不同菱角壳提取物抑制肺癌A549细胞生长的研究

目的研究不同菱壳水和乙醇提取物的抗癌活性。方法采用Folin比色法测定不同品种菱壳提取物中多酚的含量,通过MTT法测定二角菱壳、四角菱壳的水提取物、醇提取物对肺癌A549细胞生长抑制作用。结果四角菱壳多酚含量高于二角菱壳,醇提物多酚含量高于水提物;二角菱壳醇提取物对肺癌A549细胞的抑制率高于水提物,差异具有统计学意义(P<0.01);四角菱壳水提物对抑制率高于二角菱壳水提物肺癌A549细胞的生长,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论菱角壳提取物对肺癌A549细胞生长具有较强的抑制作用,且菱角壳的醇提取物优于水提取物,四菱角壳优于二角菱壳。

运用MTT比色法检测印楝素对果蝇S2细胞的毒力作用

采用MTT(四甲基偶氮唑蓝,methylthiazolyl-tetrazolium)法测定不同质量浓度印楝素(0.01,0.1,0.5,1.0,2.0 mg.L-1)作用不同时间(24,48,72,96 h)对果蝇S2细胞的抑制率.结果表明,印楝素低质量浓度处理时,对果蝇S2细胞有促进生长的作用,表现为低质量浓度促进效应;在质量浓度为0.1～2 mg.L-1处理剂量范围内,表现为明显的时间依赖性,随时间延长,抑制率增加.0.5 mg.L-1处理48 h抑制率达54%,为最佳作用条件.

噻唑蓝比色法检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌的研究

目的探讨噻唑蓝(MTT)法用于口腔常见细菌(变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌)活菌计数的可行性及具体应用过程中的实验条件。方法本实验以菌落形成单位(CFU)法为标准对照。实验通过改变比色的波长、反应时间、试剂剂量、细菌菌龄等实验条件,获得MTT法测量常见口腔细菌的一系列参数,对变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌进行活菌计数,并与CFU法所测的细菌数量相比较。结果 MTT法在测量变异链球菌时,最佳的检测波长为510nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～1.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量血链球菌时,最佳的检测波长为545nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～2.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量伴放线菌嗜血菌时,最佳的检测波长为557nm,最佳的测定细菌范围是1.0×106～5.0×107CFU·mL-1。MTT法与菌落形成单位法的测量结果是一致的,并且对于不同菌龄的变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌均适用。结论 MTT法可以用于检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌等口腔常见细菌的活菌数量,并且具有快速、方便等优点。

不同材料硬性透氧性角膜接触镜表面细菌黏附能力的对比研究

背景角膜接触镜的佩戴可能会增加角膜感染的机会，一些研究认为角膜接触镜材料的透氧性与角膜感染的发生有关。目的比较用于制作硬性透氧性角膜接触镜（RGP—CL）的材料，如氟硅丙烯酸酯A（XO）、氟硅丙烯酸酯B（EO）和聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）表面对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌的黏附情况。方法分别将3种RGP—CL镜片材料置于3种细菌悬液中培养24h，采用MTT比色法、旋涡震荡菌落计数法和扫描电子显微镜观察并比较3种材料表面黏附细菌的能力。结果MTT比色法结果显示，XO制镜材料对金黄色葡萄球菌的黏附能力（A值）明显低于EO材料和PMMA材料，差异均有统计学意义（q=7．379、8．207，P〈0．01），但EO材料与PMMA材料对金黄色葡萄球菌黏附能力的比较差异无统计学意义（q=0．828，P〉0．05）；XO材料及EO材料表面表皮葡萄球菌的黏附能力低于PMMA材料，差异均有统计学意义（q=14．000、12．800，P〈0．01），而XO材料与EO材料间表皮葡萄球菌黏附能力的比较差异无统计学意义（q=1．200，P〉0．05）；3种材料对铜绿假单胞杆菌的黏附能力（A值）差异无统计学意义（F=2．155，P=0．138）。旋涡震荡菌落计数法结果显示，XO、EO、PMMA材料表面金黄色葡萄球菌的黏附数量分别为（37．9±1．5）x10^6、（49．9±2．2）x10^6、（67．4±1．6）×10^6个，差异有统计学意义（F=206．240，P=0．000），EO材料、PMMA材料表面金黄色葡萄球菌菌落计数明显高于XO材料，差异均有统计学意义（P〈0．01）。XO、EO、PMMA材料表面表皮葡萄球菌的黏附数量分别为（7．94-1．3）×10。、（10．5±1．5）×10。、（11．2±1．2）×10。个，XO材料表面表皮葡萄球菌的黏附数量明显低于PMMA材料，差异有统计学意义（q=5．060，P〈0．05），XO材料与EO材料、EO材料与PMMA材料之间表皮葡萄球菌黏附数量的差异均无统计学意义（q=3．290、1．770，P〉0．05）。3种材料表面铜绿假单胞杆菌的黏附数量差异无统计学意义（F=0．232，P=0．799）。扫描电子显微镜观察显示，XO材料和EO材料表面金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的黏附呈散在性分布，而PMMA材料表面这两种细菌黏附形成“网状”外观，3种镜片材料表面铜绿假单胞杆菌形态无明显差别。结论PMMA材料表面细菌的黏附能力强于XO材料和EO材料，RGP—CL的透氧性对镜片表面细菌黏附的能力无明显影响。

