基于网络药理和细胞实验探索芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的机制

目的采用网络药理学和细胞实验探究芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的潜在作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台和中医药整合数据库检索芪玉三龙方成分筛选靶点,通过美国肿瘤基因组图谱数据库获得肺癌靶点基因。构建蛋白相互作用网络,并采用基因本体数据库和京都基因和基因组百科全书数据库进行富集分析。对核心靶蛋白与化合物进行分子对接分析,并以A549细胞进行实验验证。结果芪玉三龙方对于非小细胞肺癌的潜在有效靶点162个,蛋白相互作用网络分析得到核心靶点基因20个,主要的生物学过程为对缺氧的反应、MAPK级联、炎症反应,主要的功能通路为钙信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、细胞周期。分子对接结果表明,MMP9-槲皮素、PPARG-异鼠李素、PTGS2-刺芒柄花素、JUN-刺芒柄花素之间存在有效的结合亲和力。在A549细胞实验中,PCR和Western blot分析结果表明,芪玉三龙方含药血清能够促进PPAR-γmRNA和蛋白表达(P<0.05),抑制c-JUN、COX-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论芪玉三龙方通过影响A549肺癌细胞的凋亡、侵袭和肿瘤血管生成及炎症进程达到干预肺癌的作用。

芪玉三龙汤调节小鼠腹腔巨噬细胞M2/M1型极化及其对CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的影响

目的探讨芪玉三龙汤在体外条件下对小鼠腹腔巨噬细胞M2/M1型极化的调控作用及其对CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的影响。方法分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,并通过流式细胞术(PE-CD11b/和FITC-F4/80染色)鉴定其纯度。采用白细胞介素(interleukin,IL)-4刺激小鼠腹腔来源的巨噬细胞构建M2型巨噬细胞模型,芪玉三龙汤处理M2型巨噬细胞,分别于不同时间点应用流式细胞术检测细胞表面膜分子CD16/32、CD206、CD155、PD-L1、Galectin-9的表达水平;qRT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、IL-12p40、IL-1β、精氨酸酶1(arginase1,Arg1)、FIZZ1、IL-10 mRNA的表达水平。采用芪玉三龙汤处理后的M2型巨噬细胞分别与CD4^(+)、CD8^(+)T细胞体外共培养,流式细胞术检测TIGIT的表达水平。结果成功分离出小鼠腹腔巨噬细胞,并鉴定其纯度高达89.8%。芪玉三龙汤处理M2型巨噬细胞后,细胞表面膜分子CD16/32的表达水平升高,而CD206表达水平降低;处理24 h后细胞iNOS、IL-12p40及IL-1βmRNA表达水平上升,Arg-1、FIZZ-1、IL-10 mRNA表达水平降低;处理24 h后细胞表面CD155、PD-L1、Galectin-9表达水平降低。经芪玉三龙汤处理的M2型巨噬细胞分别与CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞共培养后,CD4^(+)、CD8^(+)T细胞表面TIGIT的表达受到明显抑制。结论芪玉三龙汤能够诱导小鼠腹腔M2型巨噬细胞向M1型极化,并且极化后的细胞能够抑制T细胞负性调节分子的表达。

芪玉三龙汤对肺肿瘤的抑制效应及对肺脏的影响

目的:研究芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠的抑瘤效应及对小鼠肺脏的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、化疗组、芪玉三龙汤高、中、低剂量组、联合组,每组8只;实验第11天开始芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组按照0.4 m L顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;实时荧光定量PCR法(RT-q PCR)检测肿瘤组织PI3K mRNA的转录水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织PI3K p85α、PI3K p110α蛋白水平;免疫组化检测肿瘤组织VEGF蛋白表达,HE染色法观察小鼠肺脏的病理形态变化。结果:与模型组比较,中药高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率为23.86%,联合组与化疗组抑瘤率相当;芪玉三龙汤能够明显降低肿瘤组织PI3K mRNA的转录水平和PI3K p85α、PI3K p110α蛋白水平,与顺铂联用有一定协同增效作用;并且能够降低VEGF阳性细胞率;光镜下观察肺脏示芪玉三龙汤高、中剂量组以及联合组小鼠肺组织内未见肿瘤转移灶。结论:芪玉三龙汤可温和抑制肺癌移植瘤生长,可能与降低PI3K mRNA转录水平、PI3K p85α、PI3K p110α蛋白表达有关,并可能通过降低VEGF表达减少肺脏的肿瘤转移。

