人脐带间充质干细胞在大鼠睾丸间质内向Leydig细胞分化的实验研究

目的:研究人脐带间充质干细胞(HUMSCs)在大鼠睾丸间质内向Leydig细胞分化的可行性。方法:贴壁法获得HUMSCs,分别通过流式细胞表面抗原染色与三系分化验证其纯度与多向分化能力,用CM-Dil标记HUMSCs后将其移植入大鼠睾丸间质内,并在移植后4周与8周对大鼠睾丸进行免疫荧光染色观察HUMSCs的存活与分化情况,移植后8周获得大鼠睾丸细胞悬液,通过流式细胞染色检测HUMSCs表达Leydig细胞标志物3β-HSD判断细胞分化的效率,通过流式细胞分选获得悬液内CM-Dil标记的在睾丸内分化后的HUMSCs,并对其进行培养,培养3 d后收集培养液,检测其睾酮水平。结果:Leydig细胞标志物CYP11a1在HUMSCs移植8周后有表达,而在移植4周后未见表达。3β-HSD流式染色显示其分化效率约为14.5%,流式细胞分选后细胞可存活,且其培养液内能检测出睾酮。结论:HUMSCs在大鼠睾丸间质内可向Leydig细胞分化。

N-苄基十六碳酰胺促小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮的~1H NMR代谢组学研究

采用基于核磁共振氢谱(~1H NMR)的细胞代谢组学技术探讨了玛咖有效成分N-苄基十六碳酰胺(NBH)促进小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮的作用机制.测定了小鼠Leydig细胞在给药前后的细胞增殖率和细胞培养液中的睾酮含量,采用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析,研究了小鼠Leydig细胞在给药前后细胞破碎液中的代谢物差异,并进行了代谢通路分析.实验结果表明, NBH能提高小鼠Leydig细胞增殖率和睾酮分泌量,给药后小鼠Leydig细胞破碎液中的代谢轮廓明显改变,共鉴定亮氨酸、赖氨酸、鲨肌醇、缬氨酸和丙氨酸等24种差异代谢物.经Metaboanalyst分析发现,差异代谢物主要涉及丙氨酸/天冬氨酸/谷氨酸代谢、甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸代谢、谷胱甘肽代谢及丙酮酸代谢等10条新陈代谢和遗传信息处理代谢通路,初步阐明了NBH通过调节上述代谢通路的相关节点发挥促进小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮作用.

胶原受体DDR2与非梗阻性无精症的相关性研究

目的探究胶原受体DDR2在非梗阻性无精症(NOA)中的作用及其相关机制。方法获取GEO数据库NOA患者睾丸组织基因芯片数据(GSE45885),通过limma差异基因分析与WGCNA分析,检测DDR2在4种不同严重程度NOA之间的表达变化及相关性。通过分析睾丸组织单细胞转录组测序数据,明确DDR2在睾丸中的表达定位、拟时序动态变化及靶标细胞间的通信关系,并使用DDR2^(-/-)小鼠模型验证其对精子发生的调控作用。结果DDR2与严重NOA的发病密切相关,其表达水平随无精症病症加重而逐渐升高,在唯支持细胞综合征(SCOS)患者睾丸组织中表达水平最高(P<0.001);其次为减数分裂前生精阻滞、减数分裂期生精阻滞和减数分裂后生精阻滞。DDR2高表达于睾丸间质细胞(LCs)和管周肌样细胞(PMCs),其表达水平在成纤维来源细胞拟时序中与标记基因Cyp17a1、Myh11和Sbspon相一致,在分化中期和后期细胞高表达,在分化前期细胞中低表达。细胞通信分析显示,DDR2可能通过Col1a1_Col1a2-Itga9_Itgb1/Sdc4等配受体关系参与调控LCs和PMCs细胞间通信。DDR2^(-/-)雄鼠成熟精子精子活率、精子活动总数及有效精子数均显著降低,表现出严重的精子发生障碍。结论DDR2与严重NOA的发病密切相关,且可能通过参与LCs和PMCs细胞间通信而影响精子发生。