测定种子生活力方法的比较与改进

用氯化三苯基四氮唑(TTC)法、红墨水法和溴麝香草酚蓝(BTB)法测定种子生活力,对实验选用的种子、浸泡时间、TTC的药液配置浓度、红墨水染色法染色时间、BTB法加入琼脂浓度及琼脂凝胶层厚度作了改进。结果表明:缩短了3种方法测定种子生活力的时间,且效果更好,测定的准确率更高;TTC染色法红色更深,红墨水染色法种胚与胚乳更易分辨。

腰果种子发芽率的快速测定方法

比较了4种快速测定腰果(AnacardiumoccidentaleL.)种子发芽率方法的准确性。结果表明:对不同贮藏时间的腰果种子,TTC染色法的测定结果准确可靠,检出率与发芽率相同,是快速测定腰果新鲜度的有效方法;外观和品尝法的鉴定结果准确度低,误差较大;电导率的测定需时短,简捷快速,准确性受标准参照物的影响;红墨水染色法虽不需设备和特殊药品,但结果与发芽率相比较,有一定差异。

猫儿眼植物酸抗肿瘤作用的实验研究

采用气-质联用仪、流式细胞仪、MTT法和台盼蓝法对猫儿眼植物酸组分及其抗肿瘤活性进行实验研究.结果为,分别给予SGC-7901细胞猫儿眼植物酸10.0μg/mL、1.0μg/mL和0.1μg/mL48h后测定,对肿瘤细胞的抑制率分别为73.5%、52.9%和26.5%,半数抑制浓度(IC50)为0.909μg/mL;对细胞增殖抑制率分别为70.8%、58.7%和30.9%,IC50为0.552μg/mL;凋亡率分别为26.8%、22.6%和12.4%.

BALB/c鼠脾脏T淋巴细胞体外转化试验条件的优化研究

为了探索BALB/c鼠脾脏T淋巴细胞转化试验的最佳培养条件,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法,对脾细胞浓度和刀豆蛋白A(ConA)的浓度两个参数进行研究。结果表明,在本次实验条件下,采用5×105个/ml细胞、2.5μg/ml的ConA可获得最大的吸光度(A)值,两个因素间存在明显的交互效应。

电针及生物活性物质对大鼠多形核细胞杀菌功能的影响

用改良的四氮唑硝基蓝（ＮＢＴ）还原法观察了电针以及生物活性物质（ＢＡＳ）包括５－羟色胺（５－ＨＴ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）、生长抑素（ＳＯＭ）和Ｐ物质（ＳＰ）对大鼠多形核白细胞（ＰＭＮ）杀菌功能的影响。结果表明：电针及ＢＡＳ均能增强大鼠ＰＭＮ的杀菌功能（Ｐ＜０．０１）；ＢＡＳ对大鼠ＰＭＮ的杀菌功能具有双向调节效应。纳洛酮可阻抑电针对ＰＭＮ杀菌功能的提高（Ｐ＞０．０５）；可被ＢＡＳ所翻转。电针的镇痛效应和ＮＢＴ阳性细胞提高效应之间存在着明显的正相关（Ｐ＜０．０１）。

和胃降逆胶囊通过PI3K/AKT信号通路调控人胃癌AGS细胞增殖与凋亡机制研究

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。

甘肃猫儿眼提取物对人LGC-7910细胞毒性作用及机制

给予人LGC-7910细胞甘肃猫儿眼提取物体外培养,采用流式细胞仪、MTT法对甘肃猫儿眼提取物细胞毒性活性进行了检测.结果为,分别给予LGC-7910细胞甘肃猫儿眼提取物10.0、1.0和0.1μg/mL 48 h后测定,对细胞增殖的抑制率分别为82.4%、54.9%和33%,半数抑制浓度(IC50)为0.53μg/mL;凋亡率分别为32.1%、25.6%和16.3%.

