藤黄健骨胶囊通过SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路抑制绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞凋亡

藤黄健骨胶囊可以提高绝经后骨质疏松模型鼠的骨密度来改善其骨微结构损害,但具体机制尚未阐明。本文主要研究藤黄健骨胶囊抑制绝经后骨质疏松症大鼠成骨细胞凋亡与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路的关系,旨在探讨藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松症的作用机制。采用去卵巢法建立绝经后骨质疏松大鼠模型,分别给予藤黄健骨胶囊(0.09、0.18、0.36 g/kg)灌胃,连续干预8周后进行指标检测。采用TUNEL染色观察股骨组织凋亡情况,结果发现,藤黄健骨胶囊各剂量组股骨组织凋亡阳性细胞和凋亡率均减少(P<0.01)。采用双重免疫荧光染色观察股骨组织成骨细胞中SIRT1、PGC-1α和Nrf2表达水平表达情况,结果发现,藤黄健骨胶囊中、高剂量组成骨细胞PGC-1α表达荧光面积明显升高,各剂量组成骨细胞SIRT1和Nrf2表达荧光面积也明显升高(P<0.01)。qPCR和Western印迹检测股骨组织SIRT1、PGC-1α、Nrf2、Runx2、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达水平和翻译水平变化,结果显示,藤黄健骨胶囊中、高剂量组股骨组织Runx2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2蛋白质水平均明显升高,Caspase-9蛋白质水平明显下降,各剂量组股骨组织SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2 mRNA水平也均明显升高,而其各剂量组股骨组织Caspase-3mRNA水平、蛋白质水平和Caspase-9 mRNA水平均则明显降低(P<0.01)。综上,本研究初步揭示了藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松模型鼠成骨细胞凋亡的抑制与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路有关,SIRT1可能是调控成骨细胞凋亡的重要靶点。

藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎鼠软骨组织Notch1、Jagged1、炎性反应因子及基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨Notch/Jagged1信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型鼠软骨组织炎性反应因子及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)表达的影响,并揭示藤黄健骨胶囊可能的干预机制。方法60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组[0.27 g/(kg·d)]及藤黄健骨胶囊干预组[高剂量0.36 g/(kg·d)、中剂量0.18 g/(kg·d)、低剂量0.09 g/(kg·d)],每组10只。除假手术组外,其余5组采用改良Hulth法构建KOA大鼠模型,模型制备成功后,分别给予仙灵骨葆胶囊及相应剂量的藤黄健骨胶囊灌胃给药,假手术组和模型组给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液。给药2个月后股动脉采血处死大鼠,取患侧膝关节软骨采用苏木精-伊红(HE)染色观察关节软骨组织的形态变化;ELISA法检测关节软骨组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Notch1和Jagged1含量变化;免疫组化法观察关节软骨组织中Col-Ⅱ、MMP-9、MMP-13、Notch1和Jagged1蛋白表达变化。结果与假手术组比较,模型组关节面脱落、严重破坏,软骨细胞分布紊乱;模型组软骨细胞Mankin(5.56±0.85)评分、IL-1β(11.13±2.19)、TNF-α(98.29±9.13)、Notch1(5.03±0.37)和Jagged1(222.54±36.87)含量均显著升高,MMP-9(1.54±0.72)、MMP-13(0.41±0.04)、Notch1(0.39±0.05)和Jagged1(0.38±0.05)等蛋白的免疫反应性均显著增强,Col-Ⅱ(0.15±0.04)蛋白的免疫反应性则显著降低(P<0.05)。与模型组比较,藤黄健骨胶囊0.36 g/(kg·d)剂量组软骨细胞形态和分布趋于正常;其软骨组织Mankin(2.86±0.48)评分显著降低,Col-Ⅱ(0.39±0.03)蛋白的免疫反应性则显著增强(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18 g/(kg·d)剂量组Jagged1(170.54±41.09、183.46±33.12)含量显著降低,MMP-9(0.68±0.25、1.14±0.49)和Jagged1(0.21±0.05、0.26±0.07)等蛋白的免疫反应性也均显著降低(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18、0.09 g/(kg·d)剂量组IL-1β(5.71±1.03、8.71±1.53、8.81±2.31)、TNF-α(63.42±10.01、67.46±11.68、71.88±15.63)和Notch1(2.95±0.39、3.56±0.37、4.22±0.33)含量均显著降低,同时MMP-13(0.21±0.02、0.27±0.04、0.31±0.09)和Notch1(0.19±0.06、0.24±0.05、0.28±0.04)等蛋白的免疫反应性也均显著降低。结论藤黄健骨胶囊可能通过促进KOA模型鼠关节软骨组织Notch/Jagged1信号通路下游蛋白Col-Ⅱ表达,抑制其Notch/Jagged1信号通路关键蛋白Notch、Jagged1、炎性反应因子及MMPs表达,延缓关节软骨退变,从而改善KOA的临床症状。

藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎大鼠血细胞变化及炎症因子表达的影响

观察藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠右后足足跖厚度、血细胞变化及炎症因子IL-6和IL-2表达的影响,并探讨藤黄健骨胶囊治疗KOA的作用机制。将60只SPF级SD雌性大鼠随机分为假手术组、KOA模型组、阳性对照组和藤黄健骨胶囊高、中、低剂量组。改良Hulth法复制KOA大鼠模型。假手术组和KOA模型组给予等体积蒸馏水灌胃,阳性对照组给予仙灵骨葆胶囊(0.27 g/kg),藤黄健骨胶囊高、中、低剂量组给予藤黄健骨胶囊灌胃(0.36、0.18和0.09 g/kg)。末次给药结束24 h后,HE染色法观察各组大鼠软骨组织的病理形态学变化,并进行Mankin评分。采用游标卡尺测量法测定各组大鼠右后足足跖的厚度、全血自动分析仪检测各组大鼠白细胞(White blood cell,WBC)、中性粒细胞(Neutrophils,N)、淋巴细胞(Lymphocyte,L)、单核细胞(Monocytes,M)和嗜酸粒细胞(Eosinophils,EOS)的变化,ELISA法测定各组大鼠炎症因子IL-6和IL-2的含量。结果表明藤黄健骨胶囊各剂量组能显著降低KOA模型大鼠右后足足跖厚度、WBC、N/L和白细胞介素-6(Interleukin,IL-6)等指标,藤黄健骨胶囊中、高剂量组能够显著降低KOA模型大鼠Mankin评分和N数目,显著升高KOA模型大鼠的L数目,藤黄健骨胶囊高剂量组能够显著降低KOA模型大鼠白细胞介素-2(Interleukin,IL-2)含量(P<0.05)。这说明藤黄健骨胶囊可以减轻KOA疼痛和延缓软骨退变,可能与减少炎症细胞数目和炎症细胞因子含量有关。

自拟中药泡足方联合藤黄健骨胶囊治疗腰肌劳损的临床观察

目的:探讨自拟中药泡足方联合藤黄健骨胶囊治疗腰肌劳损的临床疗效。方法:选取我院120例腰肌劳损患者,随机分为对照组和实验组,各60例。两组均给予自拟泡足方治疗,实验组在上述基础上给予藤黄健骨胶囊口服治疗,4周后对比疼痛视觉模拟评分(VAS)、Roland-Morris功能障碍调查表(CRMDQ)评分以及临床疗效。结果:两组治疗后VAS评分、CRMDQ评分均显著降低,有效率均高于80%,治疗前后对比差异具有统计学意义(P<0.05);且与对照组相比,实验组治疗后VAS评分、CRMDQ评分均优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),实验组治愈率较对照组提高了1.04倍。结论:自拟中药泡足方联合藤黄健骨胶囊治疗腰肌劳损疗效显著,临床症状得到有效改善,值得在临床推广。

藤黄健骨胶囊联合温针灸治疗原发性骨质疏松症的临床研究

目的:观察藤黄健骨胶囊联合温针灸对原发性骨质疏松症(POP)患者疗效及血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的影响,以期为临床治疗提供理论依据。方法:选取本院收治的POP患者98例作为研究对象,按照随机数字表法分为两组,观察组和对照组各49例。两组均给予健康教育、饮食、运动指导等基础干预,在此基础上对照组给予温针灸治疗,观察组在对照组基础上联合藤黄健骨胶囊治疗。治疗3个疗程后,观察两组中医症候积分、临床疗效、骨密度(BMD)、血清碱性磷酸酶(ALP)、尿钙/肌醉比值(U-Ca/Cr)、尿经脯氨酸/肌醉比值(U-HoP/Cr)以及血清IGF-1和IGFBP-3水平。结果:治疗后对照组中医证候积分为(13.68±3.41)分,观察组为(10.59±3.12)分,治疗后两组中医症候积分显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组总有效率91.84%显著高于对照组75.51%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后对照组粗隆间、腰椎、Wards三角区、股骨颈骨密度水平分别为(0.59±0.10)g/cm3,(0.79±0.08)g/cm3,(0.54±0.12)g/cm3和(0.68±0.11)g/cm3,观察组分别为(0.64±0.12)g/cm3,(0.85±0.13)g/cm3,(0.61±0.15)g/cm3及(0.76±0.13)g/cm3,治疗后两组粗隆间、腰椎、Wards三角区、股骨颈BMD水平显著高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后对照组ALP,U-Ca/Cr及U-HoP/Cr分别为(92.57±8.26)mmol/L,(0.46±0.08)μmol/L及(15.28±4.13)μmol/L,观察组分别为(87.46±8.15)mmol/L,(0.41±0.06)μmol/L及(12.56±3.46)μmol/L,治疗后两组ALP,U-Ca/Cr及U-HoP/Cr水平显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后对照组IGF-1为(97.43±9.24)ng/mL,观察组为(101.75±10.38)ng/mL;对照组IGFBP-3为(3.28±1.01)μg/mL,观察组IGFBP-3为(4.36±1.25)μg/mL;治疗后两组IGF-1及IGFBP-3水平显著高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率4.08%稍低于对照组6.12%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:藤黄健骨胶囊联合温针灸可有效提高POP患者骨密度,改善骨代谢生化水平和血清IGF-1及IGFBP-3水平,提高临床疗效。