智能手机辅助双探针比色法检测α-葡萄糖苷酶

该文以3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和罗丹明B为比色探针,建立了α-葡萄糖苷酶的比色检测方法,并在此基础上基于智能手机策略,通过RGB值对α-葡萄糖苷酶进行检测。结果表明,Fe^(3+)-TMB-罗丹明B显色体系的吸光度与α-葡萄糖苷浓度在20~100 U/L范围内呈线性关系,检出限为3.3 U/L。采用photo⁃shop软件分析样品图像和样品荧光图像的RGB值,其与α-葡萄糖苷酶浓度在10~100 U/L范围内呈线性关系,检出限分别为2.5 U/L和1.2 U/L。该法已成功用于α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖抑制率评估和胎牛血清中α-葡萄糖苷酶浓度的测定。所构建的智能手机辅助检测法为α-葡萄糖苷酶的临床分析和酶抑制剂的快速筛选提供了简便、快捷和准确的方法。

基于四甲基联苯胺和吖啶橙间荧光共振能量转移的比率型荧光测定左氧氟沙星

基于3,3’,5,5’(四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)和吖啶橙(AO)之间荧光共振能量转移(FRET),建立了一种快速、低背景干扰、高灵敏度测定盐酸左氧氟沙星(LVF)的新型比率型荧光探针。在pH 5.0 NaAc-HCl缓冲溶液中,在310 nm的光激发下,TMB在350~500 nm处的荧光光谱和AO的吸收光谱重叠。以TMB作为能量供体,AO作为能量受体,构建了FRET体系。根据能量转移理论,该体系的荧光共振能量转移效率为62.5%,供体-受体间距离为2.17 nm,进一步说明TMB和AO之间发生了FRET。当在体系中加入LVF后,TMB将荧光能量转移给LVF,LVF又作为供体将能量转移给AO。LVF在TMB和AO之间起到桥梁作用,LVF将吸收的TMB荧光能量转移给AO,使得TMB荧光强度明显降低,AO的荧光强度则显著增加,从而提高了体系的FRET效率。在最优实验条件下,F546 nm与F402 nm之比与LVF浓度(2~80μmol·L^(-1))之间存在良好的线性关系,线性回归方程为F_(546 nm)/F_(402 nm)=87.916c+3.108,线性相关系数为0.9993,检出限(LOD)为15.7 nmol·L^(-1)。一些常见的阳离子(K^(+),Mg^(2+),Ca^(2+),Cu^(2+),Mn^(2+),Zn^(2+),Co^(2+),Ni^(2+),Cr^(3+)等)、阴离子(F^(-),Br^(-),NO_(3)^(-),IO_(3)^(-),CO_(3)^(2-),SO_(4)^(2-)等)、糖类(葡萄糖,蔗糖和淀粉)、药物(谷胱甘肽,抗坏血酸和异烟肼)和几种氨基酸(甘氨酸,亮氨酸,半胱氨酸等)均不干扰LVF的测定,表明该比率型荧光探针对LVF具有高选择性。该方法用于商用药物制剂中LVF含量的测定,加标回收率在93%~97%之间。该比率型荧光探针在临床研究中对LVF的检测具有较大的应用潜力,为开发一种简便、选择性和灵敏的检测药物制剂中LVF含量的传感器提供了较好的理论依据,同时为提高LVF临床用药的安全性与合理性水平提供了一定的方法。

钨酸钠做为稳定剂的新的高灵敏HRP-TMB法——Ⅰ、光镜研究

本文通过试管实验和在尾核—黑质投射模型上的比较研究,首次提出了一种以钨酸钠作为稳定剂的新的TMB成色法(TMB-ST法)用于HRP神经束路追踪术。与现确灵敏度最高的Mesulam的TMB法相比,TMB-ST法具有灵敏度更高,产物稳定,耐酒精、耐pH小于6.3的环境,无针状结晶和点状结晶,标记结构形态细腻,组织切片不皱缩等优点。此外,本文还对稳定剂在HRP-TMB组化反应中的作用作了较全面的讨论。

金纳米星的制备及其对葡萄糖的表面增强拉曼光谱检测

采用种子生长法制备了金纳米星增强材料,用于对葡萄糖的表面增强拉曼光谱检测,通过透射电子显微镜等对制备的金纳米星进行结构分析和表征。所合成的增强材料直径约为82 nm,具有多分枝尖端的星状结构。探究了不同形貌的金纳米星增强效果,结果表明,所合成的金纳米星具有较强的表面增强拉曼效果,被应用于葡萄糖检测。在优化的检测条件下,该方法对葡萄糖检测的线性范围为1~120μmol/L,检出限为29 nmol/L,其实际样品加标回收率为97.5%~105.6%。该方法可用于复杂基质中葡萄糖的快速、灵敏检测。