消痰散结方对体外肿瘤诱导的血管内皮细胞生长的影响

目的:研究消痰散结方对体外肿瘤细胞诱导的血管内皮细胞生长的影响。方法:将不同浓度消痰散结方与胃癌 MKN-45细胞和体外培养的人脐静脉内皮细胞共同作用,用甲基噻唑基四唑(MTT)法测定人脐静脉内皮细胞数。结果:消痰散结方50μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml 能明显抑制胃癌 MKN-45细胞诱导的血管内皮细胞生长,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);而消痰散结方对血管内皮细胞生长无显著影响。结论:消痰散结方能抑制胃癌 MKN-45细胞诱导的血管内皮细胞生长。

凋亡相关蛋白BCL-2与白血病化疗药物敏感性的研究

目的 :研究急性白血病 (AL)细胞BCL 2表达及其与体外化疗药物敏感性的关系。方法 :采用Westernblotting技术和四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 ) ,分别检测HL 60、U93 7细胞株和 6例急性髓性细胞白血病 (AML)细胞BCL 2表达水平及体外对柔红霉素 (DNR)的敏感性。结果 :( 1)BCL 2表达水平HL 60细胞高于U93 7细胞 ,而 6例AML细胞BCL 2表达水平不同 ;( 2 )MTT检测结果显示 ,DNR对HL 60抑制率低于U93 7;BCL 2高表达的AML细胞 ,DNR抑制率低。结论 :细胞系和白血病原代细胞的BCL 2高表达伴低药敏与AML疗效有关。

环氧合酶2抑制剂的抗胰腺癌作用及相关机制

目的探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力和对COX-2、基质金属蛋白酶(MMP)-14蛋白表达的影响以及可能的抗胰腺癌机制。方法不同浓度的COX-2抑制剂塞来昔布(20、60、100μmol/L)处理胰腺癌细胞后,用MTT比色法检测细胞的增殖能力;用Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的侵袭能力和迁移能力;ELISA检测MMP-14和COX-2的蛋白表达情况。结果 MTT增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕实验分别提示,COX-2抑制剂作用后胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力均以浓度梯度形式下降(P<0.05);ELISA结果显示,胰腺癌细胞中COX-2和MMP-14的蛋白表达水平相应降低(P<0.05),两者表达具有显著正相关性(r=0.873,P<0.05)。结论 COX-2抑制剂可能通过抑制COX-2表达下调MMP-14表达,进而以浓度梯度形式减弱胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力,起到抗胰腺癌作用。

柯里拉京对顺铂抗卵巢癌Hey和SKOV3细胞的增敏作用

探讨柯里拉京(corilagin)与羟基喜树碱(HCPT)、顺铂(cDDP)单独及联合用药,体外抗卵巢癌细胞Hey,SKOV3的活性及与cDDP联用机制的初步研究.利用四唑盐(MTT)比色法检测柯里拉京,HCPT,cDDP在不同质量浓度下,单独及联合用药对卵巢癌细胞的增殖抑制率,并根据金氏公式计算其协同指数(Q),进而评价两药联用的增敏效果.通过形态学观察吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)和Hoechst 33258染色及线粒体膜电位变化,探究其诱导机制.结果表明:柯里拉京对卵巢细胞Hey,SKOV3的半抑制浓度(IC_(50)值)分别为19.20,17.17μmol·L^(-1);柯里拉京与cDDP联合作用对于SKOV3,Hey两种细胞均有协同作用,与HCPT联用只对SKOV3细胞有协同作用,对Hey细胞仅是相加效应;联合用药组对卵巢癌细胞的抑制效果显著高于单独用药组;柯里拉京与cDDP联合用药对卵巢癌细胞的杀伤效果可能是通过诱导细胞凋亡实现的.

