Preventive Effect and Mechanism of Ethyl Acetate Extract of Sceptridium ternatum in Monocrotaline-Induced Pulmonary Arterial Hypertension

Objective:To observe the effect and molecular mechanism of ethyl acetate extract of Sceptridium ternatum(STE)on the monocrotaline(MCT)-induced pulmonary arterial hypertension(PAH).Methods:The main chemical components of Sceptridium ternatum were determined,and the effects in PAH rats were observed.A total of 140 Sprague Dawley rats were randomly and equally divided into the normal group,the model group,the Bosentan group,and the STE groups(2.5,5,10 g/kg)by the random number table method.The characteristic indicators of PAH were measured,and immunohistochemistry was used to observe the lung tissue of rats.Morphological changes of the lung tissue were observed under the light microscope.Results:Compared with the normal group,rats in the model group showed a significant increase in right ventricular free wall thickness(RVFWT),mean pulmonary arterial pressure(mPAP),mean right ventricular pressure(mRVP),max right ventricular pressure(max RVP),weight of right ventricle(RV),and lung index(LI),while a significant decrease in pulmonary artery acceleration time(PAAT,P<0.01).Compared with the model group,rats treated with STE had a significant decrease of RVFWT,mPAP,mRVP,max RVP,and RV,while a significant increase of PAAT(P<0.01).After injection of MCT,nuclear factor-κB(NF-κB)p65 andα-smooth muscle actin(α-SMA)expression levels were up-regulated,and on the contrary,the treatment groups showed a significant downregulation without dose-dependent trend.Conclusions:STE can relieve the PAH in rats.STE may relieve pulmonary vascular disease and pulmonary injury by down-regulating the expression of NF-κB p65 andα-SMA.

小春花木犀草素提取工艺优化及其抗氧化活性研究

为优化小春花木犀草素提取工艺,并探讨其抗氧化活性。以小春花为试材,采用单因素和正交试验对小春花中天然产物木犀草素的提取工艺进行优化,得到最佳提取条件,并通过测定小春花提取物对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS+)自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)的清除能力及总还原力,研究其抗氧化活性。结果表明,最佳提取工艺条件为:超声时间25 min,液料比25∶1(mL/g),乙醇体积分数60%,超声温度85℃,通过验证试验得到该条件下木犀草素提取量为4.88 mg/g。抗氧化试验结果表明,小春花提取物对DPPH·、·OH和ABTS+自由基清除率的IC50分别为14.9、78.6、80.2 mg/L,是一种潜在的天然抗氧化剂。优化的小春花中木犀草素提取工艺合理可行,且提取物具有较强的抗氧化活性。

小春花总黄酮提取纯化工艺研究

目的：建立小春花总黄酮的提取、纯化工艺,为总黄酮化学成分、药理研究和制剂开发提供基础。方法：以小春花总黄酮为指标,考察提取工艺;采用大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化小春花总黄酮,对树脂型号、上样浓度、上样液pH值、洗脱溶剂的用量等进行了考察,确定最佳工艺。结果：小春花总黄酮的最佳提取工艺为：6倍量70%乙醇提取3次,每次2 h;得到总黄酮的平均含量4.14 mg/g,转移率均达到90%以上;大孔吸附树脂纯化小春花总黄酮的最佳工艺为：以D101型大孔吸附树脂为吸附剂,上样液浓度p H为5、浓度为1.22 mg/mL,以流速2 mL/min过柱,用水6BV进行洗脱,再用70%乙醇4BV洗脱,得到的小春花总黄酮含量达7.25%,得率均在75%以上;聚酰胺树脂纯化最佳工艺为：以100-200型聚酰胺树脂为吸附剂,上样浓度为1.18 mg/mL,流速2mL/min过柱,再用70%乙醇4BV洗脱,得到小春花总黄酮的含量符合制剂学要求。结论：本部分建立了小春花总黄酮的提取工艺,并采用大孔吸附树脂、聚酰胺树脂进行纯化,提取的总黄酮含量≥50%,满足制剂开发的需求。