芪玉三龙汤对肺癌p70S6激酶和真核翻译起始因子4E的影响

目的：研究芪玉三龙汤对肺癌生长的关键合成蛋白p70S6激酶（p70S6K）和真核翻译起始因子4E（eIF4E）表达的影响。方法：基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法构建移植肺癌模型,荷瘤成功后随机分为模型组（M）,化疗组（C）,中药组（低、中、高剂量组,分别命名为QL、QM、QH）,联合组（CQH）,低、中、高剂量组小鼠分别按（20.12、40.24、80.48）g/（kg·d）灌胃给药,化疗组以0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以中药高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组以等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化;RT-qPCR法检测Ras mRNA表达水平;Western Blot法检测肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达。结果：芪玉三龙汤可抑制肺癌移植瘤生长,电镜下可见凋亡小体,用药各组均可下调Ras转录水平,但中药各组之间无明显差异（P〉0.05）,联合组与化疗组之间相比无统计学意义（P〉0.05）。同时,该复方均可降低肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达。结论：芪玉三龙汤可抑制肺癌生长,诱导其镜下凋亡,与下调肺癌生长的关键合成蛋白p70S6K和eIF4E表达相关。

芪玉三龙汤对肺癌移植瘤小鼠PI3K/Akt/mTOR通路PI3K、Akt、mTOR表达的影响

目的研究芪玉三龙汤对小鼠皮下移植瘤生长及对PI3K/Akt/mTOR信号通路调节的影响。方法采用Lewis肺癌细胞培养移植法复制肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组,化学治疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组;观察小鼠的生存状态,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;Western blot法检测荷瘤小鼠肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达。结果芪玉三龙汤高剂量组、联合组生存状态优于化学治疗组;芪玉三龙汤对肺肿瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,其与顺铂联用无明显增效作用;芪玉三龙汤可以下调PI3K、Akt和mTOR表达水平,和顺铂联用对下调关键分子Akt的表达具有明显的协同作用。结论芪玉三龙汤对肺癌移植瘤的抑制作用可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子有关,与化学治疗药联用可协同下调关键蛋白Akt的表达。

芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠免疫功能的影响

目的研究芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠皮下移植瘤生长,以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法采用LLC细胞株培养移植法构建荷肺癌小鼠模型,随机分成模型组、化疗组、中药高、中、低剂量组、联合组,每组8只,另设8只正常小鼠为空白组;观察各组小鼠的生存状态,称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤组织内癌细胞超微结构的变化;流式细胞术检测小鼠外周血T细胞亚群(CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+)的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠脾脏IL-2、IL-10浓度。结果芪玉三龙汤高剂量组、联合组的生存状态优于化疗组;芪玉三龙汤具有温和的抑制肺癌移植瘤的作用,但与顺铂联用无明显增效作用;电镜下观察肿瘤细胞超微结构可见中药组肿瘤细胞有凋亡发生,以高剂量组凋亡坏死最明显,化疗组可见多个凋亡小体,联合组肿瘤细胞严重坏死;芪玉三龙汤能明显增加CD4^+水平,升高IL-2浓度,降低CD8^+的水平和IL-10含量,提高CD4^+/CD8^+比值,联合组与化疗组比较有显著差异(P<0.01)。结论芪玉三龙汤能改善行化疗的荷瘤小鼠生存状态,可温和抑制肺癌移植瘤生长,诱导肺癌细胞凋亡,并具有改善荷瘤小鼠以及化疗药导致免疫功能低下的作用。