氯化三苯四氮唑校正纸片扩散法检测天然抗菌成分的误差

目的:对现行纸片扩散法(K-B法)检测天然抗菌成分存在显著误差的原因进行分析,提出改进方法。方法:采用氯化三苯四氮唑(TTC)对指示菌显色、分析天然产物乙醇浸膏中抗菌成分的极性、样品在平板培养前适当扩散等方法,对K-B法检测天然抗菌成分存在显著误差的原因进行了研究。结果:天然产物中存在中极性、弱极性甚至非极性抗菌成分,在培养基中扩散较慢,现行K-B法以透明抑菌圈为判读抗菌活性依据,会低估样品抗菌活性,甚至出现假阴性结果,造成漏筛。以不能被TTC显色的指示菌范围和透明抑菌圈之和来判读天然产物抗菌活性,提高了K-B法检测天然抗菌成分的准确性和可靠性。结论:现行K-B法不能直接应用于由有机溶剂提取的天然抗菌成分的活性检测,TTC显色K-B法可有效消除由样品扩散速度较慢引起的显著误差。

不同部位猪肉肌纤维类型组成与品质特性比较研究

为比较不同部位猪肉肌纤维类型组成与品质特性的差异,选取9头6月龄杜长大三元杂交猪背最长肌(Longissimus dorsi)、半膜肌(Semimembranosus)和半腱肌(Semitendinosus)3个部位猪肉作为研究对象,通过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶(nicotinamide adenine dinucleotide-tetrazolium reductase,NADH-TR)染色法研究不同部位猪肉的肌纤维类型组成,并分析肌纤维类型数量比例、平均直径、横截面积、密度等肌纤维特性;测定不同部位猪肉的品质特性(p H值、色泽、蒸煮损失率、剪切力以及质构特性)。结果表明,背最长肌和半膜肌中主要为ⅡB型肌纤维(P<0.05),数量比例分别为82.03%和53.22%,半腱肌则主要由Ⅰ型(45.44%)和ⅡB型(39.01%)肌纤维组成。半膜肌中各类型肌纤维的平均直径和横截面积较大,总肌纤维密度最小(P<0.05),为42.15根/mm2。背最长肌的亮度值和蒸煮损失率最高(P<0.05),pH值和红度值最低(P<0.05);半膜肌的剪切力最高(P<0.05);半腱肌的pH值和红度值最高(P<0.05),亮度值、剪切力和蒸煮损失率最低(P<0.05)。

扶正抑瘤饮和全量、半量氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的抑制作用

目的:研究扶正抑瘤饮(简称中药)联用全量、半量血浆峰浓度氟尿嘧啶(5-Fu)对体外胃癌细胞增殖的影响。方法:中药分别联用全量、半量血浆峰浓度5-Fu,并以全量血浆峰浓度5-Fu(125 μg/ml)为对照。采用 MTT、法观察各组对胃癌细胞的抑制作用。结果:与5-Fu 组比较,中药加半量5-Fu 组对8801、MGC-803细胞株抑瘤率差异无显著性;对 SGC-7901细胞株,抑瘤率高于单用5-Fu 组(P<0.05)。对8801细胞株,中药加全量5-Fu 组与5-Fu 组比较抑制率差异无显著性;对 SGC-7901、MGC-803细胞株,中药高浓度联用组抑瘤率显著高于5-Fu 组(P<0.05)。结论:中药对不同分化程度的胃癌细胞的增殖均有不同程度的抑制作用。且中药可增强半量血浆峰浓度5-Fu 的抑瘤率,高浓度的中药可增强血浆峰度5-Fu 对部分肿瘤细胞株的抑瘤作用。

羊耳菊种子生活力的最佳测定条件

为获得羊耳菊种子生活力的最佳测定条件,采用四唑染色法,以氯化三苯基四氮唑(TTC)浓度、染色温度和染色时间为指标,通过正交试验和响应面试验对测定条件进行优化。结果表明:TTC浓度1.5%、染色温度40℃、染色时间3h为羊耳菊种子生活力测定的最佳条件,3个检测指标对种子生活力测定的影响为染色温度>染色时间>TTC浓度。

饲用小麦熟化度快速鉴定方法的研究

本试验旨在选择快速、简便的方法,解决生产中小麦的新陈、是否熟化以及新陈掺杂的鉴定问题。试验选用愈创木酚法、四氮唑盐染色法、酸度指示剂法对7个品种贮存1、4、8、10、12、14周新小麦(济麦22、烟农173、烟农999、良星77、山农25、Sh5186、科源088)以及贮存1(济麦21、烟麦17)、2年的陈小麦(烟麦17)进行鉴定。结果表明:愈创木酚法在一定程度上能快速判断出小麦的新陈,但这一方法受品种影响,个别品种新陈小麦染色差异不大。四氮唑盐染色法可鉴别出新小麦是否完成熟化,以及2年内同一品种小麦的储存年限。酸度指示剂法能很好地鉴别小麦的新陈、是否完成熟化,也能对新陈掺杂的小麦进行一定区分,但不能区分陈小麦贮存年限。3种鉴别方法均存在一定的优缺点,生产中应根据实际需要加以选择。