阴地蕨生物学功能的研究进展

本文通过文献资料法、访谈法等方法对阴地蕨的生物学方面的研究进行追踪探讨,目前对阴地蕨的研究主要集中在医学、化工方面,阴地蕨的利尿作用、抗菌作用、对肿瘤细胞增殖的抑制作用、祛痰作用、纠正高尿酸血症、增强免疫力等,通过对以上各方面的综述从而对目前阴地蕨的生物学功能得到一个概述,进一步为其在运动医学方面的生物学功能做出推论。

一朵云不同部位氨基酸的分析与评价

采用盐酸水解法,利用高效液相色谱仪对一朵云所含氨基酸进行定性、定量分析。结果显示,一朵云根含有至少14种氨基酸,氨基酸总量为5.12%,其中,有4种是人体必需氨基酸,含量为1.95%,占氨基酸总含量的38.08%;一朵云茎叶含有至少17种氨基酸,氨基酸总量为2.17%,其中,有7种是人体必需氨基酸,含量为0.85%,占氨基酸总含量的39.17%,一朵云的根及茎叶必需氨基酸的构成比例均基本符合食品法典委员(FAO/WHO)的理想模式标准。根及茎叶均含有8种味觉氨基酸(其中2种鲜味氨基酸,4种甜味氨基酸,2种芳香氨基酸),总含量分别为2.9%、1.8%,3种特殊氨基酸总含量分别为1.44%、0.62%。最后用模糊隶属函数法进行综合评价发现,一朵云的根氨基酸质量较好;茎叶氨基酸质量相对较差。这些结果将为一朵云的开发利用奠定重要基础。

苗药一朵云中微量元素含量的测定

[目的]测定黔东南林区野生苗药一朵云的微量元素的的含量,为该地苗药资源开发和利用提供依据。[方法]采用火焰原子吸收光谱法测定样品中微量元素锌、铁、镍、铜的含量。[结果]样品中微量元素锌、铁、镍和铜的含量分别为41.40、587.42、2.31和5.91mg/kg。[结论]苗药一朵云中含有适量的微量元素,值得进一步开发利用。

一朵云不同部位营养成分分析及安全性评价

为研究云南野生植物一朵云(Botrychium ternatum(Thunb.)Sw.)的营养价值及开发前景,测定了一朵云的营养成分及重金属、硝酸盐和亚硝酸盐含量,并将一朵云与4种野生蔬菜和药食两用植物进行了营养成分含量和硝酸盐、亚硝酸盐含量的对比,并对一朵云的营养价值和重金属、硝酸盐和亚硝酸盐风险进行了评估。研究结果表明:1)一朵云茎叶和根的粗蛋白、粗脂肪、总糖、纤维素和灰分的含量分别为3.70%和3.17%、8.15%和5.40%、8.50%和1.40%、8.43%和1.48%、7.0%和3.80%,均比经常食用的4种野生蔬菜高。此外,一朵云茎叶和根均还有丰富的维生素B1、维生素B2、维生素B6及矿物质元素K、Na、Ca、Mg、Fe、Mn、Zn,尤其是维生素B6和Ca、Fe的含量极高;2)一朵云根及茎叶中均未检测出重金属汞,但是,含有一定量的重金属Cd、Pb,但且其含量未超出蔬菜限量标准及中草药限量标准。此外,一朵云茎叶及根均含有亚硝酸盐和硝酸盐,但是含量极低。

