酵母双杂交技术筛选宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中FAM92A1-289关联蛋白

目的应用酵母双杂交技术从宫颈癌He La细胞c DNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选He La细胞c DNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质,用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选,对筛选结果进行生物信息学分析,对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证,将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289,且对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象。筛选出在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高,即增殖细胞核抗原(PCNA)、半乳糖凝集素1(Galectin-1)、内质网高尔基体中间室标记物53(ERGIC-53)、重组人BCL2相关永生基因1(BAG1),并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞c DNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白,为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。

从内质网到高尔基体:一个受信号分子调控的蛋白质分泌过程

蛋白质从内质网到高尔基体的运输过程是对蛋白质进行质量控制和分选的重要阶段。近年研究发现,这一运输过程受到多级信号通路的严格调控,多种信号分子可以作用于转运相关的三个膜性结构——内质网、内质网-高尔基体中间体(ER-Golgi intermediate compartment,ERGIC)和高尔基体。信号分子通过调控转运囊泡出芽、融合等过程显著影响转运速率。该运输过程不仅受细胞外刺激引发的信号通路调控,还受到囊泡运输过程引发的反馈信号调节。

关于内质网-高尔基体中间体的已知与未知

内质网-高尔基体中间体(ERGIC)最初是在研究病毒蛋白胞内转运机制的过程中被发现的。由于其特殊的结构以及亚细胞定位,早期研究认为它是内质网和高尔基体之间的“交通枢纽”,其主要职能是为经典分泌路径中物质的分选和双向运输过程提供保障。而近期的探索揭示了ERGIC在细胞遭受胁迫时的一系列非经典功能:参与调控自噬体膜的早期形成,作为非经典分泌蛋白质的“集散地”等。多项研究揭示多种冠状病毒会“挟持”宿主的ERGIC,将其作为复制和组装的平台。还有研究显示ERGIC在有关蛋白合成质控过程中发挥作用,可能还会以内质网漩涡等多种内膜形态呈现,从而协助细胞平衡内膜系统的稳态以应对外界压力。尽管人们已经认识到ERGIC结构的独特性以及功能的多样性,但当前对其功能的理解仍然十分有限,特别是ERGIC通过何种机制在不同生理和病理条件下协调其动态结构与多样功能仍不甚明了。该综述旨在全面概述ERGIC的细胞功能和分子调控机制,并对相关议题进行探讨。