低温序批式生物反应器中Comanonas testosteroni QYY降解水中喹啉的研究

利用序批式生物反应器研究了睾丸酮丛毛胞菌QYY(登录号:KM246901.1)在(10±1)℃条件下对水中喹啉的降解过程.结果表明:细菌QYY优先分解喹啉,再分解初级产物2-羟基喹啉,其将喹啉分子中的氮原子转化成NH4+,而不能进一步生成NO2-或NO-3;细菌QYY分解喹啉时进入对数生长期会大量消耗溶解氧,使溶解氧由8mg/L降低到2.4mg/L,并轻微降低溶液的pH;细菌QYY经诱导产生喹啉降解酶.

睾丸酮丛毛单胞菌激素降解关键酶3,17β-HSD蛋白质相互作用研究

为研究睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas Testosteroni,C.T.)ATCC11996降解甾体类激素过程中关键蛋白质的相互作用关系,本文利用基因同源重组及移码突变原理构建睾丸酮降解关键酶3,17β-HSD基因敲除突变株,在回收率95%条件下高效液相检测野生株与突变株睾丸酮降解率,突变株对睾丸酮降解能力明显低于野生株;原核表达3,17β-HSD获得浓度2.4 mg/mL纯化蛋白,制备特异性鼠源多克隆抗体,ELISA检测抗体效价1∶320000;将多克隆抗体与经睾丸酮诱导的野生型C.T.细胞裂解液蛋白质复合物进行免疫共沉淀,质谱测定蛋白质相互作用组,结果表明短链脱氢酶SDRy(WP_003078287.1)为睾丸酮降解过程中关键酶3,17β-HSD的主要相互作用蛋白。

Comamonas testosteroni 5-MGAM-4D来源的腈水合酶基因重组菌对腈类化合物的全细胞催化活性

目的:通过基因工程方法获得高效表达腈水合酶的基因工程菌CtNHase,探究其对腈类物质的全细胞催化作用,并考察pH、温度对全细胞催化反应的影响。方法:对来源Comamonas testosteroni 5-MGAM-4D的腈水合酶基因进行PCR扩增,以pET-24a为载体,构建基因重组表达质粒后,转化大肠杆菌感受态细胞进行SDS-PAGE蛋白表达验证,并通过色谱检测分析对底物丙烯腈和己二腈的转化情况。结果:在pH=7.4,30℃条件下,基因重组菌CtNHase催化活性最高,可通过全细胞催化在5 min内完全转化50 mmol/L己二腈生成己二酰二胺,在5 h内完全转化500 mmol/L丙烯腈生成丙烯酰胺。结论:基因重组菌CtNHase可高效催化丙烯腈和己二腈生成丙烯酰胺和己二酰二胺,具有潜在的工业应用价值。

睾丸酮丛毛单胞菌对喹啉的微生物降解途径的研究

从油制气废水的活性污泥中分离得到一株可以在好氧条件下利用喹啉作为唯一碳源和能源的睾丸酮丛毛单胞菌 (Co mamonastestosteroni,编号为Q10 ) .浓度为 2 5 0mg L的喹啉可被该菌完全降解 ,TOC去除率为 70 % .实验结果表明喹啉首先降解为 1H— 2 氧喹啉 ,然后继续转化为 6 羟基— 1H— 2 氧喹啉、5 ,6 二羟基— 1H— 2 氧喹啉和 5 羟基— 6 (2 羧基乙烯基 )—1H— 2 吡啶酮 ,由此提出该菌降解喹啉的一种可能途径 .样品中还发现少量的 8 羟基— 1H— 2 氧喹啉 ,表明菌Q10 对喹啉的降解可能是通过以一种途径为主的多种途径进行的 .

3,5-二硝基苯甲酸降解菌A3的分离及降解特性

从硝基苯类化合物废水处理系统中分离到一株3，5-二硝基苯甲酸降解菌株A3，经形态特征、生理生化以及16S rDNA序列分析，初步鉴定为睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）．该菌能以200mg/L3,5-二硝基苯甲酸为唯一碳源，12h的降解率可达95％以上，24h可溶性有机碳（DOC）由72．5mg/L降至10．2mg／L。表明3，5-二硝基苯甲酸被降解矿化而不是被转化成其他有机物．当A3以200mg/L3,5-二硝基苯甲酸为唯一碳、氮源时，将底物转化为一种黄色代谢产物，该产物不易进一步降解．A3降解3，5-二硝基苯甲酸的适宜温度为20-30℃。最适pH值为5-9．