钨酸钠作为稳定剂的新的高灵敏HRP-TMB法——Ⅱ、电镜研究

本文研究了各种不同锇化步骤对TMB-ST反应产物的影响。结果发现:TMB-ST法结合DAB-Co后处理步骤用于电镜束路追踪时,具有反应产物电子密度很高,呈特征性的细杆状,组织超微结构保存良好的特点,且灵敏度较高。而未后处理的TMB-ST产物锇化后大多数只具有中等电子密度。此外,通过对以硝普钠、钼酸铵、柠檬酸镍离子络合物、钨酸钠作为稳定剂的各种TMB法的比较,我们首次提出了稳定剂是影响TMB产物电子密度的最重要因素的观点。

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究

通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。

HRP—TMB反应中醋酸缓冲液的pH值与反应敏感性、组织超微结构保存的关系

为了探索HRP—TMB电镜技术中既能保持TMB反应敏感性高的优点又可较好地保存组织超微结构象,本文将WGA—HRP注入大白鼠红核及其周围,通过用不同pH值的醋缓配的反应液(pH3.3,4.0,4.2,4.4,4.6,4.8,5.2,5.6)后,在光镜及电镜下观察了下橄榄核区标记终末的密度及组织超微结构像。生现醋缓pH为4.0及3.3时,标记终末密度相似,或4.0时多于3.3,但4.0的组织像较3.3者有明显的改善。当pH值进一步提高时,尽管电镜下组织像逐渐改善,但标记的密度却逐步下降,至5.6时,几无阳性标记。另外,pH4.0的材料中,TMB反应产物变小,其跨膜现象也较3.3者少见。故作者认为,选用pH值为4.0的醋缓液较为合适。

猪肉中过氧化物酶活性的TMB法研究

以3，5，3’，5’-四甲基联苯胺（TMB）为底物对猪肉过氧化物酶（POD）的酶学特性以及猪肉不同部位过氧化物酶活性水平进行了较为系统的研究。并以辣根过氧化物酶（HRP）为标准酶获得了酶活性标准曲线。猪肉过氧化物酶在温度38℃，pH4．80时活性最高。酶浓度与酶反应初始阶段的酶活性有较好的线性关系，氢供体底物TMB的最佳浓度为2．80×10^-4mol／L，浓度过大则会抑制酶的活性，氢受体底物过氧化氢的浓度与酶活性有较好的线性关系和较宽的线性范围（0～4．20×10^-3mol／L）。猪肉不同部位如腰条（指外腰条）、里脊（指内腰条）、后腿、前腿、三层、腱子中POD活性大小不同，前三者的POD活性相近且活性较小，而后三者活性较为相近且活性较大。通过辣根过氧化物酶标准曲线可以求估待测样品中POD的活性值。

自来水中余氯测定之TMB配制探讨

对TMB的配制的介质浓度、配制方法及其助溶温度等诸因素进行了探讨 ,拟定了自来水中余氯测定的TMB溶液配制的具体方法、助溶温度和介质酸度等 ,解决了生活饮用水卫生规范中测定水中余氯用TMB显色无法与标准色阶进行比色的实际问题。

TMB对模拟氰化液中AU(Ⅰ)的静态吸附选择性的影响

测定了HW吸附树脂—TMB对模拟氰化液中Au(Ⅰ)的静态吸附选择性。结果表明Sn(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)及一些常见阴离子基本上不影响HW吸附树脂的吸附性能而Ag(Ⅰ),Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)及Ni(Ⅱ)则不同程度地影响HW吸附树脂—TMB的吸附性能,其选择系数有如下顺序:KAu(CN)_2^-·Ni(CN)_4^(2-)>>KAu(CN)_2^-·Zn(CN)_4^(2-)>KAu(CN)_2^-·Cu(CN)_4^(2-)>KAu(CN)_2^-·Ag(CN)_2^- 一般来说,TMB的加入量增大可以增加HW吸附树脂吸附Au(Ⅰ)的能力。

磷钨钒杂多酸-TMBPS电荷转移配合物光度法测定钒

提出了一种基于形成磷钨钒杂多酸 3,3′,5 ,5′ 四甲基联苯胺 -丙磺酸 (TMBPS)电荷转移配合物的分光光度法测定钒 (Ⅴ )的新方法 ,其最大吸收波长为 45 0nm ,摩尔吸光系数 2 74× 10 4 L·mol-1·cm-1,线性范围 0 0 2～ 1μg·mL-1。采用浮选反萃取分光光度法 ,可提高测定灵敏度 ,其表观摩尔吸光系数增至 3 10×10 5L·mol-1·cm-1。