芪蓣清化汤治疗脾肾气虚型慢性肾脏病蛋白尿的临床疗效及其对炎症细胞因子的影响

目的评价芪蓣清化汤治疗脾肾气虚型慢性肾脏病蛋白尿的临床疗效及其对炎症细胞因子的影响。方法将72例脾肾气虚型慢性肾脏病蛋白尿患者随机分为治疗组和对照组,每组36例。两组均予西医常规治疗,治疗组同时予芪蓣清化汤,对照组予肾炎康复片。两组疗程均为6个月,观察临床疗效以及中医证候积分、24 h尿蛋白定量、肾功能、血清白蛋白、血脂、炎症细胞因子(hs-CRP、TNF-α、IL-6)水平的变化情况。结果①治疗组、对照组总有效率分别为77.8%、52.8%,治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05)。②治疗前后组内比较,两组浮肿、纳少脘胀积分及证候总积分均降低(P<0.05),治疗组腰脊酸痛、疲倦乏力积分亦降低(P<0.05);组间治疗后比较,治疗组腰脊酸痛、疲倦乏力积分及证候总积分明显低于对照组(P<0.05)。③治疗前后组内比较,两组24 hUPro均显著降低(P<0.05);治疗后组间比较,治疗组24 hUPro、SCr、eGFR水平均较对照组改善(P<0.05)。④治疗前后组内比较,两组hs-CRP、TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.05);治疗后组间比较,治疗组hs-CRP、TNF-α、IL-6水平均低于对照组(P<0.05)。结论芪蓣清化汤可有效提高脾肾气虚型慢性肾脏病蛋白尿的临床疗效,改善患者临床症状,减少尿蛋白排泄,延缓肾功能恶化;其可能是通过降低机体炎症细胞因子的表达而发挥肾脏保护作用。

芪蓣清化汤联合氯沙坦钾片治疗对IgA肾病TLR4及炎症细胞因子表达的影响

目的 探讨芪蓣清化汤联合氯沙坦钾片治疗对脾肾气(阳)虚证原发性IgA肾病(IgAN)患者的临床疗效及对外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)、炎症细胞因子表达的影响。方法 90例原发性IgAN患者证属脾肾气(阳)虚证,采用随机数字表法随机分为治疗组及对照组,每组45例。各组均予饮食控制、控制血糖等基础治疗,治疗组予芪蓣清化汤联合氯沙坦钾片口服,对照组予氯沙坦钾片口服。两组疗程均为6个月。观察两组临床疗效,治疗前后24 h尿蛋白定量、肾功能、血清白蛋白、血脂、外周血单个核细胞TLR4阳性表达率、血清单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)的变化。结果 (1)治疗组总有效率为77.78%,对照组总有效率为57.78%。治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05)。(2)两组治疗后血尿酸、甘油三酯、胆固醇、24 h尿蛋白定量较治疗前均降低(P<0.05);治疗组血肌酐、血清白蛋白亦有显著改善(P<0.05)。治疗后组间比较,治疗组24 h尿蛋白定量较对照组有显著改善(P<0.05)。(3)治疗前后组内比较,两组外周血单个核细胞TLR4阳性表达率、MCP-1、IL-6表达水平均有显著降低(P<0.05)。治疗后组间比较,治疗组MCP-1、IL-6水平较对照组有显著降低(P<0.05)。(4)治疗组治疗后中医证候总积分、神疲乏力、畏寒肢冷积分较治疗前均降低(P<0.05);对照组治疗后中医证候总积分、神疲乏力积分较治疗前亦有降低(P<0.05)。组间治疗后比较,治疗组中医证候总积分、神疲乏力积分低于对照组(P<0.05)。结论 芪蓣清化汤联合氯沙坦钾片治疗可有效改善患者临床证候,降低脾肾气(阳)虚证IgAN患者24 h尿蛋白排泄,具有降低血肌酐、血尿酸的肾脏保护作用,推测其作用机制可能与抑制TLR4及炎症因子MCP-1、IL-6的表达有关。相较于单纯氯沙坦钾片治疗,芪蓣清化汤联合氯沙坦钾片治疗在控制尿蛋白、抑制炎症细胞因子表达方面更具优势。

