苗药五藤膏外敷对膝骨关节炎兔模型的治疗作用及机制

目的 探讨苗药五藤膏外敷对膝骨关节炎(KOA)兔模型的治疗作用及机制。方法 采用随机数字表法将96只家兔分为空白对照组、模型组、巴布膏组及五藤膏低、中、高剂量组,每组16只。除空白对照组外,其余组用4%木瓜蛋白酶生理盐水溶液制备KOA模型。造模第6周,空白对照组、模型组每日给予无菌纱布包扎固定右膝关节;巴布膏组给予氟比洛芬巴布膏贴敷于兔右膝关节前方;苗药五藤膏低、中、高剂量组分别给予1、2、4 g五藤膏贴敷于兔右膝关节前方。均用绷带包扎固定4 h,每日给药1次,干预4周。分别于给药1、2、3、4周每组各取4只家兔处死,取右侧股骨内髁顶点钙化层以上软骨。HE染色后观察软骨组织形态变化,用Mankin’s评分评价膝关节软骨组织病理学改变程度;用qRT-PCR法检测膝关节软骨组织中Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因(GSK-3β、MMP-3、OPG)及Notch信号通路下游靶基因(Notch1)表达。结果 空白对照组关节软骨表面光滑平整,结构清晰;模型组关节软骨表面粗糙不平整,结构模糊,软骨细胞数目少且分布紊乱;五藤膏高剂量组关节软骨表面较光滑平整,结构较清晰,软骨细胞数目较多且分布较均匀;苗药五藤膏低、中剂量组及巴布膏组伴不同程度的关节肿胀及滑膜充血,层次结构较模糊,软骨细胞数量较少且分布轻度紊乱。与空白对照组比较,模型组膝关节软骨组织Mankin’s评分高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组Mankin’s评分低(P均<0.05),且五藤膏高剂量组Mankin’s评分最低(P均<0.05)。与空白对照组比较,模型组膝关节软骨组织中GSK-3β、MMP-3、Notch1 mRNA表达高(P均<0.05),OPG mRNA表达低(P<0.05);与模型组比较,各治疗组GSK-3β、MMP-3、Notch1 mRNA表达低(P均<0.05),OPG mRNA表达高(P均<0.05),且五藤膏高剂量组以上指标变化最明显(P均<0.05)。结论 苗药五藤膏可改善KOA兔膝关节软骨及软骨下病变,延缓病程进展,其机制可能与调控Wnt/β-catenin、Notch信号通路下游靶基因有关。

苗药五藤膏外敷对膝骨关节炎兔软骨SMAD1及血清Jagged1、Jagged2表达的影响

目的观察苗药五藤膏外敷对膝骨关节炎(KOA)兔模型关节软骨SMAD1及血清Jagged1、Jagged2表达的影响,探讨苗药五藤膏治疗KOA的可能机制。方法选取健康新西兰大白兔72只,随机分为空白组、模型组、巴布膏组及苗药五藤膏低、中、高剂量组,每组12只,除空白组外,其余各组均采用木瓜蛋白酶膝关节内注射方法建立兔KOA模型,给药4 w后处死动物解剖患膝关节软骨进行切片、苏木素-伊红(HE)染色及病理学Mankin评分,采用Western印迹法检测SMAD1蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清Jagged1、Jagged2表达水平。结果与空白组相比,模型组兔软骨Mankin评分和血清Jagged1、Jagged2表达水平明显升高,SMAD1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组Mankin评分和Jagged1、Jagged2表达水平明显降低(P<0.05),SMAD1蛋白表达水平明显升高,其中除苗药五藤膏低剂量组外,其余各组均有统计学意义(P<0.05);治疗组内比较,Mankin评分从高到低依次为苗药五藤膏低、中剂量组、巴布膏组及苗药五藤膏高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);SMAD1蛋白表达水平从低到高依次为苗药五藤膏低、中、高剂量组及巴布膏组,其中巴布膏组与苗药五藤膏低、中剂量组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Jagged1、Jagged2表达水平从高到低依次为苗药五藤膏低、中、高剂量组及巴布膏组,其中巴布膏组Jagged1表达水平与苗药五藤膏各剂量组相比,差异有统计学意义(P<0.05),巴布膏组Jagged2表达水平与苗药五藤膏低、中剂量组相比,差异有统计学意义(P<0.05);苗药五藤膏组组内比较,SMAD1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),苗药五藤膏低剂量组Jagged1、Jagged2表达水平与中、高剂量组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苗药五藤膏可能通过促进KOA模型兔软骨细胞中SMAD1蛋白表达,抑制血清中Jagged1、Jagged2表达,延缓KOA的病程进展,从而达到改善及治疗作用。

