一株产低温右旋糖苷酶海洋细菌的筛选和鉴定

从连云港海域筛选得到一株产低温右旋糖苷酶的菌株LP621,经形态特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析和鉴定,该菌株为Pseudoalteromonas tetraodonis。该菌产生低温右旋糖苷酶的最适作用温度为30℃,在80℃保温2.5 h后该酶仍具有40%以上的活性。目前尚无Pseudoalteromonas tetraodonis产生低温右旋糖苷酶的报道。菌株LP621产生的右旋糖苷酶作用温度低,耐热性好,有较大的潜在工业应用价值。

北极海洋细菌BSw20353的胞外蛋白酶性质

从北极楚科奇海水中分离到一株产蛋白酶耐冷河豚毒素假交替单胞菌BSw20353。该菌可合成多种胞外蛋白酶,而培养温度影响蛋白酶的合成。分离纯化出其中一种在15℃、25℃培养时均有生成的酶:该酶最适作用温度55℃;最适pH8;金属离子Hg2+、Sr2+抑制酶活,Fe2+、Mn2+则具有激活作用;该酶属于金属蛋白酶,受螯合剂邻二氮杂菲、EDTA及EGTA抑制,基本不受丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF、TPCK及TLCK抑制,半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64对该酶无抑制作用,天冬氨酸蛋白酶抑制剂pepstatin则具有一定抑制作用;SDS、二硫苏糖醇、碘乙酸可抑制酶活;而在变性剂尿素、盐酸胍作用下,酶活反而有所增高。

1株产褐藻胶裂解酶海洋细菌的分离鉴定及其酶学性质

利用以褐藻胶为唯一碳源的培养基分离纯化产褐藻胶裂解酶的海洋细菌,通过形态特征、生理生化和16SrRNA基因鉴定菌株,用紫外法分析纯化酶液的pH、温度作用范围及稳定性等酶学性质.结果表明:从青岛近海分离到1株产褐藻胶裂解酶的菌株QZ-4,革兰阴性杆菌,适宜生长温度和NaCl质量浓度范围分别为15～25℃和15～60g/L;16SrRNA基因序列分析显示,该菌与交替假单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)相似性为97%,GenBank登录号为HM130919;该酶具有同时降解高古罗糖醛酸聚合物和高甘露糖醛酸聚合物的能力,其最适作用pH和温度分别为7.5和40℃,Mg2+、Na+、Fe3+、Mn2+等对酶活力有促进作用,Zn2+有抑制作用,1.0mol/L乙二胺四乙酸可完全抑制其活性;由Lineweaver-Burk(L-B)作图法求得该酶的最大反应速度(Vmax)为0.541U/mL,米氏常数(Km)为0.051mg/mL.

条斑紫菜丝状体黄斑病病原体分离鉴定及生物学特性研究

从连云港地区紫菜育苗场采集患黄斑病的紫菜贝壳丝状体样品,利用2216E培养基进行筛选得到两株优势海洋性细菌,命名为HYWX-1与HYWX-2。对该两株菌进行生物学特性及生理生化鉴定,结果显示:两株菌均属革兰氏阴性杆状细菌;两株菌的生长最适生长温度28℃;最适生长pH为7.5至8.2间;两株菌接触酶、氧化酶试验均阳性。进一步对其进行分子生物学鉴定,PCR扩增其16S rRNA,测序,并与GenBank上已知序列进行比对,根据16S rRNA同源性和系统进化树分析,鉴定该两株菌为同一种菌,均为河豚毒素交替假单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)。回复感染的结果表明:两株菌均能引起条斑紫菜丝状体黄斑病病害症状。