半夏厚朴汤治疗咽喉反流性疾病的临床观察

目的:观察半夏厚朴汤治疗气郁痰阻型咽喉反流性疾病(Laryngopharyngeal Reflux Disease,LPRD)的疗效及安全性。方法:76例LPRD患者按照随机数字表法分为西医组34例和中医组42例,西医组给予雷贝拉唑肠溶片加枸橼酸莫沙必利片治疗,中医组在西医组基础上加用半夏厚朴汤加减。疗程4周。结果:中医组有效率为85.71%,高于西医组有效率(64.71%),两组患者比较差异有统计学意义(P=0.031)。西医组和中医组治疗后,反流症状指数评分量表(Reflux Symptom Index,RSI)评分均明显下降,差异具有统计学意义(P=0.006和P=0.000),中医组评分变化更加明显;两组治疗前后反流体征评分量表(Reflux Finding Score,RFS)评分也有下降,但差异无统计学意义(P=0.064和P=0.058)。结论:半夏厚朴汤联合西医常规治疗,可以提高LPRD的有效率,并且是安全的。

自拟温阳疏肝汤治疗阳虚气郁型轻中度抑郁症临床观察

目的:探讨自拟温阳疏肝汤治疗阳虚气郁型轻中度抑郁症的疗效与安全性,以期为未来抑郁症的中医治疗提供参考。方法:选取我院2016年2月-2018年1月收治的抑郁症患者60例,根据随机数字表法分为对照组与观察组,各30例。对照组使用氟哌噻吨美利曲辛片治疗,观察组在对照组基础上联合使用自拟温阳疏肝汤治疗,治疗8周后,对比两组汉密尔顿抑郁自评量表(HAMD)评分变化情况、中医证候积分变化情况、疗效及安全性。结果:治疗后,两组患者HAMD评分及中医证候总积分均较治疗前明显降低,且观察组降低较对照组显著,差异有统计学意义(P <0.05);观察组临床治愈占比高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);所有患者治疗期间均未发生明显不良反应。结论:自拟温阳疏肝汤治疗阳虚气郁型轻中度抑郁症的疗效确切,利于减轻患者抑郁情绪,改善临床症状,且毒副作用少,安全性理想。

芪郁解毒方治疗急性淋巴细胞白血病的临床研究

目的通过观察芪郁解毒方对急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留白血病(MRD)的治疗统计分析患者持续完全缓解时间及生存率。方法通过临床应用芪郁解毒方治疗MRD的基础上进行回顾性研究。结果研究结果表明:治疗组3年、5年持续完全缓解率及生存率优于对照组。经Log生存分析两组持续完全缓解率有显著差异(P<0.05),而生存率无显著差异(P>0.05)。结论芪郁解毒方在改善MRD临床症状,持续完全缓解时间方面疗效显著。

芪玉三龙汤通过PD-1信号通路增强Th1免疫反应抑制肺癌转移

目的探讨芪玉三龙汤(QYSLD)通过PD-1信号通路调节肿瘤免疫微环境抑制肺癌及对肺癌荷瘤小鼠Th1免疫反应的影响。方法应用Lewis肺癌细胞株(LLC)细胞培养移植法建立小鼠皮下移植瘤模型,将72只模型小鼠随机分为对照组、顺铂组、QYSLD组和联合组,每组18只。观察小鼠一般生存情况;应用ELISA法检测小鼠肿瘤抗原特异性Th1细胞反应情况;流式细胞术检测小鼠脾脏T细胞中PD-1阳性细胞比例及记忆性CD4^(+)T细胞凋亡情况;药物处理小鼠21 d后,在解剖显微镜下计数肺表面转移瘤结节的数目与体积。结果QYSLD可改善肺癌荷瘤小鼠一般生存情况,上调小鼠CD4^(+)T细胞免疫反应及CD8^(+)T细胞特异性杀肿瘤细胞效应,下调小鼠脾脏T细胞中PD-1阳性细胞及CD4^(+)记忆性T细胞中凋亡细胞的比例;抑制小鼠肿瘤细胞的肺转移。结论QYSLD可改善肺癌荷瘤小鼠的生存状态并通过介导PD-1信号通路,增强Th1免疫反应,调节肿瘤免疫微环境,抑制肿瘤细胞免疫逃逸,从而达到抑制肺癌转移的作用。