苗药五藤膏外敷对膝关节骨关节炎兔软骨GSK-3β、Notch4表达的影响

目的 观察苗药五藤膏外敷对膝关节骨关节炎(KOA)兔关节软骨中糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、Notch4表达的影响,探讨苗药五藤膏治疗KOA的可能作用机制。方法 将同批次健康的72只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、巴布膏组及苗药五藤膏低、中、高剂量组,每组12只。除空白组外,其余组均采用木瓜蛋白酶膝关节内注射方法建立兔KOA模型。实验第5周开始,巴布膏组给予巴布膏外敷右膝关节,苗药五藤膏低、中、高剂量组分别给予约1 g、2 g、4 g的苗药五藤膏外敷右膝关节,空白组和模型组采用无菌纱布包扎右膝关节,均1次/d,每次固定4 h,干预4周。HE染色观察兔软骨组织病理形态并进行病理学Mankin评分,Western blot法检测关节软骨组织中GSK-3β、Notch4蛋白表达情况。结果 模型组兔软骨Mankin评分及软骨组织中GSK-3β、Notch4蛋白相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05),各药物组Mankin评分及软骨组织中GSK-3β、Notch4蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05);苗药五藤膏高剂量组Mankin评分明显低于其他药物组(P均<0.05),软骨组织中Notch4蛋白相对表达量明显低于苗药五藤膏低、中剂量组(P均<0.05)。结论 苗药五藤膏能延缓KOA病情进展,机制可能与抑制KOA兔软骨GSK-3β、Notch4蛋白表达有关。

苗药五藤膏对膝关节炎兔GSK-3β、Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a表达的影响

目的基于Wnt/β-连环蛋白(catenin)信号,探讨不同剂量苗药五藤膏贴敷对KOA模型兔软骨组织中糖原合成酶激酶(GSK)-3β蛋白及Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a mRNA表达的影响。方法将96只家兔随机分为空白组,模型组,巴布膏对照组,苗药五藤膏低、中、高剂量组;除空白组外均采用木瓜蛋白酶关节腔内注射制备兔KOA模型,空白组正常饲养,不干预;模型组患关节无菌纱布包扎固定,其余各组分别予氟比洛芬巴布膏及不同剂量的苗药五藤膏贴敷干预;给药后第1、2、3、4周各组分别处死动物,取材后观察软骨病理变化及行Mankin评分;采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测关节软细胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a mRNA的表达水平;Western印迹检测GSK-3β蛋白的表达水平。结果各组关节软骨病理改变比较,经过4 w干预后,除空白组外,模型组患膝关节面软骨重度退性改变;巴布膏对照组关节面软骨轻度退性改变;苗药五藤膏低、中、高剂量组退变程度与剂量呈正相关;空白组、苗药五藤膏低、中、高剂量组、巴布膏对照组改良版Mankin评分均明显低于模型组(P<0.05),且苗药五藤膏低、中、高剂量组组内改良版Mankin评分比较差异均有统计学意义(P<0.05);与空白组比较,模型组、苗药五藤膏低、中、高剂量组、巴布膏对照组GSK-3β蛋白表达水平明显升高,给药后1、2、3、4 w模型组、苗药五藤膏中、低剂量组、给药后4 w苗药五藤膏高剂量组Wnt3a mRNA明显升高(P<0.05),给药后1、2、3、4w模型组、苗药五藤膏中、低剂量组、给药后1 w苗药五藤膏高剂量组、巴布膏对照组Wnt5a mRNA明显升高,模型组、苗药五藤膏中、低剂量组Wnt7a mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,苗药五藤膏低、中、高剂量组、巴布膏对照组GSK-3β蛋白表达水平明显降低,苗药五藤膏低、中、高剂量组、巴布膏对照组Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a mRNA明显降低(P<0.01)。结论不同剂量苗药五藤膏干预能使KOA模型兔膝关节软骨细胞GSK-3β蛋白的表达降低;苗药五藤膏可通过干预Wnt/β-catenin信号,降低KOA模型兔患膝关节软骨细胞Wnt信号上游基因Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a mRNA的表达。

