宫颈癌组织中TSPAN-1与Ki-67蛋白的表达

目的:探讨肿瘤相关蛋白TSPAN-1与Ki-67在宫颈癌组织中表达及其关联性。方法:应用免疫组织化学SP法检测正常宫颈、宫颈癌及宫颈内瘤样病变(CIN)组织(各30例)中TSPAN-1及Ki-67蛋白的表达。结果:正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中TSPAN-1和Ki-67的阳性表达率分别为0(0/30)、36.7%(11/30)、73.3%(22/30)和13.3%(4/30)、53.3%(16/30)、80.0%(24/30),差异有统计学意义(χ2=34.737和27.036,P均<0.001),宫颈癌和CIN组织高于正常宫颈组织。宫颈癌组织中TSPAN-1表达与淋巴结转移有关(P=0.014)。宫颈癌组织中TS-PAN-1与Ki-67表达有关联性(χ2=8.960,rP=0.539,P<0.001)。结论:TSPAN-1过表达与细胞增殖有关,参与宫颈癌的发生发展。

肿瘤增殖相关分子(TSPAN-1)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的通过检测肿瘤增殖相关分子(TSPAN-1)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在正常宫颈(NCE)组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈鳞癌(SCC)组织中的表达情况,探讨两者在宫颈鳞癌发生、发展中的作用及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测15例NCE组织,30例高级别CIN组织及45例SCC组织中TSPAN-1和VEGF-C的表达情况,分析两者的表达与宫颈癌患者各临床因素的关系。结果 TSPAN-1和VEGF-C在正常宫颈组织中均不表达;在CINI I+CINI I级、宫颈鳞状细胞癌组织中两者的表达明显升高。TSPAN-1在宫颈鳞癌的阳性表达率与患者年龄、FIGO分期、组织分化程度无关,与淋巴结转移和宫颈浸润深度有关(P<0.05)。VEGF-C在宫颈鳞癌组中的阳性表达率与患者年龄、FIGO分期无关,而与宫颈浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。宫颈鳞癌组织中TSPAN-1和VEGF-C的表达呈正相关(r=0.851,P<0.05)。结论 TSPAN-1和VEGF-C在正常宫颈组织的表达均明显低于宫颈上皮内瘤变组、宫颈鳞癌组中的表达。在宫颈鳞癌组中TSPAN-1的阳性表达率与年龄、FIGO分期、组织分化程度无关,而与间质浸润深度及淋巴结转移相关。VEGF-C在宫颈鳞癌组中的阳性表达率与年龄、FIGO分期无关,而与浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移密切相关。TSPAN-1及VEGF-C在宫颈鳞癌中的表达呈正相关,说明两者可能与宫颈鳞癌的发生、发展相关。

Tspan1通过诱导细胞自噬拮抗奥沙利铂诱导的结直肠癌细胞凋亡

目的探讨四次跨膜蛋白1(Tspan1)过表达对奥沙利铂(OXA)诱导的人结直肠癌细胞系HCT116细胞凋亡的影响并分析其可能作用机制。方法将Tspan1过表达质粒及其阴性对照空载质粒分别转染至HCT116细胞中,qRT-PCR和Western blot法检测胞中Tspan1 mRNA及其蛋白表达水平。采用14.15μg/mL OXA或联合5 mmol/L自噬抑制剂3-MA干预转染后HCT116细胞,MTT检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;免疫荧光检测细胞中LC-3B蛋白表达情况;Western blot法检测细胞中自噬相关蛋白LC-3、Beclin1和p62蛋白表达水平。结果Tspan1过表达可显著上调HCT116细胞中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平,降低HCT116细胞对OXA的敏感性,抑制OXA诱导的HCT116细胞凋亡,并增强细胞中LC3B蛋白荧光强度,上调细胞中LC-3II/LC-3I比值及Beclin1蛋白表达水平,下调p62蛋白表达水平。然而,联合3-MA处理可逆转Tspan1过表达对OXA诱导HCT116细胞凋亡的抑制作用,提高细胞对OXA的敏感性。结论Tspan1过表达可拮抗OXA诱导的HCT116细胞凋亡,其机制可能是通过诱导细胞自噬来实现的。