阴地蕨全转录组分析及植物激素信号转导相关基因筛选

该研究以新鲜阴地蕨全株为材料,用Illumina HiSeq 2500平台进行全转录组测序,干净序列经组装后得单一基因(Unigene),将Unigene在非冗余蛋白/核酸数据库(nonredundant protein database,NR)、核酸序列数据库(nucleotide sequence database,NT)、基因本体论数据库(gene ontology,GO)、蛋白质真核同源数据库(clusters of eukaryotic orthologous groups,COG)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、蛋白质序列数据库SwissProt和Interpro进行生物信息学分析。结果表明:共获得干净序列6.67 Gb,组装后得到58 646个Unigene,平均长度为1 023 bp,Unigene在上述数据库的总体注释率为69.25%。其中,在GO数据库中,20 762个基因被注释到生物功能、细胞组分和分子功能3个本体的52个功能组,COG注释了20 633个基因并将其划分为25个功能簇;在KEGG数据库中,比对注释了29 377个基因,可划分为5个大类、19个亚类代谢途径,据此筛选出八类植物激素信号转导相关的41个基因家族。通过比对共得到43 102个编码序列(coding sequence,CDS),平均长度为749 bp,N50为1 137;筛选到60个转录因子(transcript factor,TF)家族共1 502个转录因子基因;共发现17 195个单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点,其中碱基转换11 122个,颠换6 073个;发现了8 245个简单序列重复(simple sequence repeat,SSR),数量最多的为二核苷酸重复和三核苷酸重复。这些结果从功能和结构方面提供了阴地蕨全转录组信息和涉及植物激素信号转导的潜在基因,为进一步深入研究阴地蕨的生长发育、遗传、品种鉴别等提供了分子生物学的基础数据。

阴地蕨提取物对运动训练大鼠肾脏抗氧化能力的影响

研究了阴地蕨提取物对运动训练大鼠肾脏抗氧化能力的影响。结果表明:运动加药组大鼠力竭运动后肾脏组织的T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px活性和GSH含量均显著高于运动组,而MDA含量显著低于运动组。说明阴地蕨提取物在运动训练大鼠肾脏组织中具有消除自由基及抗氧化的功效。

小春花对肝纤维化小鼠肝功能及TGFβ_1、CTGF水平的影响

目的研究小春花对肝纤维化的作用及其作用机制。方法通过建立肝纤维化小鼠模型给予药物治疗,检测小鼠肝功能的变化及转化生长因子(TGFβ1)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。结果结果表明小春花能有效的抑制小鼠肝纤维化,并可以减少小鼠肝脏TGFβ1、CTGF的表达。结论小春花不但能减轻肝细胞损伤,改善肝功能,而且通过抑制TGFβ1的产生,阻断和逆转肝纤维化的形成,对CCL4诱导的小鼠肝纤维化有明确的治疗作用,对肝脏没有明显的毒性作用。

阴地厥提取物对运动训练大鼠不同组织抗氧化水平的影响

【目的】探讨阴地厥提取物(Scepteridium ternatumextract,STE)对运动训练大鼠心、肝、肾、脑、股四头肌等组织抗氧化水平的影响。【方法】将24只SD雄性大鼠随机分为安静对照组、运动对照组及运动+STE组,后2组大鼠进行7周的大强度跑台耐力训练,安静对照组自由活动不进行跑台训练,运动+STE组大鼠每天灌胃STE100mg/kg,其他2组灌服相同体积的生理盐水,每周最后1天测各组大鼠的体质量。第8周第1天取运动对照组和运动+STE组大鼠心、肝、肾、脑、股四头肌等组织样品,匀浆后分别测试各组大鼠不同组织总抗氧化能力(T-AOC)及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量。【结果】运动+STE组和运动对照组大鼠体质量与安静对照组比较均呈下降的趋势,其中运动+STE组大鼠体质量变化无显著性差异(P>0.05),而运动对照组大鼠体质量变化有显著性差异(P<0.05)。运动+STE组大鼠各组织T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px活性和GSH含量显著或极显著高于运动对照组。运动+STE组大鼠各组织(除脑组织外)MDA含量显著低于运动对照组(P<0.05),而高于安静对照组。【结论】阴地厥提取物可以改善长时间大强度耐力运动大鼠心、肝、肾、脑、股四头肌等组织的抗氧化水平,维持各组织抗氧酶活性和GSH含量,降低脂质过氧化反应,减少MDA的生成。

一朵云挥发油成分的GC/MS分析

采用水蒸气蒸馏-乙醚萃取法提取一朵云中挥发油成分,利用气相色谱-质谱联用分析并人工图解析挥发油的化学成分.鉴定出47个化合物,相对含量高达86.62%.主要成分依次为糠醛(2.08%),邻-羟基苯甲酸(15.74%),2-羟基3-甲基苯甲醛(1.65%),α-桉叶油醇(2.41%),甜没药萜醇(2.70%),甲基-1-(6-羟基-2-异丙基)-苯并呋喃基酮(6.40%),正十六酸(13.96%),(9Z,12Z)-9,12-共轭二烯十六酸(11.85%),17-十八烯-14-炔-1-醇(9.16%)等.