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。

李培教授基于“辛散气结,苦降胃气”论治非糜烂性反流病临证经验

李培教授擅治脾胃病,临证重视脾胃为中心的脏腑辨证理论体系,对于非靡烂性反流病的病机及治疗方法有独到见解,临床疗效显著。

肾移植手术患者术后口服加减芪萸仲柏汤对肾功能指标及免疫功能的影响分析

目的:观察肾移植手术患者术后口服加减芪萸仲柏汤对肾功能指标及免疫功能的影响。方法:选择医院2012年10月~2017年10月收治的肾移植手术患者125例,按照随机数表法分为观察组(63例)和对照组(62例),肾移植术后,对照组采用常规免疫抑制治疗方法,观察组在此基础上加用芪萸仲柏汤进行治疗,两组均持续用药3个月并随访6个月。对比两组治疗前后的疗效、血肌酐、尿素氮、血尿酸、内生肌酐清除率、淋巴细胞总数(TLC)、CD4+T淋巴细胞内三磷酸腺苷(ATP)、CD4+/CD8+水平及不良反应情况。结果:治疗后观察组患者的总有效率、内生肌酐清除率、TLC及CD4+/CD8+明显高于对照组(P<0.05),血肌酐、尿素氮、血尿酸、CD4+T淋巴细胞内ATP水平及不良反应发生率均低于对照组(P<0.05)。结论:肾移植后口服芪萸仲柏汤可有效降低血肌酐、尿素氮、血尿酸及CD4+T淋巴细胞内ATP水平,内生肌酐清除率、TLC及CD4+/CD8+明显升高,疗效显著,不良反应较少。

芪玉三龙方通过CBS/GPX4调控铁死亡促进肺癌移植瘤小鼠对顺铂的敏感性

目的:基于生物信息技术和动物实验,探究芪玉三龙方提高肺癌顺铂敏感性的潜在作用机制。方法:分析转录组数据得到肺癌和顺铂耐药的差异基因,采用人工智能策略预测芪玉三龙方的靶蛋白,对取交集获得的潜在作用靶点进行GO生物过程及KEGG通路富集分析,随后进行基因依赖分析和分子对接,确定关键标志物,最后构建肺癌A549/DDP皮下瘤模型进行验证。结果:获得芪玉三龙方与肺癌顺铂耐药相关的潜在有效靶点186个,富集的生物学过程有细胞对过氧化氢的反应、细胞氧化解毒;功能通路有谷胱甘肽代谢、铂类药物的耐药性等。基因依赖分析鉴定出与铁死亡相关的基因CBS为核心的靶点,分子对接显示CBS与芪玉三龙方的核心活性成分有良好的亲和力,与贝母辛的结合亲和力最高。动物实验结果显示芪玉三龙方联合顺铂组肿瘤组织可见大片状坏死的细胞。与顺铂组比较,联合组能够上调4HNE和TFR蛋白的表达,下调CBS和GPX4蛋白的表达。结论:芪玉三龙方能够提高肺癌的顺铂耐药肿瘤组织对于顺铂的敏感性,其作用机制可能与抑制铁死亡关键分子CBS、GPX4表达有关。

