miR-17-5p靶向B7-H3对结直肠癌细胞生物学特性及免疫调节作用的影响

目的:探究miR-17-5p对B7-H3的调控以及在结直肠癌发展中的免疫调节作用。方法:收集25例人结直肠癌组织及相邻正常组织,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组化实验分析miR-17-5p、B7-H3和PD-L1的表达水平。将人结直肠癌HCT-116细胞分为4组:miR-NC组、miR-17-5p mimic组、si-NC组、si-B7-H3组。通过细胞集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术分析HCT-116细胞生长、侵袭能力和凋亡率。通过荧光素酶报告基因实验分析miR-17-5p对B7-H3的调控作用。通过ELISA实验分析细胞培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α的细胞因子水平。结果:与癌旁组织比较,结直肠癌组织中miR-17-5p表达下降,B7-H3表达升高。miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够降低HCT-116细胞集落形成数量和侵袭数量,促进HCT-116细胞凋亡,并能降低培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α水平。此外,miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够抑制HCT-116细胞PD-L1表达。结论:miR-17-5p能够靶向抑制B7-H3表达,影响结直肠癌发展中的免疫调节作用,并能抑制结直肠癌细胞的转移,促进结直肠癌细胞凋亡。

黄芪-莪术对C5a介导JAK2/STAT3通路调控Lewis肺癌小鼠Th17/Treg细胞平衡影响的实验研究

目的探讨黄芪-莪术影响C5a介导JAK2/STAT3通路调控肿瘤微环境中Th17/Treg细胞平衡,从而阐明其在此途径抑制肿瘤进展的相关机制。方法40只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、中药干预组、阳性对照药(PMX53)组,每组各10只。腋下接种Lewis细胞建立肺癌小鼠模型,于接种后第3天开始,中药干预组按8.2 g/kg剂量给予中药浓煎液灌胃,模型对照组和PMX53组予等容积灭菌双蒸水灌胃,连续14 d;PMX53组分别于第3、6、9、12、15天按1mg/kg剂量给予腹腔注射PMX53,模型对照组和中药干预组同时腹腔注射等容PBS溶液。每2 d测算各组小鼠肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线;于第15天处死,剖取瘤块,ELISA法检测血清C5a、IL6、IL-10、IL-17、TGF-β等因子水平,流式细胞术检测并计算外周血和肿瘤组织中Th17/Treg细胞比例,Western Blot和Real-time PCR法检测肿瘤组织中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白及mRNA表达。结果与模型对照组比较,中药干预组和PMX53组肿瘤生长较缓慢,补体C5a、JAK2和STAT3蛋白及mRNA水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值、Treg占比均降低,SOCS3蛋白及mRNA水平、Th17/Treg比例增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪-莪术可降低补体C5a进而抑制JAK2/STAT3通路活化,并调节肿瘤微环境中Th17/Treg平衡达到抑制肿瘤生长的作用。

LncRNA MEG3靶向调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠血-脑屏障的影响

目的探讨LncRNA MEG3通过调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生小鼠血-脑屏障的影响。方法90只C57BL小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、si-NC组、si-LncRNA MEG3组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组,每组15只。除对照组外,其余组小鼠构建HIBD模型,并采用Longa评分评估小鼠神经损伤情况;电镜观察脑组织周围血管内皮细胞超微结构;EB法测定小鼠血-脑屏障通透性;qRT-PCR法测定各组小鼠脑组织LncRNA MEG3、miR-17-5p水平;Western blotting法测定小鼠脑组织ZO-1、Occludin蛋白水平。结果与对照组相比,模型组小鼠血管内皮薄厚不均、多处呈现水肿状态;与模型组相比,si-LncRNA MEG3组小鼠血管内皮细胞逐渐连接紧密、薄厚较为均匀,水肿减少;与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组血管内皮细胞损伤加剧。与对照组相比,模型组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,si-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著降低,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论LncRNA MEG3沉默可能通过上调miR-17-5p,降低HIBD新生小鼠血-脑屏障通透性,维持血-脑屏障对大脑的保护作用,保护脑组织。

miR-125a-3p和miR-17-5p在激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨激素性股骨头坏死中miRNA的差异性表达变化。方法取激素性股骨头坏死的坏死区域骨组织为实验组,其股骨颈基底部骨组织为对照组;分别提取总RNA并进行质检;采用miRNA芯片技术检测miRNAs的表达并对其表达谱进行分析;运用实时定量PCR对差异明显的miR-125a-3p和miR-17-5p进行验证。结果对激素性股骨头坏死中miRNA表达谱进行差异性分析。和对照组相比,实验组中倍数大于2倍,P<0.05的miRNA共有11个。8个miRNA表达上调,3个表达下调。实时定量PCR证实miR-125a-3p在坏死标本中高表达,而miR-17-5p呈现低表达,与miRNA芯片结果一致。结论激素性股骨头坏死区域骨组织与对照组相比miRNAs表达发生明显变化,以miR-125a-3p和miR-17-5p差异最为明显。这表明了它们最有可能参与了激素性股骨头坏死病理过程的调控。