苗药一朵云的矿质元素锰、钙的测定

用火焰原子吸收光谱法测定产地为黔东南林区剑河县的野生苗药一朵云的矿质元素锰、钙的含量,并讨论了人体内锰、钙的作用与该苗药相关药用价值的关系.

高效液相色谱法测定阴地蕨中山奈酚和槲皮素含量

目的：通过高效液相色谱-质谱串联（ HPLC-MS/MS）法鉴定阴地蕨中山奈酚成分，并建立HPLC法同时测定阴地蕨中山奈酚和槲皮素含量。方法采用 Agilent 1200 LC高效液相色谱仪及 API3200 QTRAP MS/MS质谱仪， Ecilipse XDB-C18（15 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱，甲醇-0.1％甲酸溶液（85：15）为流动相，鉴定阴地蕨中山奈酚及槲皮素；用Agilent 1260 LC高效液相色谱仪，Eclipse plus C18色谱柱（100 mm×4.6 mm，5μm），甲醇-0.4％磷酸溶液（45：55）为流动相，流速0.8 mL·min－1，检测波长360 nm，测定阴地蕨中的山奈酚及槲皮素含量。结果出现m/z 287.1[M＋H]＋及m/z 301.0[ M＋H]＋峰为质谱的特征峰，分别与山奈酚及槲皮素对照品具有高相似度，证明样品中含有山奈酚和槲皮素；山奈酚和槲皮素的线性范围均为2.500~25.000μg·mL－1，r分别为0.9999和0.9998；精密度实验RSD分别为0.98％和0.79％（ n＝5）；加样回收率RSD分别为1.89％，2.70％（ n＝5）。结论阴地蕨中含有丰富的山奈酚及槲皮素，HPLC法适于同时测定阴地蕨中的山奈酚及槲皮素含量，方法简便可行，重复性好，精密度高，结果可靠。

半边旗和阴地蕨粗多糖抗鱼病病原菌活性初步研究

采用4种方法提取阴地蕨和半边旗多糖,并利用圆形纸片法进行抑菌实验。结果表明:阴地蕨和半边旗多糖提取物显示出不同程度的抑制3种鱼病病原菌的活性,阴地蕨多糖提取物对肠炎病病原菌的最小抑菌浓度为6.25mg/ml。

阴地蕨多糖提取工艺及抗肿瘤活性测定研究

水提醇沉法提取阴地蕨多糖,以多糖得率为指标,考察提取温度、提取时间、料液比及提取次数对多糖得率的影响,通过正交试验优化提取工艺参数;采用MTT法检测阴地蕨多糖对癌细胞CT-26、K562、WEHI-3细胞作用48 h后的增殖抑制作用。试验结果表明,提取时间和温度是阴地蕨多糖提取率最主要的影响因素,优化的最佳提取条件为:温度100℃,料液比为1∶40(mg/m L),提取时间4 h和提取次数3次。阴地蕨多糖对3种肿瘤均有生长抑制作用,且呈现一定的浓度依赖性,抑制作用强弱为WEHI-3>K562>CT-26,半数抑制浓度IC50分别为0.85、2.13、2.52 mg/m L。