睾丸酮丛毛单胞菌对喹啉类化合物的降解

对喹啉、异喹啉、 2 甲基喹啉、 3 甲基喹啉、4 甲基喹啉和 6 甲基喹啉在睾丸酮丝毛单胞菌 (ComamonastestosteroniQ1 0 )作用下的降解及底物之间的相互作用进行研究 .结果表明 ,喹啉和 3 甲基喹啉不仅能有效地被降解 ,而且细菌也有明显的生长 ,而其它化合物虽有部分降解但没有观察到细胞生长 .底物初始浓度的增加对菌Q1 0 有一定抑制作用 .喹啉的存在对其它化合物的降解具有不同的促进效应 ,其中尤以 6 甲基喹啉和 4 甲基喹啉最为明显 ,能在较短时间内得到完全去除 。

睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达

从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。

睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因插入失活突变体构建及降解特性分析

睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是革兰氏阴性菌,能够以各种类固醇化合物作为唯一碳源和能源,生物信息学分析发现睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因编码蛋白属于LuxR-type转录调控蛋白.利用同源重组原理构建teiR基因插入失活突变体C.mut,初步研究了teiR基因在类固醇代谢途径中的作用,以及对睾丸酮丛毛单胞菌关键降解酶3a-HSD/CR的表达影响.结果发现,teiR基因插入失活突变体C.mut在LB培养基中的生长速率不受影响,突变体C.mut抑制了teiR基因和关键降解酶3a-HSD/CR的表达,同时突变体C.mut丧失了以睾丸酮作为碳源进行生长的能力.结果表明teiR基因调节睾丸酮丛毛单胞菌类固醇代谢,同时teiR基因表达对3a-HSD/CR基因的表达是必需的.

睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达

目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。

3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究

从土壤中分离睾酮丛毛单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α HSD)基因。以质粒pET 1 5b为载体 ,构建 3α HSD的原核表达系统。经IPTG诱导后 ,得到了具有酶活性的融合蛋白 ,细菌总蛋白的表达量为 0 73g L ,其中融合酶蛋白占 1 6 4 % ,活性达 1 38× 1 0 5U L。利用融合蛋白N末端的His tag,经金属螯合亲和层析纯化后 ,得到了纯度较高的融合酶蛋白 ,酶蛋白的得率为 6 8% ,比活性为 1 94 7U mg。凝血酶切除His tag后 ,经质谱鉴定 ,重组蛋白的分子量为 2 6 5kD ,与理论推测值基本相同。 2 5℃以雄酮为底物 ,以NAD+ 和thio NAD+ 为辅因子时 ,融合蛋白参与酶促反应的最适pH分别为 1 0 5和 9 4。 37℃条件下酶促反应较快 ,2 5℃时的反应速度只有 37℃时的 5 2 % ,Q1 0 ( 2 5℃～ 35℃ ) 为 1 7。 2 5℃、pH1 0 5、以雄酮和各级胆汁酸为底物、NAD+ 为辅因子时 ,融合酶蛋白的动力学常数Km位于 4 2～ 5 1 1 μmol L范围内。融合酶蛋白发挥催化作用并不需要金属离子的参与 ,而Fe3+ 、Fe2 + 、Zn2 + 则抑制酶活性 ,反应体系中加入EDTA也并不影响酶的活性。活性和纯度均较高的融合蛋白 3α HSD的获得及其生物学性质的研究 。

睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因的克隆及对3α-HSD/CR表达的调节

采用分子克隆技术构建睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因表达载体,并通过与PAX1共转化来分析LysR基因对3α-HSD/CR在E.coliHB101的表达调节。结果表明:酶切和DNA测序显示,所构建的表达质粒pKtac1-LysR含有编码LysR的基因序列且稳定性较好;共转化结果显示,加入重组质粒pKtac1-LysR的3α-HSD/CR的表达量显著高于加入pKtac1的3α-HSD/CR的表达量(P<0.01)。

睾酮丛毛单胞菌JA1菌株羟基化烟酸产生6-羟基烟酸的发酵产酶条件研究

睾酮丛毛单胞菌Comamonas testosteroni JA1是一株具有氰基吡啶羟基化酶活性的菌株,研究表明它还具有很高的烟酸羟基化酶的活性,是未报道过的具有烟酸羟基化酶活性的新菌种。该菌最适生长和产酶的碳源为1%葡萄糖、氮源为1%蛋白胨、诱导物为1%烟酸,此外,它的发酵条件优越,在温度25~37℃、初始pH6.5~7.0、装液量(100mL锥形瓶)10mL^40mL范围内,产酶能力均保持很高水平,很具有工业化生产应用的前景。

间羟苯甲酸4－羟化酶纯化及部分性质研究

经超声破碎、硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤、磷酸钙胶层析和离子交换层析等步骤，从Ｃｏｍａｍｏｎａｓｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ菌株中获得了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单一条带，相对分子质量为６２×１０３的间羟苯甲酸４－羟化酶比活提高２１倍，产率为３０％此酶为ＦＡＤ加单氧酶，催化间羟苯甲酸转变为３。