miR-17-5p、miR-17-3p和miR-20a-5p在胃间质瘤中表达

目的探讨miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p在胃间质瘤(gastric stromal tumor,GST)中的差异表达及其与临床病理因素的关系。方法提取正常胃组织及GST组织共72例标本的总RNA,应用Real time RT-PCR方法检测miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p的表达,用SPSS 19.0分析其与临床病理因素的关系及3个miRNA间的相关性。结果在GST中,miR-17-3p、miR-17-5p在肿瘤组织中表达较胃正常组织低(P<0.001),但是在低危组和中高危组GST中表达差异无统计学意义(P>0.05);miR-20a-5p表达在胃正常组织、低危组和中高危组之间均有差异表达,且随着恶性度的增加而下降(P<0.001),3种miRNA的表达水平与肿瘤的侵袭、转移、年龄、肿瘤最大直径和核分裂象密切相关,而与瘤体是否破溃无关。结论 miR-17-5p、miR-17-3p、miR-20a-5p在GST中下调并相互作用可能是促进GST发生、发展因素之一。

miR-17-5p靶向PI3K/AKT信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨miR-17-5p靶向磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测HaCaT和A431细胞中miR-17-5p的表达。构建抑制miR-17-5p表达A431细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测PIK3R1、p-AKT、p-PI3K、细胞周期素(Cyclin)D1、Bax和Bcl-2蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因法和Western印迹验证miR-17-5p和PIK3R1的靶向关系。结果qRT-PCR检测结果显示A431细胞中miR-17-5p的表达显著高于HaCaT(P<0.05)。MTT法、流式细胞术和Western印迹结果证实在抑制miR-17-5p表达的A431细胞中,p-AKT、p-PI3K、CyclinD1和Bcl-2的表达明显下调,PIK3R1和Bax的表达显著上调,细胞的增殖活力减弱,凋亡率增加(均P<0.05)。PI3K/AKT信号通路激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1可以逆转抑制miR-17-5p表达对A431细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论miR-17-5p通过靶向下调PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡。

膀胱移行细胞癌E2F3、miR-17-5p、miR-20a的表达及相关性分析

目的检测E2F3、miR-17-5p、miR-20a在膀胱癌中的表达情况,分析E2F3与miR-17-5p、miR-20a之间是否存在关联性。方法荧光定量RT-PCR法检测不同病理分级膀胱移行细胞癌组织和细胞系5637、T24中miR-17-5p、miR-20a和E2F3基因的表达,Western blot检测E2F3蛋白的表达。结果与正常膀胱黏膜比较,膀胱移行细胞癌组织及5637、T24细胞系中E2F3、miR-17-5p和miR-20a均高表达(P<0.05)。E2F3表达随着病理分级的升高逐步增多,miR-20a表达随病理分级的升高有降低趋势。5637细胞系相对T24细胞系高表达E2F3(P<0.05)。结论膀胱移行细胞癌中miR-17-5p、miR-20a和E2F3均高表达,miR-20a和miR-17-5p的表达与E2F3的增高密切相关。

3β-羟基-16α,17α,21-三甲基孕甾-5-烯-20-酮的合成

Hydroxy-16α,17α,21-trimethyl-5-en-20-one was synthesized from 3α-acetoxypregna-5,16-dien-20-one and characterized by elemental analysis, 1H NMR, MS and IR. 16α,17α-Dimethyl steroid was formed by treatment of 3β-acetoxypregna-5,16-dien-20-one with methylmagnesium bromide, followed by reaction of the resulting 17(20)-enolate with methyl iodide. The main by- products were 3β-hydroxy-16α,17α-dimethyl-5-en-20-one. LHDMS([(CH 3) 3Si] 2NLi) and LDA([(CH 3) 2CH] 2NLi) were chosen as proper reagents for 21-position alkylation. The almost quantitative conversion of 16α,17α-dimethyl corticosteroid was achieved and the highest yield of the 16α,17α,21-trimethyl corticosteroid was 78%. The optimum reaction temperature was -20 ℃ for 16α,17α- dialkylation and was -50 ℃ for 21- position alkylation.