何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响

目的探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)蛋白表达的变化。方法选用10~20 d的幼年雄性Wistar大鼠,分离、培养Leydig细胞,然后收集。采用氧化损伤的方法建立Leydig细胞衰老模型。实验分组:间质细胞衰老模型组,何首乌饮处理组,首乌丸处理组,正常组和何首乌饮对照组。结果衰老模型组Leydig细胞St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组(P<0.01)。另一方面,何首乌饮和何首乌丸干预组St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P<0.05),何首乌饮组好于何首乌丸组。结论何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞St AR和P450scc蛋白的表达,提高睾酮的合成能力,从而延缓Leydig细胞衰老。

大鼠睾丸间质细胞分离及其鉴定

目的和方法 :通过血管冲洗、Ⅱ型胶原酶消化以及Percoll梯度离心 ,建立大鼠睾丸间质细胞分离方法。结果 :(1)Percoll密度梯度离心后纯化的间质细胞 3β HSD染色阳性百分率可达 85 %。 (2 ) 1.2× 10 -3 IU/mlhCG可显著性增加间质细胞睾酮的分泌 (P <0 .0 5 )。结论

二苯乙烯苷调控胰岛素/IGF-1信号通路延缓大鼠睾丸间质细胞衰老的作用机制

采用自由基损伤的方法建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型,用流式细胞术检测各组细胞周期的变化;应用RT-qPCR、免疫荧光和Western blot技术检测睾丸间质细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平.结果显示:与正常组相比,衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60%以上(P<0.05),G1期所占比重明显增加,S期所占比重明显减少(P<0.05).胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因表达变化:IRS1、IGF-1、IRS2、INSR在衰老组的表达水平明显低于正常组(P<0.05),IGFBP3在衰老组的mRNA表达水平明显高于正常组(P<0.05),二苯乙烯苷可逆转上述现象,上调IGF-1、INSR、IRS1、IRS2表达,下调IGFBP3的mRNA表达.结果表明二苯乙烯苷通过调控胰岛素/IGF-1信号传导通路延缓睾丸间质细胞衰老.

何首乌饮延缓大鼠睾丸间质细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1信号通路的关系

目的探讨何首乌饮延缓大鼠睾丸间质(Leydig)细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号通路的关系。方法采用氧化损伤的方法建立大鼠Leydig细胞衰老模型。用流式细胞术检测各组细胞周期的变化。应用Real-time PCR、免疫荧光和Western blotting技术检测Leydig细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平,并运用胰岛素受体/IGF受体特异性抑制剂BMS-754807处理细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果与正常组相比,衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60%(P<0.05),G1期所占比重明显增加,S期所占比重明显减少(P<0.05)。胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因表达变化:衰老组胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS1)、IRS2、IGF1表达水平明显低于正常组(P<0.05),胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)的mRNA表达明显高于正常组(P<0.05),何首乌饮可逆转上述现象。用BMS-754807处理衰老的Leydig细胞后,Bcl-2mRNA表达水平低于衰老组(P<0.05),用何首乌饮和BMS-754807同时处理衰老的Leydig细胞,细胞凋亡率高于何首乌饮组(P<0.05)。结论何首乌饮通过调控胰岛素/IGF-1信号传导通路延缓Leydig细胞衰老。

睾丸间质细胞瘤DNA含量的分析

对 1 2例睾丸间质细胞瘤的病理切片进行光镜观察 ,选取良恶性病例各 4例进行DNA染色 ,并通过计算机图像分析系统对良恶性肿瘤的DNA含量及倍体进行测定 ,比较良恶性肿瘤之间的形态学及倍体差异。结果表明 :1 2例肿瘤中 8例为良性无转移者 ,4例为恶性有转移病例。良性病例平均年龄为 36岁 ,其中 6例表现为单侧睾丸肿大 ,2例表现为单侧睾丸肿大伴双侧乳腺发育。 4例恶性肿瘤病人平均年龄 6 4岁 ,均表现为单侧睾丸肿大。恶性有转移病例肿瘤平均大小为 6 .0cm ,明显大于良性肿瘤平均 2 .5cm (P <0 .0 1 ) ;恶性病例肿瘤细胞异型性明显 ,核分裂相增多并可见病理性核分裂相 ,肿瘤多伴有坏死、边缘或附睾浸润。倍体测定显示所有恶性病例均为异倍体 ,而良性病例中仅 1 2 .5 %为异倍体 (P <0 .0 1 )。

