基于网络药理学与分子对接的蒺藜皂苷D抗肺纤维化的作用机制研究

目的:采用网络药理学和分子对接技术探讨蒺藜皂苷D治疗肺纤维化可能的分子机制。方法:采用SwissTargetPrediction数据库收集蒺藜皂苷D靶点,通过UniProt数据库将相应靶点蛋白名称进行标准化;通过DrugBank数据库、GeneCards数据库和OMIM数据库检索“pulmonary fibrosis”,获取肺纤维化疾病靶点;通过韦恩图获取蒺藜皂苷D和肺纤维化的共同靶点,并进行蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络分析、基因本体论(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。利用分子对接技术验证蒺藜皂苷D与核心靶点的结合能力。结果:获取蒺藜皂苷D 43个潜在靶点,肺纤维化疾病1492个相关靶点,蒺藜皂苷D与肺纤维化共同靶点17个,PPI网络中自由度排名前8个靶点分别为MAPK3、PPARG、IL6、TNF、VEGFA、TGFβ1、FGF2和STAT3;GO功能富集注释得到生物学过程(BP)条目418条,细胞组成(CC)条目22条,分子功能(MF)条目29条;KEGG通路分析得到69条信号通路;分子对接提示MAPK3、FGF2、STAT3、IL6、PPARG与蒺藜皂苷D的结合能均≤-5.0 kcal/mol。结论:蒺藜皂苷D通过多靶点、多途径的效应发挥治疗肺纤维化的生物活性,其可能通过MAPK3、FGF2、STAT3、IL6和PPARG等靶点调控MAPK信号通路和PI3K-Akt信号通路治疗肺纤维化。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定蒺藜中蒺藜皂苷D的含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定蒺藜中蒺藜皂苷D含量的方法。方法采用的色谱柱为InertSustain C18(250×4.6mm,5μm),柱温30℃,以乙腈-水(45∶55)为流动相,流速1.0mL/min,使用ELSD-6000型蒸发光散射检测器。结果蒺藜皂苷D对照品在0.206-1.030μg范围内线性关系良好(r=0.9996,n=6),平均回收率为104.25%。结论HPLC-ELSD法精密度、重复性、回收率良好,适用于蒺藜药材中蒺藜皂苷D的含量测定。

基于模拟炮制技术的蒺藜炒制过程中蒺藜皂苷D转化规律研究

通过测定蒺藜炒制前后蒺藜皂苷D和海柯皂苷元的含量,确定蒺藜皂苷D含量显著降低,海柯皂苷元含量显著增加。为验证加热炒制使蒺藜皂苷D向海柯皂苷元转化的推论,采用模拟炮制技术研究蒺藜皂苷D和海柯皂苷元的量变规律,采用超高效液相色谱-飞行时间质谱定性分析蒺藜皂苷D对照品的模拟炮制产物,明确其在炒制时的转化过程。结果显示:在一定温度下,随炮制时间的延长蒺藜皂苷D含量先显著降低再出现平台期,升高炮制温度可使蒺藜皂苷D含量进一步降低且推迟出现平台期的时间;采用220℃和240℃较高温度模拟炮制时,随着炮制温度的升高和炮制时间的延长,海柯皂苷元的含量逐渐增加;蒺藜皂苷D在加热炮制过程中发生脱糖反应生成海柯皂苷元不是一步完成的,其脱糖反应优先发生于糖链的末端糖,随后自外向内依次脱去糖链上的多个糖基,最后生成苷元。该研究为下一步揭示蒺藜炒制减毒机理提供了依据。

蒺藜皂苷D促进膀胱癌T24细胞凋亡的作用及机制研究

目的探讨蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞凋亡的调控作用及其分子机制。方法将膀胱癌T24细胞分为空白组、对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组。空白组不做干预,对照组加入等量50%的乙醇,低、中、高剂量实验组分别加入浓度为30,60,90 mg·L^(-1)的蒺藜皂苷D干预处理。用实时无标记细胞分析技术(RTCA)实时检测细胞生长状况;用流式细胞术实验检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测凋亡抑制蛋白B细胞淋巴2(Bcl-2)及促凋亡蛋白Bcl-2相关蛋白X(Bax)的表达水平。结果细胞存活率分析实验结果显示各浓度的蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞均有生长抑制作用,48 h时半数抑制浓度(IC50)经检测为35.98 mg·L^(-1)。空白组,对照组,低、中、高剂量实验组细胞72 h的增殖率分别为(241.01±21.43)%,(8.74±0.87)%,(85.73±8.47)%,(45.51±1.42)%和(27.45±2.59)%;干预24 h后的凋亡率分别为(3.81±1.02)%,(29.12±3.10)%,(8.18±2.12)%,(16.77±3.68)%和(26.66±3.15)%。低、中、高剂量实验组与空白组比较,增殖率显著下调,凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白组、对照组、低、中、高剂量实验组的Bcl-2相对表达水平分别为0.61±0.03,0.21±0.06,0.56±0.05,0.38±0.09和0.32±0.05;Bax相对表达水平分别为0.19±0.06,0.62±0.08,0.24±0.08,0.39±0.08和0.53±0.04。上述指标,低、中、高剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论蒺藜皂苷D通过调控膀胱癌T24细胞凋亡关键蛋白Bcl-2及Bax的表达,以此抑制肿瘤细胞生长并促进其凋亡。