3β-羟基-5-雄甾烯-17β-羧酸甲酯的合成新法

以孕烯醇酮醋酸酯为起始原料 ,经溴仿反应、酯化反应制得 3β-羟基 - 5雄甾烯 - 17β-羧酸甲酯 ,总收率 6 9%。

3β-乙酰氧基-15β,16β-亚甲基雄甾-5-烯-17-酮的合成

在二甲亚砜、四氢呋喃或1,4—二氧杂环己烷溶剂中,当温度为12～30℃时,碘化三甲氧硫锤钅翁((CH3)3S+OI-)与氢化钠(NaH)作用1h生成甲基硫氧叶立德,再与3β 乙酰氧基雄甾 5,15 二烯 17 酮(Ⅱ)反应,产物经分离得到环丙化产物3β 乙酰氧基 15β,16β 亚甲基雄甾 5 烯 17 酮;探讨了反应物配比、反应温度、溶剂种类、加料方式对环丙化反应的影响.当反应温度为12℃,n((CH3)3S+OI-)∶n(NaH)∶n(Ⅱ)=1.10∶1.05∶1.00,加料方式为叶立德溶液加入到甾体溶液中,溶剂为二甲亚砜和四氢呋喃(体积比为4∶1)时,用重结晶法分离得产物,产率为80.5%.测试了产物的比位移值Rf、熔点、旋光度,并采用IR,MS和1HNMR等对产物进行了表征.

缺血性脑卒中患者血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平及其对中重度颅内外动脉狭窄预测价值

目的探讨缺血性脑卒中患者血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平及其对中重度颅内外动脉狭窄预测价值。方法选取2019年1月-2020年6月收治的缺血性脑卒中136例,根据颅内外动脉是否狭窄将其分为狭窄组(95例)和对照组(41例)两组,根据颅内外动脉狭窄程度将狭窄组分为轻度狭窄组(28例)、中度狭窄组(31例)和重度狭窄组(36例)3个亚组。比较狭窄组、对照组及轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组临床资料(一般资料、一般实验室指标和血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平),绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-17-5p和miR-27b-3p及二者联合检测对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值。结果狭窄组血清尿酸、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、miR-17-5p和miR-27b-3p水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血清尿酸、TC、LDL-C、miR-17-5p和miR-27b-3p水平轻度狭窄组和中度狭窄组低于重度狭窄组,轻度狭窄组低于中度狭窄组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值的曲线下面积血清miR-17-5p和miR-27b-3p及二者联合检测分别为0.677、0.688和0.804,血清miR-17-5p和miR-27b-3p二者联合检测明显高于单独检测(P<0.05)。结论血清miR-17-5p和miR-27b-3p水平与缺血性脑卒中患者颅内外动脉狭窄密切相关;缺血性脑卒中患者颅内外动脉狭窄程度越高,血清miR-17-5p和miR-27b-3p水平越高。血清miR-17-5p和miR-27b-3p联合检测对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值高于血清miR-17-5p和miR-27b-3p单独检测。

(2β,3α,5α,16α,17β)-2-(4-吗啉基)-16-(1-吡咯烷基)-3,17-二羟基-雄甾烷的合成工艺改进

以2α,3α,16α,17α-双环氧-5α-17β-乙酰氧基-雄甾烷为原料,三氟甲磺酸镱为催化剂,经两次环氧开环反应合成了罗库溴铵的关键中间体——(2β,3α,5α,16α,17β)-2-(4-吗啉基)-16-(1-吡咯烷基)-3,17-二羟基-雄甾烷,总收率64%,其结构经1H NMR,13C NMR和ESI-MS确证。

2β,16β-双哌啶基-5α-雄甾烷-3α-醇-17-酮的化学位移指认

标题化合物是维库溴铵合成中的关键中间体,采用1HNMR、13CNMR、DEPT、gCOSY、HSQC、HMBC等多种核磁技术,对其进行了全面分析,确证了它的结构,对它的各原子的1HNMR、13CNMR化学位移进行了准确指认,为其结构鉴定提供了重要依据。