睾丸间质细胞瘤2例报告并文献复习

目的探讨睾丸间质细胞瘤的临床病理特点,进而提高睾丸间质细胞瘤的诊治水平。方法回顾性分析2例睾丸间质细胞瘤的临床病理资料并复习相关文献。结果 1例术中快速冷冻切片病理诊断为睾丸间质细胞瘤,行根治性睾丸切除术,1例直接行根治性睾丸切除术,术后病理均诊断为睾丸间质细胞瘤,其中1例精索残端及周围脂肪组织可见肿瘤细胞,精索静脉可见肿瘤浸润。术后分别随访24和6个月,未见复发或转移。结论睾丸间质细胞瘤临床罕见,术前诊断较为困难,确诊仍依赖组织病理学检查,外科手术是睾丸间质细胞瘤唯一有效的治疗方法。

睾丸间质细胞瘤的临床分析

目的:探讨睾丸间质细胞瘤的临床特点,提高睾丸间质细胞瘤的诊断和治疗水平。方法:报告1例睾丸间质细胞瘤患者的临床资料,结合相关文献进行分析。结果:术中快速冰冻病理结果为良性睾丸间质细胞瘤,行保留睾丸的肿瘤剜除术,术后随访4个月未见肿瘤复发及转移。结论:睾丸间质细胞瘤是临床较为少见的一种肿瘤,术前诊断较为困难,确诊仍依赖术后病理组织学检查。治疗主要以手术治疗,传统的手术方法采用根治性睾丸切除术,然而对于青春期前患者、双侧辜丸间质细胞瘤等患者,特别是病理检查确诊是良性睾丸间质细胞瘤患者,可以施行保留睾丸的肿瘤剜除术,行肿瘤剜除术前应常规行快速冰冻病理检查。

大鼠胰淋巴管的微细分布

采用半薄切片光镜观察和超薄切片电镜观察方法研究了大鼠胰淋巴管的微细分布。结果证明 ,在胰小叶内包括胰岛内及其周围均不存在毛细淋巴管和淋巴管而有丰富的血管 ;胰的毛细淋巴管和淋巴管仅见于小叶间的结缔组织内。

老年雄性大鼠自体移植幼年睾丸组织后血清睾酮水平及间质细胞的变化

目的行老年雄性SD大鼠自体移植幼年时睾丸组织后检测睾酮水平及移植部位睾丸间质细胞变化,探讨睾丸组织移植对大鼠睾酮水平的影响。方法雄性1月龄SD大鼠20只,测睾酮水平,行右侧睾丸组织切除并放置-80℃冰箱。检测4月龄SD大鼠睾酮水平,检测24月龄睾酮水平,然后右侧腋部皮下自体移植幼年时冰冻睾丸组织。检测25月龄(即睾丸组织自体移植术后1月)血清睾酮水平,检测26月龄(即睾丸组织自体移植术2月后)血清睾酮水平及变化。检测冰冻睾丸组织移植前睾丸间质细胞情况,移植后1月及2月睾丸间质细胞变化。结果 1月龄SD大鼠睾酮水平为(0.067 0±0.031 81)ng/mL;切除一侧睾丸组织4月龄SD大鼠睾酮水平为(2.695 0±0.293 18)ng/mL;切除一侧睾丸组织24月龄SD大鼠睾酮水平为(1.584 2±0.431 19)ng/mL;切除一侧睾丸组织25月龄SD大鼠自体移植大鼠血清睾酮水为(1.789 5±0.298 99)ng/mL;切除一侧睾丸组织26月龄SD大鼠自体移植大鼠血清睾酮水平为(1.516 8±0.413 82)ng/mL。切除一侧睾丸组织24月龄SD大鼠和26月龄SD大鼠(即睾丸组织自体移植术2月后)两组间差异无统计学意义,其余各组两两比较均有统计学意义。冰冻睾丸组织移植前睾丸间质细胞较多,移植后1月睾丸间质细胞有减少趋势,在2月后睾丸间质细胞绝大多数凋亡。结论老年雄性SD大鼠自体移植幼年时睾丸组织后短期内可以提高睾酮水平,因多种因素长期睾酮水平升高不理想。由多种原因移植部位睾丸间质细胞逐渐凋亡。

