减毒狂犬病病毒CTN181-3株免疫学特性研究

目的对本室研发的1株狂犬病减毒株CTN181-3的免疫学特性进行研究。方法以小鼠和金黄地鼠为模型,口腔或肌肉免疫1次后考查暴露前免疫;以金黄地鼠为模型,肌肉免疫考查暴露后免疫。结果CTN181-3株经小鼠和金黄地鼠分别口腔或肌肉免疫1次均能产生高滴度的中和抗体和良好的攻击保护效果;经小鼠口腔和肌肉免疫早期即开始产生细胞因子IFN-γ和IL-2,诱发有效的细胞免疫。以金黄地鼠为模型的暴露后免疫结果显示:肌肉免疫1次的保护率为50%,而免疫2次的保护率可达100%。结论CTN181-3株具有良好的体液免疫和细胞免疫保护效果,而且暴露后2次免疫不必接种免疫球蛋白即可达到100%有效保护,其免疫性强、保护效果好,是一种很有应用前景的狂犬病动物用候选疫苗株。

一株狂犬病病毒减毒株CTN-181的表型特性研究

目的全面了解狂犬病病毒减毒株CTN-181的表型特征,并与其亲本株CTN-1进行比较。方法将CTN-181株病毒在BHK21细胞中培养,观察其细胞病变和空斑形成特性;用细胞培养的病毒以脑内、肌内和口腔的方式接种不同周龄的小白鼠,同时脑内接种家兔和豚鼠,以同法接种其亲本株CTN-1进行毒力比较。另外,将病毒在BHK21细胞连续传10代,在乳鼠脑内传3代观察其弱毒特性的稳定性。结果 CTN-181株在BHK21细胞上培养出现较CTN-1株明显的细胞病变、较高的空斑滴度。CTN-181株对家兔、豚鼠脑内接种不致病,对4周龄以上的小鼠任何途径接种均不致病,而其亲本株CTN-1株对这些动物均致病或致死。CTN-181株通过细胞传10代和乳鼠脑内传3代后减弱的毒力未回升,无弱毒返祖现象。结论 CTN-181是一株减弱且稳定的减毒株,其弱毒的表型特征与WHO推荐用于制备动物和犬的口服疫苗株SAG2相似。

狂犬病病毒减毒株CTN-181毒力减弱的分子基础研究

目的了解CTN-181弱毒株的全长基因结构及其毒力减弱的分子基础。方法将CTN-181的全长基因进行测序并与4株减毒疫苗株和5株街毒株进行全序列基因比对,与CTN-181株的母株CTN-1进行不同区段蛋白基因中的替换位点比较。结果全长基因比较显示,CTN-181株与其他9株狂犬病病毒的核苷酸和氨基酸同源性为81.4%～93.3%和86%～97%。与CTN-1母株比较,CTN-181株存在12处核苷酸和7处氨基酸突变,氨基酸突变位点发生在N157(N→S),M187(Q→P),G276(L→V),G333(R→Q),G336(N→D),G389(E→K)和L1061(S→N)。结论 CTN-181存在7处氨基酸突变,可以认为是其毒力减弱的分子基础,其中在G蛋白内的4个位点的氨基酸突变最为重要。

1株狂犬病毒减毒株的毒力和分子特性研究

目的对实验室研发的1株狂犬病减毒株CTN181-3的致病性和基因型特性进行研究。方法用小鼠脑内、口腔接种法和金黄地鼠口腔接种法测定病毒毒力。将病毒通过乳鼠脑内、豚鼠颌下腺和细胞连续传多代,测定传代后病毒的遗传稳定性。对CTN181-3进行全基因组测序,并与其亲本株进行对比分析。结果CTN181-3对实验动物毒力高度减弱,对3周龄小鼠无论脑内或口腔接种均无致病性,对2周龄小鼠也表现出脑内低毒力;口腔接种8周龄金黄地鼠亦无发病死亡。遗传稳定性方面,经1~3 d龄乳鼠脑内连续传5代或豚鼠颌下腺传4代,传代增殖后的病毒滴度虽高达7.10 lg PFU/mL或7.63 lg PFU/mL,对小鼠脑内接种仍保留无致病力的弱毒特性;在BSR细胞和Vero细胞上分别传10代,表型特性稳定。全基因组测序结果分析显示CTN181-3株与国内近年来分离株的同源性高于其他疫苗株与国内分离株的同源性。CTN181-3株与其原始的亲本株CTN-1比较,发生8个氨基酸位点的突变,其中G276 L→V和L1496 M→W氨基酸的突变在CTN181株未发生,为CTN181-3株所特有。因此,这2个位点的氨基酸突变应该是CTN181-3株比CTN181株毒力更弱、遗传稳定性更高的分子基础。结论CTN181-3株的神经毒力高度减弱,毒力稳定,是一种很有应用前景的动物用狂犬病候选疫苗株。