四烯菌素B标准样品的研制

目的:依据GB/T 15000.3—2008《标准样品工作导则(3)标准样品定值的一般原则和统计方法》,研制四烯菌素B标准样品。方法:以淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochramogenes)1628发酵液为原料,通过萃取、AB-8和SephardexLH-20柱层析分离纯化得四烯菌素B纯品。利用紫外(UV)、红外(IR)、质谱(MS)和核磁图谱(NMR)分析,查阅文献数据,进行结构确认。样品分装成100瓶(10 mg/瓶),结合液相色谱法对该样品展开均匀性、稳定性检验以及联合定值分析。结果:该样品经F检验在95%的置信区间范围内均匀性良好;在-20~-18℃条件下保存12个月稳定性良好;经国内8家具有分析资质的实验室协同定值,四烯菌素B纯度为99.37%,扩展不确定度为0.22%。结论:四烯菌素B达到国家标准样品的技术要求,可用于有关四烯菌素B的检测方法校准和相关产品的质量控制。

链霉菌CB02959中四霉素及四烯菌素的鉴定及培养基优化

【背景】四霉素(Tetramycin)和四烯菌素(Tetrin)是具有广谱抗真菌活性的四烯大环内酯类抗生素。链霉菌CB02959是一株雷纳霉素(Leinamycin)类化合物的潜在产生菌株,利用antiSMASH分析其基因组发现该菌株含有一个纳他霉素(Natamycin)类四烯大环内酯化合物的生物合成基因簇。【目的】对Streptomyces sp.CB02959中次级代谢产物进行研究,确定其是否可以产生四烯大环内酯化合物,对其发酵产物进行分离和结构鉴定,并进行初步的发酵优化以提高产量。【方法】基于生物信息学预测和高分辨质谱数据,推测CB02959中多烯化合物的结构;在不同发酵培养基中培养CB02959,确定适合大规模发酵的培养基;敲除tetrA基因以确定目标基因簇和四烯大环内酯化合物产生的相关性;分离和鉴定CB02959产生的主要代谢物的结构;通过改变培养基中葡萄糖、麦芽提取物和胰蛋白胨的含量,提高四烯大环内酯化合物的产量。【结果】通过对CB02959中纳他霉素类化合物生物合成基因簇的分析及16S rRNA基因序列的进化树分析,推测CB02959可能是一株新的四霉素和四烯菌素产生菌;在YEME发酵培养基中对CB02959进行大规模发酵,分离得到4个化合物,鉴定为四霉素A(1)、四霉素B(2)、四烯菌素A(3)、四烯菌素B(4);最后通过培养基的初步优化,将化合物1–4的产量分别提高至208.1、100.0、1315.6、109.9 mg/L。【结论】通过基因组挖掘策略发现了一株新的四霉素和四烯菌素产生菌链霉菌CB02959,并通过培养基优化提升了其四烯大环内酯化合物的产量,此发现为这类抗真菌天然产物的后续开发奠定了基础。