调控作用。

tRF-1:30对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎性因子表达的影响

目的探讨tRF-1:30(tRF-1:30-Gln-CTG-4)对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)中炎性因子表达的影响及分子机制。方法将小鼠RTECs分为Control组、HG组、HG+tRF-1:30 mimic组、HG+tRF-1:30 NC组、HG+si-IKZF2组(IKAROS家族锌指2,tRF-1:30抑制剂)、HG+si-NC组。实时荧光定量PCR检测tRF-1:30、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和IKZF2 mRNA的水平。酶联免疫吸附试验检测炎性因子水平,Western blot检测IKZF2蛋白表达水平,双萤光素酶报告实验验证tRF-1:30和IKZF2的关系。结果在HG诱导的RTECs中炎性因子的表达水平显著升高,而tRF-1:30表达水平显著降低。过表达tRF-1:30显著降低HG诱导的RTECs中炎性因子的表达水平。IKZF2在HG诱导的RTECs中显著高表达,进一步敲低IKZF2可抑制炎性因子的释放,而过表达tRF-1:30后IKZF2的表达水平下调。双萤光素酶报告实验进一步验证tRF-1:30与IKZF2可能存在靶向关系。结论过表达tRF-1:30可能通过负向调控IKZF2的表达进而抑制HG诱导的RTECs炎性因子的释放。

胎儿心肌细胞端粒相关蛋白的表达

目的探讨端粒酶逆转录酶(TERT)、端粒酶相关蛋白1(TP1)和端粒重复结合因子2(TRF2)表达与心肌细胞分化和发育的关系。方法应用S-P免疫组化方法分别对不同月份胎儿心肌细胞TERT、TP1和TRF2蛋白表达进行检测。结果胎儿心肌细胞核中TERT的表达随胎龄增加而减少;胎儿心肌细胞胞浆TP1和TRF2的表达随胎龄增加而增加。结论TERT、TP1和TRF2表达方式可能促使部分心肌细胞永久退出细胞周期而进入终末分化和肥大阶段。

胶质瘤细胞端粒结合因子与ING1基因表达关系的研究

端粒结合因子(TRF1和TRF2)及抑癌基因ING1表达异常减少与多种颅外肿瘤的发生、发展密切相关。本研究是为了探讨胶质瘤细胞TRF1、TRF2和ING1基因表达变化的相互关系及其在胶质瘤发生、发展中的作用。方法:采用mRNA原位杂交和免疫组化染色等方法观察了70例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果:本组70例胶质瘤INGl mRNA、P33^(ING1)蛋白、TRF1蛋白和TRF2蛋白的阳性表达率分别为94.3%、88.6%、100.0%和98.6%,I～Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组间比较它们的阳性表达率均无显著性差异(P>0.05)。表达INGl mRNA、P33^(ING1)蛋白、TRF1蛋白和TRF2蛋白的四种阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关(r=0.739～0.847,P<0.001),并均随肿瘤级别升高而相应减少,不同级别组间比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:以上指标对评价胶质瘤的生物学行为均有重要参考价值,胶质瘤细胞中TRF1蛋白及TRF2蛋白表达异常减少可能是导致其ING1基因表达下调的重要因素,它们的表达异常减少可能在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。

斑马鱼体内氧化损伤标志物筛选

目的:探讨以端粒为靶点的氧化损伤标志物的筛选,进而可能可以用来临床上早期发现或预报氧化损伤。方法:采用端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因敲除(TRF2-/-)斑马鱼胚胎作为氧化损伤模型,RT-q PCR法检测野生型和TRF2-/-斑马鱼胚胎中TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达情况。构建pCS2-PUM3、pCS2-PACSIN3质粒并体外转录后,将mRNA分别显微注射至TRF2-/-斑马鱼受精卵中,比较注射组与未注射组斑马鱼畸形率。结果:RT-q PCR结果表明,与野生型斑马鱼胚胎相比,TRF2-/-斑马鱼胚胎TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达量下降(P<0.05)。显微注射PUM3 mRNA至TRF2-/-斑马鱼受精卵后斑马鱼胚胎畸形率下降(P<0.05)。结论:TRF2能影响氧化应激相关基因PUM3、PACSIN3的表达,且PUM3能补救TRF2缺失造成的氧化损伤相关器官畸形。

端粒重复序列结合因子2与细胞功能

端粒重复序列结合因子2(telomere repeat binding factor 2,TRF2)是一种端粒结合蛋白,为保卫端粒蛋白复合体(shelterin)的一个组分,它通过羧基端与端粒DNA结合,在维持端粒DNA结构稳定、防止染色体端-端融合、参与DNA损伤响应方面发挥着重要作用。近年的研究发现,TRF2还参与细胞增殖、分化、衰老及凋亡过程,并在大脑发育早期的神经元增殖、分化中起选择性作用。本文综述了TRF2的最新研究进展。

