解脲支原体药敏与tetM基因检测及生物群的研究

目的 了解泌尿生殖道支原体的耐药性机理 ,指导临床治疗。方法 采用微量肉汤稀释法测定 2 81株UU对 5种抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC) ,用PCR法扩增tetM基因并酶切 ,用UUMB抗原基因引物对tetM基因阳性UU株进行生物群的研究。结果 2 81株UU中 82株对四环素MIC为 16～ 2 5 6μg/ml ,3 9株为 8μg/ml ,7株为 4μg/ml,15 3 株MIC <4μg/ml;12 1株MIC≥ 8μg/ml及 2株MIC =4μg/ml者均出现 3 77bptetM基因阳性带 ;阳性检测率为 43 .77%。15 8株UUMIC≤ 4μg/ml未见类似扩增带。扩增产物用HpaⅡ酶切和电泳分析 ,均产生 2 79bp和 98bp两个特异性片段。2 81株UU用群特异性PCR分析 ,生物群 1有 166株 ,生物群 2有 115株 ;12 3株tetM阳性UU株 ,属生物群 1、2者分别有 5 4株和 69株 ,分别占 3 2 .5 3 % ( 5 4/166)和 60 .0 % ( 69/115 ) ( χ2 =7.94,P <0 .0 5 )。结论 ①PCR技术检测泌尿生殖道感染患者UU耐药性tetM基因具有特异、敏感、快速等优点 ;②载有tetM基因的UU株可能成为四环素耐药株 ,应进行监测及随访 ;③我国衡阳地区UU四环素耐药株以生物群 2占优势。

猪源屎肠球菌tetM基因的检测

用微量肉汤倍比稀释法测定了猪源屎肠球菌对四环素等抗生素的敏感性,用PCR和DNA测序方法检测了屎肠球菌中四环素类耐药基因(tet基因),并分析了试验菌对四环素类的耐药机制。结果表明:14株猪源屎肠球菌对四环素、多西环素、环丙沙星、红霉素全部耐药,4株对头孢噻呋耐药;在14株屎肠球菌中,分别有13株和9株含tet L和tet M基因,其中有9株同时携带tet L和tet M基因;猪源屎肠球菌主要存在主动外排和核糖体保护两种耐药机制,其对四环素类的耐药性主要与携带tet M和tet L有关。

解脲支原体耐药性与tetM基因关系的研究

从流行病学角度进一步探讨解脲支原体耐药性与其ＴｅｔＭ基因之间的关系。方法对１７７株Ｕｕ临床菌株采用微量肉汤稀释法检测其对四环素和强力霉素的敏感性，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测其ｔｅｔＭ基因携带情况，并用Ｒ＊Ｃ表Ｘ＾２检验分析Ｕｕ对四环素族药物的耐药性与ｔｅｔＭ基因之间的关系。结果（１）Ｕｕ对四环素和强力霉素的耐药性与ｔｅｔＭ基因关系密切（Ｐ〈０．０５）；

解脲脲原体的tetM基因与四环素类药物MIC水平的关联性研究

目的探讨目前解脲脲原体对四环素类药物的耐药性及其与tetM耐药基因的关系。方法对分离自临床妇产科和性病门诊患者的解脲脲原体49株,经鉴定确认后,采用微量肉汤稀释法检测其四环素和米诺环素的最小抑菌浓度(MIC),根据药敏结果分层随机抽取部分菌株采用PCR技术扩增四环素耐药基因tetM。结果解脲脲原体的米诺环素和四环素MIC50(50%菌株被抑制所需抗生素浓度)分别为<0.0625 mg/L和<0.125 mg/L;MIC90(90%菌株被抑制所需抗生素浓度)分别为0.125 mg/L和1 mg/L;在28株非四环素耐药的解脲脲原体菌株中,有8株检测到tetM基因tetM基因阳性组的四环素和米诺环素的MIC水平比tetM阴性组高,且差异有统计学意义(四环素:t=4.34,P=0.0001;米诺环素:t=5.90,P<0.0001)。结论在泰安地区四环素类药物可以重新作为治疗解脲脲原体感染的一线药物,尤其是米诺环素的抗菌效果较好;在非四环素耐药的解脲脲原体菌株中也存在tetM基因的携带,且影响其MIC的提高。