沉默Tspan1基因表达通过抑制细胞自噬逆转结直肠癌细胞对奥沙利铂的耐药性

目的:探讨沉默四次跨膜蛋白1(Tspan1)基因表达对结直肠癌(CRC)细胞奥沙利铂(OXA)耐药的影响及作用机制。方法:收集31例OXA化疗敏感(OXA敏感组)和26例OXA化疗耐药(OXA耐药组)的CRC患者肿瘤组织,RT-qPCR和Western blot检测肿瘤组织中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平。采用OXA浓度递增刺激法建立OXA耐药细胞株HCT116/OXA,MTT法检测耐药细胞株增殖活性,计算半数抑制浓度(IC_(50))和耐药指数(RI);RTqPCR和Western blot检测耐药细胞株及其亲本细胞中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平。通过siRNA技术沉默HCT116/OXA细胞中Tspan1基因表达,RT-qPCR和Western blot检测转染后耐药细胞株中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平。采用不同浓度OXA干预转染后的耐药细胞株,MTT法检测细胞增殖活性并计算IC_(50)值,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光实验检测自噬指标蛋白LC3B表达情况;Western blot检测细胞中LC3、beclin-1、P62等自噬蛋白的表达水平。结果:与OXA敏感组比较,OXA耐药组患者肿瘤组织中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。不同浓度OXA处理48 h后,耐药细胞株HCT116/OXA及其亲本HCT116细胞的IC_(50)值分别为(101.6±2.7)和(16.0±0.5)mg/L,RI值为6.4。耐药细胞株HCT116/OXA中Tspan1表达水平较其亲本HCT116细胞显著升高(P<0.01)。Tspan1基因沉默可显著降低HCT116/OXA细胞中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平及其对OXA的耐药性(P<0.05),提高OXA暴露下HCT116/OXA细胞的凋亡率(P<0.05),降低细胞中LC3B蛋白荧光强度及细胞中LC3-II/LC3-I蛋白比值和beclin-1蛋白表达水平(P<0.05),增加P62蛋白的表达(P<0.05)。结论:沉默Tspan1基因表达可通过抑制细胞自噬逆转结直肠癌细胞OXA耐药。

四次跨膜蛋白1在乳腺癌中的表达及其促进乳腺癌进展的作用机制

目的·探究四次跨膜蛋白1 (tetraspanin 1,TSPAN1)在乳腺癌中的表达,及其对乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法·使用免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC)检测106例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织中TSPAN1的表达,并分析其与患者临床特征的相关性。利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析TSPAN1 mRNA在乳腺癌及癌旁组织中的表达,及其与患者临床特征的相关性。在乳腺癌细胞MDA-MB-231、SUM159PT中下调TSPAN1后,通过细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TSPAN1对上述细胞迁移、侵袭的影响,并采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白)的表达。结果·IHC的结果显示,TSPAN1在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.000),且其表达水平与肿瘤的总TNM分期、M分期、N分期和病理学分级显著相关(均P<0.05)。对来自TCGA数据库的转录组测序数据分析的结果显示,TSPAN1 mRNA在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.000),其在TNMⅢ~Ⅳ期的乳腺癌组织中的表达高于TNMⅠ~Ⅱ期(P=0.007)。与转染Control siRNA相比,转染TSPAN1 siRNA的MDA-MB-231和SUM159PT细胞的迁移、侵袭能力均有所下降,E-钙黏蛋白的表达增加、N-钙黏蛋白及波形蛋白的表达减少(均P<0.05)。结论·TSPAN1在乳腺癌组织中表达较高,可促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

四跨膜蛋白在肝癌中的作用

四跨膜蛋白是一组具有四个高度疏水的跨膜结构域的低分子量细胞膜表面蛋白,可广泛参与细胞生长、粘附、迁移等多种生命活动。四跨膜蛋白超家族(TM4SF)可与包括四跨膜蛋白、整合素、生长因子及其受体、HLA家族、主要组织相容复合物(MHC)等在内的多种细胞表面分子相连接,形成以TM4SF为核心的四跨膜蛋白网络。四跨膜蛋白网络可通过直接或间接作用于细胞信号通道从而影响肿瘤细胞的粘附、分化、迁移及侵袭。目前研究表明四跨膜蛋白CD151、CD82、Tspan8及Tspan1与肝癌密切相关,可参与调控肝癌细胞的粘附、增殖、分化、迁移及侵袭等过程来影响肝癌的发生发展。KAI1/CD82为肝癌的抑制基因,上调其表达可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭;CD151在肝癌组织中大量表达,提示CD151或联合CD151/c-Met是可能预测肝癌的进展新指标,并且CD151可能用于肝癌的靶向治疗;而Tspan8(CO-029)及Tspan1(NET-1)则可用于预测肝癌的进展及预后。