土壤中异黄酮植物雌激素降解体系的研究

利用睾丸酮丛毛单胞菌(菌株C.test+act5)具有消化多环芳烃类化合物这一特性,以异黄酮植物雌激素为底物筛选菌株C.test+act5降解雌激素的培养条件,使异黄酮植物雌激素在土壤中的含量相对降低,以期为高效降解环境中激素类物质奠定基础。结果表明:菌株C.test+act5降解异黄酮植物雌激素的最适质量浓度为100～200μg/mL,最适温度为30℃,最适pH为6.0;在此条件下,降解48h时的降解率达85%左右,72h后几乎完全被降解。

乳宁外敷膏对家兔乳腺增生模型作用的实验研究

目的 观察乳宁外敷膏抑制和治疗乳腺增生病的效果。方法 选用健康雌性日本大耳白兔 30只 ,随机分成 6组 ,用己烯雌酚复制乳腺增生病模型。在制模过程中和制模成功后分别使用乳宁外敷膏和丙酸睾丸酮软膏外贴乳房部位 ,对照观察乳房外观形态、组织学形态和血浆中雌二醇的含量。结果 乳宁外敷膏能抑制兔乳腺增生 ,降低血浆中雌二醇含量。结论乳宁外敷膏对己烯雌酚所致的乳腺增生病有一定的治疗作用 ,可部分地使其恢复正常或减轻其增生程度 。

睾丸酮丛毛单胞菌降解喹啉的影响因素分析

喹啉是环境中一种重要的含氮杂环类污染化合物,对人体和动物有毒性.研究了不同的环境因素如pH值、温度、振荡速度、无机氮源、细菌量和初始浓度等对睾丸酮丛毛单胞菌降解喹啉的影响.实验结果表明,菌种Q10对喹啉具有较强的降解能力,在pH 4～10可完全降解喹啉,偏碱性效果更佳;最适降解温度为30℃;60r·min-1的振荡速度能够满足该菌降解喹啉的氧气需求;无机氮源对降解没有明显影响;加菌量和初始浓度对降解影响明显;底物初始浓度增加对菌Q10有一定的抑制作用.

3-甲基喹啉的微生物降解

从处理油制气废水的活性污泥中分离得到一株菌种Q10,经16SrDNA序列分析鉴定为睾丸酮丛毛单胞菌,该菌可以利用3-甲基喹啉作为唯一碳源和能源生长。着重研究了该菌在好氧条件下利用3-甲基喹啉作为唯一碳源和能源的降解特性,并初步分析了3-甲基喹啉的降解中间产物。实验结果表明:菌种Q10对3-甲基喹啉具有较高的降解性能,3-甲基喹啉降解的主要途径是首先生成单羟基化合物、多羟基化合物,然后主要在苯环上发生开环反应进一步降解。

睾丸酮丛毛单胞菌降解胆固醇的培养条件研究

利用睾丸酮丛毛单胞菌(菌株c.test+act5、菌株c.test+tac、菌株c.test)具有消化甾醇这一特性,以胆固醇为底物筛选其降解甾醇的培养条件,使胆固醇降解酶的活力相对提高,从而为高效降解甾醇类物质的工程菌的筛选奠定基础.研究结果:最佳诱导时间14 h,培养基最佳pH7.0、最佳诱导温度30℃、及最佳装液量50 ml(250 ml摇瓶).在此条件下胆固醇降解酶活力:菌株c.test+act5为3.82×10-3U.ml-1、菌株c.test+tac为3.51×10-3U.ml-1、菌株c.test为2.68×10-3U.ml-1.

TeiR融合蛋白分离及多克隆抗体的制备

提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)基因组DNA,PCR扩增teiR基因,将扩增产物克隆到pET28a中,经酶切验证后获得teiR基因表达载体pET28a-teiR.将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,添加终浓度为1 mmol.L-1的IPTG进行诱导,提取细菌总蛋白进行蛋白的SDS-PAGE电泳.并根据融合蛋白特性,利用Ni-NTA Spin Column对TeiR融合蛋白进行分离纯化,经分离纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出单一条带.进一步以获得的TeiR融合蛋白为抗原,制备兔抗TeiR多克隆抗体,经ELISA测定该抗体的效价为1∶10000,该抗体与睾丸酮丛毛单胞菌天然TeiR蛋白反应良好,说明该抗体特异性良好.

1例睾丸酮丛毛单胞菌足部感染病例报道

目的探讨1例足部组织伤口感染睾丸酮丛毛单胞菌的用药有效性。方法回顾性分析临床资料,并结合文献,临床药师协助医师选择安全、有效、经济的药物。结果临床药师根据病菌、药物特点及患者情况,实施用药指导,提高了患者用药的疗效。结论临床药师应善于总结和积累用药经验,为患者提供优质的药学服务。