皖北地区MRSA耐药基因研究

目的了解皖北地区临床分离的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)所携带5类药物的7种耐药基因状况,并探讨其耐药特性。方法应用PCR方法检测64株MRSA中mecA、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB、tetM耐药基因。结果 64株MRSA中,mecA基因携带率为100%,tetM、gyrA、qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率分别为95.3%、81.3%、34.4%、15.6%、39.1%、28.1%;基因组合以mecA+tetM+gyrA模式最多,为26.5%。MRSA对万古霉素无耐药,对氯霉素、磷霉素、利福平的耐药性较低,对多种药物表现出较高的耐药性。结论皖北地区MRSA中,mecA、tetM、gyrA基因携带率较高,而qacA/B/C、qacA、ermA/B/C、ermB基因携带率相对较低。

江门地区解脲脲原体和人型支原体对8种抗生素的敏感性测定及其与tet M基因检测的评价

目的 了解解脲脲原体 (Uu)和人型支原体 (Mh)对 8种抗生素敏感性 ,检测其tetM基因并进行比较 ,探讨其临床及实验意义。方法 以微量肉汤稀释法进行抗生素敏感性测定 ,以聚合酶链反应 (PCR)法检测tetM基因。结果 对Uu分离株 :四环素和强力霉素药物浓度 (MIC50 )分别为 0 5 μg/ml和 0 12 5 μg/ml,耐药率分别为2 7%、2 6 % ;交沙霉素效果最好 ,耐药率为 0。对Mh分离株 :四环素、强力霉素MIC50 分别为 1μg/ml和 0 0 6 μg/ml,耐药率分别为 4 0 %和 10 % ;交沙霉素效果最好 ,耐药率为 0。Uu、Mh分离株的tetM阳性检测率分别为 2 5 %和36 %。结论 Uu、Mh分离株对四环素、强力霉素的敏感性较差 ,对交沙霉素敏感性最好 ;载有tetM株可能成为耐药株。

儿童肺炎链球菌红霉素、四环素相关耐药基因的研究

目的：了解儿童肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）临床分离株红霉素、四环素耐药基因的流行状况及和耐药表型的关系。方法：对2005年1月-12月从温州附属育英儿童医院住院儿童分离到的47株肺炎链球菌进行了红霉素、四环素药敏试验,并用PCR法检测与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因（ermB）、主动外排转运基因（mefA）,与四环素耐药相关的tetM基因。结果：47株肺炎链球菌红霉素敏感3株、耐药44株;四环素敏感5株、耐药42株。3株红霉素敏感的肺炎链球菌均未检出ermB基因和mefA基因;44株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因和mefA基因的PCR检出率分别为81.8%和29.5%。共有39株肺炎链球菌检出ermB基因或/和mefA基因,其中单独携带ermB基因的耐药表型为29株,占74.4%;单独携带mefA基因的耐药表型2株,占5.1%;同时携带ermB基因和mefA基因的耐药表型8株,占20.5%。47株肺炎链球菌tetM基因的检出率为87.2%,其中四环素耐药组的检出率是95.2%,敏感组为25%。结论：ermB基因和mefA基因同时表达或单独表达均可导致红霉素耐药,ermB基因表达是儿童肺炎链球菌对红霉素耐药的主要原因,mefA基因表达是造成对红霉素耐药的次要原因。tetM基因是造成儿童肺炎链球菌四环素耐药的主要原因。红霉素和四环素已不是治疗肺炎链球菌的有效药物。肺炎链球菌四环素耐药尚存在其他的耐药机制。

人型支原体药物敏感性与耐药性基因检测研究

目的 了解人型支原体 (Mh)耐四环素株耐药性状 ,指导临床用药。方法 对临床感染标本中分离的 51株Mh分别进行了药物敏感试验和tetM基因检测。结果 51株Mh有 31株 (6 0 .78% )带有tetM基因 ,其中 2 5株 (四环素MIC≥ 32mg/L)对美满霉素 (XG16 .4 5mg/L)、环丙沙星 (XG8mg/L)、强力霉素 (XG5.58mg/L)和氧氟沙星 (XG4 .35mg/L)交叉耐药。51株Mh对罗红霉素与阿奇霉素呈高度抵抗 ,其MIC90 均为12 8mg/L ,但对交沙霉素敏感 (MIC90 0 .2 5mg/L)。结论 提示耐四环素的Mh株对美满霉素、环丙沙星、强力霉素和氧氟沙星呈现交叉耐药 。