Tspan 1及Integrin α6在人胰腺导管腺癌中的表达及其与临床特征的关系

目的 探讨Tspan 1及Integrinα6在胰腺导管腺癌（PDAC）及胰腺癌细胞中的表达与临床病理学参数的关系.方法 收集2004年5月至2013年1月收治的95例PDAC患者的组织石蜡切片及55例癌旁正常组织石蜡切片进行免疫组化检测.以Western blot法和实时定量（qRT）-PCR法检测16对配对冷冻保存的新鲜PDAC、癌旁组织及6株胰腺癌细胞中Tspan 1及Integrin α6蛋白和mRNA表达水平.分别采用x2检验、Spearman-rank相关分析、Kaplan-Meier法、多因素回归分析等对数据进行统计分析.结果 Tspan 1及Integrinα6在PDAC细胞膜表达高于癌旁胰腺组织（x2=7.429,P＜0.05;x2=15.100,p＜0.01）;Tspan 1表达与淋巴结转移、TNM分期及复发率呈正相关（x2=6.688,P＜0.01;x2=13.055,P＜0.01;x2 =6.116,P＜0.05）.Integrin α6表达与TNM分期呈正相关（x2=8.896,P＜0.05）;Tspan 1及Integrin α6的相关性有统计学意义（r=0.223,P＜0.05）;Tspan 1及Integrin α6高表达与生存期呈负相关（x2=5.263,P＜0.05;x2=10.124,P＜0.01）;多因素分析结果显示,Tspan 1及Integrinα6表达水平可以作为PDAC预后的独立预测因素（x2=6.152,P＜0.05;x2=9.479,P＜0.01）.16例胰腺癌组织中Tspan 1及Integrin α6的蛋白（t=2.278,P＜0.05;t=3.153,P＜0.05）和mRNA（t=2.439,P＜0.05;t=3.258,P＜0.05）表达均高于配对的癌旁正常组织;6株细胞株中Tspan 1及Integrin α6在蛋白水平及mRNA水平均有表达,来自转移灶的人胰腺腺癌细胞株SW1990中Tspan 1及Integrin α6在蛋白及mRNA水平表达高于来自原发灶的细胞株（P＜0.05）.结论 Tspan 1及Integrinα6表达对于PDAC的转移及浸润有促进作用,可能可以作为判断PDAC预后的独立因素.

1型糖尿病四跨膜蛋白7自身抗体检测技术的建立与应用

目的建立四跨膜蛋白7自身抗体(TSPAN7A)的荧光素酶免疫共沉淀检测技术(LIPS),并评估TSPAN7A在中国1型糖尿病(T1D)人群中的应用价值。方法将插入人全长四跨膜蛋白7 cDNA的海肾荧光素酶重组质粒转染293T细胞,获得含四跨膜蛋白7与海肾荧光素酶融合蛋白的细胞裂解液。待测血清与该细胞裂解液孵育过夜后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物,洗涤,加入海肾荧光素酶底物并检测荧光读数,以199名健康对照的第99百分位数作为阳性阈值。采用LIPS法检测2014至2017年中南大学湘雅二医院代谢内分泌科就诊的100例T1D患者[男64例,女36例,年龄(28±16)岁]、119例2型糖尿病(T2D)患者[男78例,女41例,年龄(47±12)岁]以及98名健康对照[男55名,女43名,年龄(28±12)岁]血清中TSPAN7A水平。同时采用放射配体法(RLA)检测谷氨酸脱羧酶自身抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2A)、锌转运体8自身抗体(ZnT8A)水平,初步评估TSPAN7A的临床应用价值。结果100例T1D患者中GADA、IA-2A、ZnT8A、TSPAN7A的阳性率分别为72.0%、40.0%、29.0%、25.0%,经Bonferroni法校正后,TSPAN7A阳性率低于GADA(P<0.001),而与IA-2A(P=0.035)和ZnT8A比较差异无统计学意义(P=0.630)。T1D患者TSPAN7A阳性率高于T2D的0.84%(1/119;25.0%比0.84%,P<0.001)和健康对照的1.02%(1/98;25.0%比1.02%,P<0.001)。在其他抗体基础上联合检测TSPAN7A可使T1D抗体阳性检出率由82.0%提高至85.0%。TSPAN7A阳性T1D患者与其他3种胰岛自身抗体阳性者临床特征差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论本研究成功建立了TSPAN7A的荧光素酶免疫共沉淀检测技术,TSPAN7A是中国T1D人群的一种新型胰岛抗体。