改良TMB比色法替代^(51)Cr释放法检测抗体依赖细胞细胞毒效应研究

目的建立一种无致癌性、无放射性、灵敏的33,’,55,’-四甲基联苯胺(TMB)检测ADCC实验中靶红细胞自然释放的微量Hb含量的改进方法。方法利用Hb类似过氧化物酶效应催化双氧水氧化33,’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB),使其发生显色反应,改进吸光度在600 nm处的检测体系。采用Nycodenz密度渗透压介质分离单核细胞作为ADCC的效应细胞。比较2种情况的灵敏度,并与51Cr释放法进行方法学对照。在ADCC实验中,分别用51Cr释放法和改良TMB法测定Hb自然释放率。结果显色反应结束后加硫酸酸终止测定最大吸收波长移至450 nm,不加酸终止测定波长为600 nm。不加硫酸终止的TMB法检测Hb低检出限是0.0075 g/L,显色时间20min,TMB最优浓度是0.62 g/L,空白吸收始终稳定的维持在<0.003的较低值。而加酸终止的TMB法低检出限仅为0.5 g/L。显然不加酸终止的改良TMB法的灵敏度非常显著地高于加酸终止的TMB法。在测定ADCC靶红细胞自然释放率试验中,不加酸终止的改良TMB法仅需4 h孵育时间以及2.5×106 cell/ml红细胞浓度即可测定出释放Hb含量,而加酸后孵育时间要长达14 h并且需要更高浓度的红细胞才能测出自然释放Hb含量。用不加硫酸终止的TMB法检测ADCC活性与51Cr释放法相关性良好(r=0.999)。结论改良TMB比色法可以代替51Cr释放法检测ADCC的靶红细胞细胞毒效应。加酸终止、测定波长为450 nm的TMB比色法的灵敏度与51Cr释放法的灵敏度有显著差距,不适用低活性ADCC效应检测。

肿瘤突变负荷预测免疫检查点抑制剂对胃肠道恶性肿瘤患者疗效的Meta分析

目的系统评价肿瘤突变负荷(TMB)预测免疫检查点抑制剂(ICIs)对胃肠道恶性肿瘤患者疗效的价值。方法检索PubMed、WebofScience、CochraneLibrary三个数据库从建库至2021年12月1日的相关文献963篇,最终纳入12篇文献(包含1126例接受ICIs治疗的胃肠道恶性肿瘤患者)进行Meta分析。主要评价指标包括客观缓解率(ORR)、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。结果在接受ICIs治疗的患者中,与低TMB者相比,高TMB者有更长的OS[HR(95%CI)=0.71(0.51~0.97),P=0.031],更高的ORR[OR(95%CI)=4.22(2.58~6.90),P<0.001],但两者PFS无显著差异[HR(95%CI)=0.77(0.48~1.23),P=0.276]。结论高TMB胃肠道恶性肿瘤患者更有机会从ICIs治疗中获益。

TMB余氯快速测试盒的实验研制

目的研制TMB余氯快速测试盒,满足现场测定生活饮用水的出厂水、末梢水、二次供水及公共场所游泳池水中余氯质量浓度的需要。方法利用余氯与TMB在酸性溶液中生成黄色醌式化合物测定水中余氯含量。①显色体系pH值的确定及总余氯读数时间的确定;②测试盒标准比色系列浓度的确定;③比色用玻璃的选择。结果①整个体系的pH值调节在1.52,在此pH值条件下可以避免体系颜色发生变化。总余氯的读数时间设定在11 min;②测试盒标准比色系列浓度为0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.8和1.0mg/L;③根据抗暴及透光性,选择用高硼玻璃来制作标准系列管及样品比色管。结论 TMB余氯快速测试盒可满足上述水中余氯质量浓度测定的需要。

TMB-8对牛基底动脉平滑肌细胞增殖的作用

采用培养乳牛基底动脉平滑肌细胞（ＢＡＳＭＣ），观察了去甲肾上腺素（ＮＥ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对细胞增殖的影响，以及８－（Ｎ，Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３，４，５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）的作用，发现ＮＥ和ＡｎｇⅡ能明显引起ＢＡＳＭＣ增殖。１０μｍｏｌ／ＬＮＥ和１μｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ可诱导最大增殖，增殖率分别为７７．８％和９７．９％，ＴＭＢ－８能浓度依赖性地抑制其作用，３０μｍｏｌ／ＬＴＭＢ－８的抑制率分别为４０．０％和５２．２％。

市售单组分TMB显色液质量比较

目的比较市售单组分TMB显色液的质量。方法选购4种国内外代表性产品,从外观、灵敏度、稳定性等几个方面进行对比。结果两种进口试剂的灵敏度高于两种国产试剂,但本底高于国产试剂。37℃5d加速稳定试验发现,进口试剂和国产试剂均保持稳定,但进口试剂本底显著升高。结论市售单组分TMB显色液质量参差不齐,价格相差甚远。

TMB氧化荧光法测定痕量Cr(Ⅵ)

在酸性介质中,TMB(3.3,5,5-四甲基联苯胺)在Cr(Ⅵ)的强氧化作用下(两个CN被氧化成C—N,生成H2O)形成蓝色的TMBox,当λex=283 nm在λem=402 nm的位置产生的荧光峰,随着Cr(Ⅵ)浓度的增加,生成的蓝色产物越多,荧光信号逐渐上升,在一定范围内呈现良好的线性关系,采用此反应建立了一种可靠,灵敏的荧光测定Cr(Ⅵ)痕量新方法。

TMB为ELISA底物检测血吸虫病的研究

ＴＭＢ为ＥＬＩＳＡ底物检测血吸虫病的研究戴晓斌张世雯吴子松黄启华四川省寄生虫病防治研究所在诊断血吸虫病中，我们参照张素娥报道的ＥＬＩＳＡ〔１〕，将底物改为３，３，５，５－四甲基联苯胺（ＴＭＢ），用于血吸虫病抗体检测，结果满意，现报道如下。１材料１．１...