解脲脲原体对四环素的耐药性分析及其耐药机制研究

目的了解解脲脲原体(Uu)对四环素的耐药性并分析其耐药机制。方法采用支原体培养、鉴定、药敏试验一体化试剂盒进行药敏试验;用PCR基因扩增方法对女性泌尿生殖道采集的200株Uu进行生物分群和耐药机制研究。结果 200株Uu中生物1群感染占70.0%(140/200),生物2群占22.0%(44/200)。生物1群对四环素的耐药率为18.6%(26株);生物2群对四环素的耐药率为20.5%(9株)。生物1群中耐四环素株的TetM基因阳性率88.5%(23/26);生物2群中9株耐四环素株中TetM基因阳性者8株。结论女性泌尿生殖道分离的Uu大多数为生物1群。四环素可以作为治疗Uu感染的一线药物,但耐四环素的Uu携带TetM基因的比例很高,TetM基因的检出率与生物种群无关,仍应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物以延缓耐药株的产生。

支原体四环素耐药与渔畜禽类养殖业中抗性基因TetM污染的关联性研究

目的:探讨支原体四环素耐药与养殖业抗性基因污染的相关性。方法:采集渔畜禽类养殖业周边环境部分标本、产品标本和临床分离出的四环素耐药支原体,检测各类标本中的Tet M基因进行比对。结果:支原体对四环素的耐药菌株和中介菌株中均有部分菌株检测到TetM基因存在,检出率分别为82.86%和49.28%;渔畜禽类养殖业环境标本共计60份,TetM基因检出率为95%;渔畜禽类产品食材标本Tet M基因共计检出率为80%。结论:本地区的支原体临床分离株四环素耐药基因Tet M检出率较高,养殖业抗生素的大量使用导致抗性基因对环境的污染情况非常严重,推断可能因为Tet M基因与可移动元件相结合,通过污染环境和食物链整合到人体菌群,包括感染的支原体,导致耐药的发生。

海南地区2011年四环素高度耐药淋球菌tetM基因分型

目的了解海南地区四环素高度耐药淋球菌(TRNG)的分子流行病学情况。方法采用琼脂稀释法检测TRNG菌株,PCR方法对TRNG菌株鉴定并进行tetM基因分型;纸片酸度法测定产β-内酰胺酶菌株(PPNG),PCR方法鉴定β-内酰胺酶质粒并行TEM-1基因分型。结果 2011年检测101株淋球菌,检出TRNG 54株(53.47%),其中22株(40.74%)对四环素和青霉素耐药;tetM基因分型结果显示52株为荷兰型,有2株为美国型。22株对四环素和青霉素耐药株的TEM-1基因分型21株为亚洲型,1株非洲型且合并美国型;未见多伦多型、里约型。结论海南地区TRNG流行株以荷兰型tetM基因为主(96.30%),美国型偶见。

南京地区1999-2004年四环素高度耐药淋球菌tetM基因分型及流行研究

目的 了解南京地区四环素高度耐药淋球菌（TRNG）tetM基因的分子流行病学情况。方法 采用琼脂稀释法检测菌株是否为TRNG，采用纸片酸度定量法测定菌株是否产β-内酰胺酶。采用单管PCR方法对TRNG阳性菌株作terM基因分型。结果 1999-2004年间南京地区804株淋球菌中共检出136株（16．92％）TRNG，β-内酰胺酶阳性的淋球菌（PPNG）为290株，所有TRNG中69．85％（95／136）为PPNG／TRNG，TRNG的阳性率逐年增高。tetM基因分型结果显示，荷兰变型为135株，美国变型仅1株。结论 南京地区流行的TRNG以荷兰型tetM基因为主（99．26％），美国型仅为偶发。

