A型产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因核苷酸序列与蛋白结构分析

为了对产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因进行分析,通过生物软件设计引物,扩增A型产气荚膜梭菌tetB(P)耐药基因,测序后对tetB(P)基因核苷酸序列与蛋白结构进行分析.结果表明:分离株tetB(P)基因长度为1 959bp,编码652个氨基酸.与参考菌株CW92、EHE-NE18的核苷酸序列同源性依次为99.7%、99.9%,氨基酸序列同源性依次为99.4%、99.8%.分离株tetB(P)蛋白亲水性氨基酸较多,无跨膜区,含有4个N-糖基化位点,1个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,9个蛋白激酶C磷酸化位点,12个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,7个N-豆寇酰化位点,1个ATP/GTP结合位点基序,1个翻译型鸟苷酸结合域,三级结构主要是由α-螺旋、β折叠和无规则卷曲形成.

A型产气荚膜梭菌四环素耐药基因的PCR检测

为了检测A型产气荚膜梭菌四环素耐药基因,试验采用Oligo 6.0软件设计tet A(P)、tet B(P)四环素耐药基因的特异性引物,片段大小分别为1 263 bp和1 959 bp,提取A型产气荚膜梭菌质粒DNA,配制PCR反应体系,设置PCR反应条件,用PCR扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳。结果表明:特异性引物能有效扩增A型产气荚膜梭菌tet A(P)和tet B(P)基因,目的基因大小与预期片段相符。