芪玉三龙汤平衡肺癌小鼠Th1/Th2漂移相关机制

目的:探讨芪玉三龙汤对肿瘤细胞的促凋亡作用以及对肺癌小鼠辅助T细胞(Th cells)因子免疫生物调节作用。方法:采用Lewis肺癌细胞培养移植法(LLC)建立肺癌荷瘤小鼠模型,模型成功后随机分为模型组、化疗组、芪玉三龙汤组、联合组,每组8只,另设8只正常小鼠为空白组;观察小鼠的生存状态,称取瘤重,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化,判断芪玉三龙汤是否可诱导肿瘤细胞凋亡;采用酶联免疫(ELISA)法检测各组小鼠脾脏中白细胞介素(IL)-2,干扰素-γ(IFN-γ),IL-4,IL-10含量的变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肿瘤组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的转录水平。结果:中药组、联合组生存状态明显优于化疗组。与模型组比较,芪玉三龙汤组、化疗组和联合组能显著抑制肿瘤生长(P<0.01)。芪玉三龙汤组电镜下可见肿瘤细胞的变化以凋亡为主,亦有坏死,化疗组电镜下可见多个凋亡小体,联合组电镜下可见典型坏死细胞。各组Bcl-2 mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤组和联合组Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。各组Bax mRNA表达水平较模型组明显升高(P<0.05)。与模型组和化疗组比较,芪玉三龙汤组IL-2,中药组、联合组的IFN-γ含量显著增加(P<0.01)。芪玉三龙汤组及联合组IL-4,IL-10较模型组明显降低(P<0.05),而联合组较化疗组IL-4,IL-10浓度显著降低(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤可以改善肺癌小鼠的生存状态,诱导肺癌细胞凋亡,凋亡机制可能与下调Bcl-2,上调Bax有关。芪玉三龙汤能够增加IL-2,IFN-γ,降低IL-4,IL-10表达,从而平衡Th1/Th2漂移,改善免疫功能,抑制肿瘤细胞的免疫逃逸。

芪玉三龙汤调节microRNA21及PTEN的表达抑制肺癌肿瘤生长

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对micro RNA21及其靶向基因PTEN分子表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组,化疗组,中药高、中、低剂量组,联合组;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化,判断芪玉三龙汤是否可诱导肿瘤细胞凋亡;Western Blot法检测肿瘤组织PTEN蛋白表达;RT-q PCR法检测PTEN mRNA表达水平;RT-q PCR法检测micro RNA21 mRNA表达水平。结果:芪玉三龙汤对肺肿瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,电镜下可见中药高、中、低剂量组肺癌细胞凋亡或坏死,可下调micro RNA21 mRNA表达水平,上调PTEN蛋白及PTEN mRNA表达水平,并且和顺铂联用能够促进肺癌细胞凋亡并对上调PTEN mRNA的表达具有明显的协同增效作用。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤具有温和的抑制作用,可通过下调micro RNA21,上调抑癌基因PTEN的表达来诱导肺癌细胞的凋亡。

芪玉三龙汤对肺癌小鼠肿瘤组织Wnt系列蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠的抑瘤效应。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,化疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组,每组8只;造模第2天开始芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按20.12、40.24、80.48g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃给药,化疗组按照0.4mL顺铂腹腔注射给药,联合组以芪玉三龙汤高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量0.9%氯化钠溶液给药,1次/d,连续给药21d;称取瘤质量,计算抑瘤率;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织Wnt1、Wnt2、Wnt5a蛋白水平。结果:与模型组比较,各用药组Wnt1、Wnt2、Wnt5a蛋白水平均显著降低(P<0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤中、高剂量组Wnt1、Wnt2、Wnt5a蛋白水平均显著降低(P<0.01)。芪玉三龙汤高剂量组、联合组生存状态优于化疗组;其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,其与顺铂联用有一定增效作用。芪玉三龙汤对肺癌移植瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑瘤效应较优。结论:芪玉三龙汤和化疗药联用具有协同效应,对肺肿瘤具有一定的抑制作用。

芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg^-1灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80.48 g·kg^-1灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 mL;联合组每日按80.48 g·kg^-1灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0.4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31.2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P<0.01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。