80株解脲脲原体的药敏及耐药机制分析

目的 分析解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticm ,Uu)的耐药情况,并探讨Uu可能的耐药机制。方法 对80株临床上分离到的Uu进行了药敏分析、PCR生物分群、tetM基因的检测和PCR扩增喹诺酮类药物耐药区(QRDR ,gyrA、gyrB、parC及parE)基因并分析其核苷酸序列。结果 80株临床分离的Uu有6 6份为生物1群,占82 .5 % ;对所测的9种药物全敏感的Uu比例仅为10 % (8 80 ) ;7株耐四环素Uu中有3株出现了tetM基因阳性条带;对6株临床分离Uu的QRDR(gyrA、gyrB、parC及parE)进行了突变分析,未发现环丙沙星、氧氟沙星均敏感Uu株有gyrA、gyrB、parC及parE突变,但耐喹诺酮Uu株有gyrA、parC和parE基因的点突变,并导致其编码的氨基酸改变。在这些QRDR的改变中,gyrA 137C→A和parC基因10 0C→T的误义突变导致其编码的相应氨基酸的改变,但parC基因的2 2 5G→A和parE基因4 0G→A ,4 1T→C的误义突变导致其编码的相应氨基酸的改变。对Uu耐药率及生物群分型结果进行分析发现,虽然两群Uu的耐药率不完全一样,但差异无统计学意义(P均>0 .0 5 )。结论 UuQRDR的改变是导致耐喹诺酮类药物的原因,单独parE基因突变引起其酶蛋白的氨基酸改变也可导致Uu耐喹诺酮类药物。

2011-2012年海南省淋球菌耐药性监测及基因分型

目的探讨海南淋球菌耐药状态及耐药基因分型情况。方法用琼脂稀释法测定4种抗生素的最低抑菌浓度（MIC），PCR方法鉴定四环素高度耐药菌株（TRNG）并进行TetM基因分型；用纸片酸度法测定B内酰胺酶（PPNG），PCR方法鉴定13内酰胺酶质粒并进行TEM-1基因分型。结果2011-2012年共检测214株淋球菌，环丙沙星中度敏感率7．94％（17／214），耐药率为92．06％（197／214）；头孢曲松敏感率24．30％（52／214），中度敏感率为75．70％（162／214）；未发现耐大观霉素的菌株。多重耐药情况：对四环素和青霉素耐药的菌株39株（18．22％），对青霉素和环丙沙星耐药菌株66株（30．84％），对四环素和环丙沙星耐药的菌株91株（42．52％），对四环素、青霉素和环丙沙星耐药的菌株37株（17．29％）。检出TRNG101株（47．20％），TetM基因分型结果99株（98．02％）荷兰型，2株（1．98％）美国型。检出PPNG65株（30．37％），TEM-1基因分型结果55株（84．62％）亚州型，10株（15．38％）非州型，未见多伦多型、里约型。结论海南省淋球菌对大观霉素敏感率高，应作为治疗淋病的首选药物；多重耐药菌株应引起重视。PPNG以亚州型为主，非州型次之；TRNG以荷兰型为主，偶见美国型。

女性患者解脲脲原体抗四环素耐药基因回复突变的研究

目的了解女性解脲脲原体的感染率,分析其中解脲脲原体对四环素耐药性的回复突变的情况及可能原因。方法对解脲脲原体临床株分离并进行药敏实验,统计感染率。使用试剂盒提取四环素敏感株的基因组DNA,并通过PCR和琼脂糖凝胶电泳检测tetM耐药基因片段,了解其中解脲脲原体临床株回复突变的现象;对携tetM耐药基因的四环素回复突变株tet(M)基因克隆并测序,使用Blast与Genbank标准序列(U08812.1)进行对比分析,探索回复突变的主要位点。结果解脲脲原体检出率为24.81%,其中对四环素的耐药率为9.23%,四环素敏感株中tetM耐药基因的携带率为42.37%(n=25),tetM基因全长及前导肽序列测序的三个样品与标准序列对比后,确认其在前导序列均存在不同程度的位点突变。结论解脲脲原体的四环素敏感株携带有tetM的耐药基因,该基因前导序列的突变可能是其四环素耐药回复突变的原因之一,探索耐药基因对临床抗生素使用具有一定指导意义。