小春花镇咳平喘有效部位活性筛选

目的:考察小春花不同提取部位的镇咳平喘作用。方法:通过氨水引咳法检测咳嗽的潜伏期和3 min内咳嗽次数,组胺喷雾致喘法检测引喘潜伏期,卵蛋白致敏法检测气道反应性、ELISA法检测细胞因子(IL-4,IFN-γ)水平、光镜下肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的分类计数和观察肺组织病理学改变。结果:小春花氯仿层和乙酸乙酯层可极显著减少小鼠在3 min内的咳嗽次数(P<0.01);石油醚层和氯仿层与对照组相比能极显著延长哮喘潜伏期(P<0.01),乙酸乙酯层具有显著性差异(P<0.05);小春花各部位与模型组相比均能降低哮喘小鼠气道反应性,其中石油醚层、氯仿层和正丁醇层能明显地降低哮喘小鼠的气道缩窄指数(Penh)(P<0.01),氯仿层和乙酸乙酯层能极显著性增加哮喘小鼠的潮气量(P<0.01)以及降低BALF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的比例(P<0.01);石油醚层和乙酸乙酯层能显著降低IL-4的水平和IL-4/IFN-γ的比值(P<0.05)。结论:氯仿层和乙酸乙酯层具有明显的镇咳作用并且能明显降低气道炎症反应,提示为小春花镇咳、平喘的有效部位。

响应面法优化小春花根黄酮提取工艺及其抗油脂氧化活性研究

目的研究小春花根黄酮提取工艺及其抗油脂氧化活性。方法以总黄酮提取率为考察指标,利用单因素试验结合响应面Box-Benhnken试验设计方法,研究乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度4个因素对提取工艺的影响,优化小春花根黄酮提取工艺;通过烘箱热贮藏实验研究小春花根黄酮对油脂的抗氧化作用。结果影响小春花根总黄酮提取的因素依次为:超声提取温度>乙醇浓度>提取时间>料液比,小春花根总黄酮最佳工艺条件为:乙醇体积分数73%,料液比1:43(g/mL),提取时间73 min,提取温度71℃。黄酮提取得率为3.4299 mg/g,与理论预测值3.4913 mg/g接近。抗氧化活性分析表明,黄酮提取物有较强抗油脂氧化活性;对油脂的抗氧化能力与黄酮提取物浓度成正相关,1 mg/mL黄酮提取物与VC的抗氧化作用相当。结论小春花根黄酮对油脂良好的保护效果,在油脂抗氧化添加剂的应用方面具有潜在的开发价值。

原子荧光光谱法测阴地蕨的硒含量

采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定了阴地蕨根和叶中的硒含量.结果表明,硒含量在0～10ng/mL之间线性关系良好,其相关系数r=0.999 6,其回归方程为y=140.02x+27.回收率为98.9%～101%,相对标准偏差RSD=0.73%,检出限为1.45ng/g;硒在阴地蕨全草中分布比较均匀.该方法具有准确度较高、重现性好和线性范围宽的优点.

陈皮-半夏药对治疗高脂血症作用机制的网络药理学分析与实验研究

目的基于网络药理学研究陈皮-半夏药对治疗高脂血症的潜在作用机制,并通过动物实验进行初步验证。方法利用网络药理学获取陈皮-半夏药对有效成分及与高脂血症的共同靶点,进而利用David数据库进行基因本体(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,分子对接技术对相关结果进行分子模拟对接,并通过动物实验对Hub基因表达量进行实验验证。结果得到陈皮有效成分5个、半夏有效成分13个,与高脂血症共同靶基因69个;GO富集分析发现,陈皮-半夏药对有效成分具有酶结合、RNA聚合酶Ⅱ转录因子调控、配体激活序列特异性DNA结合、类固醇激素受体结合等分子功能,可以参与对药物的反应、衰老、缺氧反应、胆固醇代谢过程、凋亡过程的负调控等生物过程;KEGG富集分析结果主要包括非酒精性脂肪肝信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、脂肪细胞因子信号通路等;分子对接技术证实其中的川陈皮素、黄芩苷等有效成分与3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的对接构象优于瑞舒伐他汀。动物实验表明,陈皮-半夏药对可以有效调控Hub基因表达量,从而起到治疗高脂血症作用,对生物富集结果进行了初步验证。结论陈皮-半夏药对中的多种活性成分具有通过多靶点、多通路协同作用于高脂血症的网络机制,而川陈皮素、黄芩苷等有效成分是其发挥降脂作用的潜在分子基础。陈皮-半夏对高脂血症小鼠血脂代谢有明显改善效果,并能有效调控相关基因的表达量。