苗族药红根药材的质量标准研究

本文对苗族药红根进行了研究，拟定了药材的质量标准，检测项目齐全，方法直观可靠。按此标准，可以全面鉴定红根药材的真伪质量。

基于Wnt/β-catenin信号探讨苗药五藤膏对膝骨关节炎模型兔软骨组织中β-catenin蛋白及MMP-13、c-myc mRNA表达的影响

目的以经典Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路为靶向,观察苗药五藤膏贴敷对膝骨关节炎(KOA)模型兔软骨组织中β-catenin、基质金属蛋白酶(MMP)-13及原癌基因(c-myc)表达的影响。方法将同一批4~5月龄96只健康家兔,随机分为空白组、模型组、巴布膏对照组,五藤膏低量组(约1 g),五藤膏中量组(约2 g),五藤膏高量组(约4 g),每组16只。除空白组外,其余5组均制备兔KOA模型,造模成功后,分别予氟比洛芬巴布膏贴敷及相应剂量的五藤膏贴敷干预;空白组不做任何干预,正常饲养;模型组患膝关节无菌纱布包扎固定。给药后第1、2、3、4 w各处死4只,取患膝关节软骨苏木素-伊红(HE)染色观察软骨组织病理变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测关节软骨细胞中MMP-13、c-myc mRNA的表达水平;Western印迹检测β-catenin蛋白的表达水平。结果与空白组比较,模型组膝关节面软骨病理显示重度退行性改变,软骨细胞重度变性、萎缩,分布紊乱;模型组软骨细胞中MMP-13、c-myc mRNA的表达量最高,空白组表达量最低,而模型组软骨细胞中β-catenin蛋白表达最低,空白组最高,不同量五藤膏干预后各组β-catenin蛋白表达均不同程度升高;量越高也越接近空白组;五藤膏各量组(1、2、3、4 w)与巴布膏对照组(1、2、3、4 w)c-myc mRNA的表达量均较空白组升高,但五藤膏高量组(1、2、3、4 w)与巴布膏对照组(1、2、3、4 w)MMP-13与c-myc升高均不明显;五藤膏各量组(1、2、3、4 w)与巴布膏对照组(1、2、3、4 w)c-myc mRNA的表达量均较模型组显著降低,五藤膏高量组(1、2、3、4 w)与巴布膏对照组(1、2、3、4 w)MMP-13降低更为显著;五藤膏中、高量组(1、2、3、4 w)MMP-13 mRNA表达量与巴布膏对照组相近;各治疗组组内比较,五藤膏低量组(2、3、4 w)MMP-13 mRNA明显高于五藤膏中量组(1、2、3、4 w)与五藤膏高量组(1、2、3、4 w)的表达,其中与五藤膏高量组差异更显著;五藤膏低量组(1、2、3、4 w)c-myc mRNA明显高于五藤膏中量组(4 w)、五藤膏高量(1、2、3、4 w)的表达,除五藤膏中量组第1w与五藤膏高量组(1、2、3、4 w)c-myc mRNA表达差异显著外,其余各时段五藤膏中量组与五藤膏高量组c-myc mRNA表达均无显著差异。结论五藤膏干预可能通过调控Wnt信号通路,促进兔KOA患膝关节软骨细胞β-catenin蛋白表达,抑制KOA模型兔的关节软骨细胞Wnt信号下游基因MMP-13、c-myc mRNA的表达,延缓疾病进展,从而改善KOA的症状。

贵州省苗族医药现状分析研究

苗族医药资源是贵州省得天独厚的一大优势资源,经过多年发展,在抢救、继承、研究、整理、开发等方面取得了令人属目的成绩,形成了一个倍受关注的学科和产业。但仍然存在不少困难和问题,需要采取措施,加加快发展。

苗药五藤膏外敷对膝骨性关节炎兔软骨RANK、RANKL及Notch4受体表达的影响

目的:探讨苗药五藤膏外敷对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨RANK、RANKL及Notch4受体表达的影响。方法:将96只健康新西兰大白兔随机分为空白对照组,模型对照组,苗药五藤膏高、中、低剂量组以及阳性药物组,每组16只,除空白对照组外,其余各组建立兔KOA软骨模型,分别于用药1、2、3、4周取患侧兔关节软骨,切片后进行HE染色,采用RT-PCR法检测兔RANK、RANKL、Notch4受体表达量,并将第4周切片结果进行病理学Mankin评分。结果:与空白对照组比较,模型对照组Mankin评分显著升高(P<0.05),各治疗组Mankin评分均显著低于模型对照组(P<0.05);与模型对照组比较,各治疗组RANK、RANKL、Notch4受体表达有不同程度的降低(P<0.05)。结论:苗药五藤膏能够降低KOA模型兔软骨RANK、RANKL、Notch4受体表达,其中五藤膏高剂量组降低效果更明显。