成年型睾丸间质细胞激活素A的作用不容忽视

睾丸支持细胞和间质细胞功能紊乱所导致的睾丸发育不全是引起男性不育的重要原因之一。传统观点认为,胚胎时期支持细胞是睾丸索形成的主要上皮细胞,其分泌信号诱导睾丸索的生长和分化,间质细胞则分泌雄激素,并不参与睾丸索的形成。而2010年6月8日刊登在《美国科学院院刊》(Proc Natl Acad Sci USA)上的一篇文章提出,胚胎型间质细胞分泌的激活素A也参与胚胎时期睾丸索的形成。本文就其中的一些发现提出自己的观点,即成年型间质细胞分泌的激活素A在出生后睾丸的发育和生殖细胞分化中也起一定的作用。

睾丸性不育症间质细胞增殖变化与Livin、Bim蛋白表达的关系

目的研究睾丸性不育症中睾丸间质细胞增殖变化与相关基因Livin、Bim的关系,为睾丸间质细胞增殖失衡的基因调控机制提供依据。方法应用免疫组化S-P法检测睾丸间质细胞Ki-67和Livin、Bim蛋白的表达,以Ki-67计数作为增殖指数(PI)。结果在58例睾丸性不育症间质细胞中,PI和Livin、Bim蛋白阳性表达率分别为(0.57±0.08)、36.2%、69.0%;在11例正常睾丸组织间质细胞中,分别为(0.78±0.15)、54.5%、36.4%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Livin阳性组PI高于阴性组(P<0.05),呈正相关;Bim阳性组PI低于阴性组(P<0.05),呈负相关。结论睾丸性不育症中睾丸间质细胞增殖失衡与Livin、Bim基因异常表达有关,从而间接影响精子形成。

产前地塞米松暴露对雄性子代大鼠生殖功能的影响

目的 探讨孕中、后期地塞米松暴露对雄性子代大鼠生殖功能的影响。方法 SD孕鼠随机分为对照组和地塞米松产前暴露组,每组各30只。地塞米松产前暴露组大鼠在怀孕第14~18天皮下注射给予地塞米松0.4 mg/(kg·d),对照组大鼠同时期每天皮下注射生理盐水0.5mL/只。怀孕第20天时采用剖宫产的方式取雄性胎鼠,此外让另一部分孕鼠自然分娩,待其子代雄性大鼠90 d后断颈处死。取血液分离血清备用;分离右侧睾丸石蜡包埋,其他的睾丸放置于-40℃冰柜中保存备用。检测血清中激素浓度;检测睾丸组织的甾体合成急性调控蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,Star),P450侧链裂解酶(P450 side chain cleavage enzyme,Cyp11a1),3β-hsd;进一步检测精子数量。结果 与对照组相比,地塞米松产前暴露组的胎鼠血睾酮浓度降低(P<0.05),胎睾丸间质细胞数量减少(P<0.05),Star和3β-hsd基因表达水平降低(P<0.05)。地塞米松产前暴露组的成年大鼠血睾酮浓度降低(P<0.05),睾丸间质细胞数量减少(P <0.05),甾体激素合成酶Star和3β-hsd的表达降低(P<0.05),附睾的精子数量降低(P <0.05)。结论 地塞米松产前暴露所致的子代胎儿血清中的睾酮浓度降低并可延续到出生后成年,同时出现精子数量减少,睾丸间质细胞数量的减少以及Star的基因水平表达下降可能是主要机制之一。

睾丸移植的发展历程与研究进展

睾丸移植作为治疗高位腹腔型隐睾、男性性腺功能减退及男性不育的有效手段,在吻合血管的自体、异体睾丸移植,睾丸组织及精原干细胞移植,睾丸间质细胞移植方面取得了较大进展。与此同时,也遇到诸多制约其发展的问题,其中最主要的当属移植术后难以持续、稳定地产生成熟的生殖细胞。联合移植方法的使用使包括胰岛和神经元在内的细胞在移植后可以较长时间存活,从而为糖尿病或者帕金森病的治疗提供了新的出路。

