ATG7对神经母细胞瘤增殖和耐药的影响及机制研究

[目的]研究自噬相关基因ATG7对神经母细胞瘤增殖和化疗耐药性的影响,初步探索其分子机制,为神经母细胞瘤临床治疗提供新的线索和理论依据。[方法]在神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y和SK-N-BE2中,慢病毒转染敲减ATG7基因,采用MTT染色检测ATG7对细胞增殖能力的影响,同时通过Western blotting方法检测细胞内自噬标志性蛋白LC3表达量来反映细胞内自噬水平;通过检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白研究ATG7对细胞凋亡的影响。SH-SY5Y细胞经阿霉素处理后,采用实时无标记细胞分析仪连续监测细胞增殖情况,探讨ATG7在神经母细胞瘤耐药中作用。[结果]敲减ATG7基因能显著抑制细胞内自噬水平,而且ATG7敲减后细胞在第4、5d的增殖倍数分别为3.05±0.05和3.92±0.08,低于对照组的3.40±0.05和4.35±0.13（P=0.0012,P=0.0085）;与对照组相比,ATG7敲减组其凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显降低,促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达显著升高（P〈0.05）。经阿霉素处理后,ATG7敲减组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。[结论]由于ATG7基因介导细胞自噬过程,ATG7基因在神经母细胞瘤中可能通过自噬作用促进肿瘤细胞异常增殖,抑制细胞凋亡,进而增强细胞耐药性。

诱导/封闭自噬相关基因7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用研究

目的探讨诱导/封闭Atg7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用。方法构建上调Atg7的慢病毒载体plenti6.3-Atg7,下调Atg7的慢病毒载体sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv,空载对照慢病毒载体sh-scramb-con lv、plenti6.3-GFP,分别转染肾癌786-0细胞系,未转染的786-0细胞系为空白对照。RT-PCR和Western blot检测各组Atg7的表达,研究plenti6.3-Atg7激活Atg7效率和sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv抑制Atg7效率。Western blot检测上述各组细胞LCII/LC3I蛋白比值,研究上调及下调Atg7对肾癌786-0细胞自噬的激活及抑制作用。结果经过筛选,成功构建稳定上调Atg7的786-0/plenti6.3-Atg7xbx细胞系、稳定下调Atg7的786-0/sh-Atg-2lv细胞系、空载对照786-0/sh-scramb-con lv、786-0/plenti6.3-GFP细胞系。与空白对照组比较,Atg7上调组786-0细胞LCII/LC3I比值显著升高(3.31±0.12 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定的自噬激活作用;Atg7下调组的786-0细胞LCII/LC3I比值显著降低(1.45±0.11 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定自噬抑制作用。结论上调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬激活作用,下调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬抑制作用。