醋酸丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的作用及对TRF2表达的影响

目的探讨不同剂量的醋酸丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制及端粒重复因子2(telomeric repeat binding factor-2,TRF2)表达的影响。方法选取雌性裸鼠34只,无菌条件下饲养。体外培养人子宫内膜癌HEC-1B细胞株,制成悬液接种于裸鼠皮下组织以建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。选取32只合格的荷瘤裸鼠随机分为4组:对照组(生理盐水肌内注射),低、中、高剂量丙氨瑞林干预组(20μg/kg、40μg/kg、80μg/kg醋酸丙氨瑞林肌内注射),每组8只。观察裸鼠生长发育情况,每7天测量皮下移植瘤体积,4周后处死裸鼠,取出移植瘤,测量肿瘤体积,并绘制生长曲线、计算抑瘤率。移植瘤组织石蜡包埋行HE染色,镜下观察瘤细胞形态变化;免疫组织化学法检测瘤组织中TRF2蛋白的表达情况。结果与对照组比较,丙氨瑞林干预组随药物剂量增加移植瘤体积依次减小(P<0.05);丙氨瑞林低、中、高剂量干预组抑瘤率分别为10.01%、19.80%、44.98%,高剂量组抑瘤率大于低、中剂量组(P<0.05或P<0.01)。HE染色光镜观察见丙氨瑞林干预组瘤细胞排列较对照组稀疏,瘤细胞核深染、固缩。免疫组织化学检测显示,随着药物剂量增加,瘤组织中TRF2蛋白表达逐渐下调(P<0.05)。结论醋酸丙氨瑞林对荷瘤裸鼠子宫内膜癌细胞株HEC-1B皮下移植瘤生长有抑制作用,可能与TRF2蛋白表达下调有关。

放射线对Tca8113细胞端粒重复序列结合因子2蛋白的影响

目的:研究X线对Tca8113细胞端粒重复序列结合因子2蛋白的影响。方法:采用Western Blot检测X线照射前后端粒重复序列结合因子2蛋白的含量变化,采用AnnexinⅤ-FITC/PI联合染色检测细胞早期凋亡。结果:与照射前相比,细胞早期凋亡率显著升高(P<0.05);经不同剂量X线照射后0.5 h,各组端粒重复序列结合因子2蛋白含量均上升(P<0.05),1 h后,2 Gy组的TRF2蛋白含量降至与未照射时水平相当,3 h和5 h时降至比未照射时更低(P<0.05),其它照射剂量组的TRF2蛋白在照射后1 h时均已降至不可测得的水平。结论:端粒重复序列结合因子2被激活,端粒重复序列结合因子2蛋白含量应激性地短暂升高是经X线照射后的早期事件。

RHPS4限制端粒重复序列结合因子2蛋白的端粒保护作用

目的 :探讨抗肿瘤药物RHPS4影响端粒重复序列结合因子2(TRF2)对端粒保护作用的机制。方法:在过表达TRF2的A375细胞体系中加入RHPS4,通过蛋白质印迹及免疫荧光结合共聚焦显微镜成像技术检测细胞DNA损伤情况,通过流式细胞技术及细胞增殖实验检测药物对细胞增殖的影响。结果 :在A375细胞中过表达外源性TRF2能抑制DNA损伤的修复,但过表达TRF2不能抑制RHPS4诱导端粒损伤,RHPS4诱导的细胞周期停滞和细胞衰老过表达不依赖于TRF2的表达量。结论:TRF2高水平表达不能拮抗RHPS4的致端粒损伤和细胞周期抑制的作用,肿瘤细胞中高表达TRF2不是应用RHPS4药物的反指征。

端粒重复序列结合因子1、2在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的探讨端粒重复序列结合因子1(TRF1)和端粒重复序列结合因子2(TRF2)在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法利用免疫组织化学SP(SP)法检测46例子宫内膜癌组织和32例正常子宫内膜组织中TRF1和TRF2蛋白的表达,分析临床病理特征与TRF1和TRF2蛋白表达的关系。结果 TRF1蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为32.61%,明显低于正常子宫内膜组织阳性表达率87.50%,差异有统计学意义(P<0.05),TRF2蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为76.09%,明显高于正常子宫内膜组织阳性表达率34.38%,差异有统计学意义(P<0.05);TRF1蛋白低表达和TRF2蛋白高表达与子宫内膜癌病理分级、临床分期、淋巴结是否转移及病理类型等临床病理特征均无相关性(P>0.05);Spearman相关性分析结果显示,TRF1与TRF2在子宫内膜癌组织中的表达呈负相关。结论 TRF1蛋白在子宫内膜癌组织中呈现低表达,TRF2蛋白在子宫内膜癌组织中呈现高表达,推测两者对早期诊断子宫内膜癌具有一定的临床价值。