基于睾丸微环境探讨支持细胞及管周肌样细胞对间质细胞合成睾酮的影响

近年来,对于睾丸微环境的深入研究取得了一定的进展,为相关疾病的诊治与预防提供了新的思路。睾酮是男性体内重要的雄激素,其水平调控着男性的生理功能。睾酮的合成是一个极其复杂的过程,主要在睾丸间质细胞中进行。但随着大量研究的深入,更多地证据表明构成睾丸微环境的睾丸支持细胞和睾丸管周肌样细胞在睾酮合成过程中也发挥着举足轻重的作用。本综述将从睾丸微环境的角度分析间质细胞合成睾酮的过程及支持细胞和管周细胞对其产生的影响,以期为治疗和预防男性疾病提供参考依据。

干细胞移植治疗睾丸衰老的现状与思考

睾丸衰老的主要特点为睾酮合成能力以及生精功能逐渐下降,不仅会影响男性生育力,也与衰老相关慢性疾病关系密切。因此,延缓睾丸衰老对于改善中老年男性健康和生活质量至关重要。干细胞是具有强大的自我更新能力和多向分化潜能的细胞群体,近年来,其基础与临床应用研究不断深化,推动了细胞疗法的发展。干细胞移植目前已被用于治疗多种疾病,在衰老与再生医学领域也受到广泛关注。干细胞移植在治疗睾丸衰老中也具有巨大的应用前景。本文将回顾干细胞移植治疗睾丸衰老的相关研究历程与进展,并探讨临床转化面临的瓶颈以及疗效优化策略,以期为睾丸衰老的干细胞疗法研发及临床转化提供新思路。

Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达特征

目的明确Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达与定位并探究Usp9y的功能。方法利用生物信息学分析结合RT-PCR方法检测小鼠睾丸相关细胞系和C57BL/6J小鼠各个组织(子宫,睾丸,心,肝,脾,肺,肾,大脑,小脑,眼球)中Usp9y基因表达的特异性;利用q PCR法检测不同日龄小鼠睾丸中Usp9y基因的表达差异性。结果生物信息学分析结果显示Usp9y基因在成年小鼠睾丸中特异性表达(P <0. 05)。RT-PCR结果证实Usp9y在小鼠睾丸组织中特异性表达(P <0. 05)。usp9y在小鼠睾丸间质细胞(TM3)中特异性表达,在小鼠精原细胞(GC-1)和小鼠睾丸支持细胞(15P-1)中未检测到表达。q PCR结果显示相比其他日龄小鼠,18日龄的小鼠睾丸Usp9y表达显著升高(P <0. 05)。结论通过RT-PCR的方法确定Usp9y基因在TM3细胞中特异性表达;小鼠Usp9y基因在小鼠出生后18 d表达明显增高,上述结果表明Usp9y基因在精子发生早期发挥着不可替代的作用。

睾丸间质细胞瘤12例临床病理学特征分析

目的探讨睾丸间质细胞瘤(LCT)的临床病理特征和预后。方法观察12例睾丸LCT的临床病理学和免疫组化染色,并行随访和文献复习。结果本组患者年龄5~43岁(平均28岁),首发症状大多数表现为无痛性睾丸肿物。病理特征为瘤细胞常呈大块实性团状或小梁状、小管状、假滤泡状排列,瘤细胞体积大、呈多角形,轮廓清楚,胞质丰富嗜酸性,内含多量脂质;典型的细胞核呈圆形,伴有单个明显的核仁,偶有核沟,似颗粒细胞,核分裂象稀少或缺如。少数病例可见特征性Reinke结晶体及脂褐素。肿瘤间质常不显著,内含大量薄壁血管。免疫组化vimentin、calretinin和inhibin均(+)。结论睾丸LCT发病率较低,临床易误诊,确诊需依赖病理组织学检查,尤其对儿童和年轻未育者术前行肿物穿刺活检或术中快速冷冻检查有助于手术范围的选择。