3β-羟基-5-雄甾烯-17β-羧酸的合成

以孕烯醇酮乙酸酯为原料经溴仿化反应制得3β-羟基-5-雄甾烯-17β-羧酸,研究了它的反应条件,反应温度为20℃,收率92.6%。

MiR-17-5p调控STAT3信号通路在心肌慢性缺氧适应中意义的研究

目的探讨心肌慢性缺氧环境下,miR-17-5p的表达变化以及miR-17-5p对STAT3信号通路的调控对于缺氧心肌细胞的影响。方法 1选取新桥医院心外科2014年8月至2015年4月期间先心病患儿20例,其中紫绀型(年龄61.5±46.5月,术后诊断为法洛氏四联症)与非紫绀型(年龄43.2±32.1月,术后诊断为室缺伴右心室流出道狭窄)各10例。术中取右室流出道心肌组织作为标本,采用RT-PCR检测两组先心病患儿心肌组织miR-17-5p的表达情况。2建立大鼠源H9c2心肌细胞慢性缺氧适应模型,分为缺氧0、12、24、48、72 h组(n=5),RT-PCR分别检测各组miR-17-5p的表达。3脂质体转染antagomir miR-17-5p和agomir miR-17-5p至H9c2心肌细胞,建立过表达miR-17-5p和沉默miR-17-5p的H9c2心肌细胞系,慢性缺氧培养48 h,CCK8实验检测细胞增殖情况,TUNNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测STAT3,p-Tyr-705-STAT3及其下游调控蛋白c-myc蛋白表达。结果 1与非紫绀组(0.482±0.163)相比,紫绀组(1.450±0.705)患儿miR-17-5p表达明显升高(P<0.01)。2慢性缺氧细胞模型研究结果显示慢性缺氧时H9c2细胞miR-17-5p表达逐渐增高(P<0.01)。3缺氧环境下miR-17-5p过表达明显抑制p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达,引起心肌心肌细胞增殖受抑制,凋亡增加(P<0.01);而抑制miR-17-5p对p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达改变不明显,且对于心肌细胞的增殖和凋亡改变也不明显(P>0.05)。结论在心肌慢性缺氧过程中,miR-17-5p可能参与调控STAT3-c-myc信号通路,对于心肌细胞的存活和功能调节有重要意义。

丙型肝炎患者血清hsa-miR-17-5p和hsa-miR-223-3p表达及意义

目的探讨丙型肝炎(丙肝)患者血清hsa-mi R-17-5p和hsa-mi R-223-3p的表达情况及意义。方法采用实时荧光定量PCR检测30例丙肝患者和32例体检健康者血清hsa-mi R-17-5p和hsa-mi R-223-3p的表达水平。结果丙肝组血清hsa-mi R-17-5p相对表达量[1.96(1.27,2.82)]比体检健康组[1.29(1.01,1.52)]显著升高(Z=2.94,P<0.05),而丙肝组血清hsami R-223-3p相对表达量[0.29(0.22,0.39)]比体检健康组[0.56(0.45,0.64)]显著降低(Z=4.21,P<0.05)。体检健康组hsa-mi R-17-5p表达水平与丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性均无相关性(r分别为0.316和0.073,P>0.05);hsa-mi R-223-3p表达水平与ALT和AST活性亦无相关性(r分别为0.063和0.121,P>0.05)。而丙肝组hsa-mi R-17-5p表达水平与ALT和AST活性存在正相关(r分别为0.985和0.972,P<0.05);hsa-mi R-223-3p表达水平与ALT和AST活性存在负相关(r分别为-0.446和-0.450,P<0.05)。结论丙肝患者血清hsa-mi R-17-5p和hsa-mi R-223-3p表达失调,hsa-mi R-17-5p有望成为判断丙肝患者肝损伤的潜在分子标志物。

辽河断陷齐3-17-5块莲花油层储层“四性”关系研究

辽河断陷齐3-17-5块莲花油层储层主要为湖底扇相沉积,通过对取心井的岩性统计分析,研究区储层主要以砂砾岩、粗砂岩、中砂岩、细砂岩及粉砂岩等为主。通过对该段储层测井、录井、岩心和试油等资料的收集、整理、校正、分析,开展了储层特性和油水层解释标准研究,总结出该地区储层的四性关系,并建立了储层油、气、水、干层的解释标准及解释图版,确定出油层的有效厚度下限标准,为储层参数模型建立和油气层识别打下了坚实的基础。

辽河盆地齐3-17-5块微幅度构造成因研究及其对区块开发的意义

油田地质综合研究的结构研究是一个重要组成部分的内容,3-17-5块之前的结构图等高线间距比较粗糙很难准确地反映较小的变化。它不是一种微观的结构图。将等高线间隔定为5m才能为进一步精细解释油藏,并对其结构进行分析和研究。利用钻井及动态资料,结合三维地震资料,对齐3-17-5块进行了微幅度构造(以下简称微构造)特征的研究,依据微构造形态将其划分为正向微构造、负向微构造和斜坡微构造,其具体包括小高点、小断鼻、小槽沟、小断沟等,从而分析出微构造形成原因,及其对区块进一步开发的深远意义。

miR-17-5p通过IL-6/STAT3信号通路对髓核细胞外基质降解的调控作用

目的miR-17-5p在多种组织中都有异常表达,但其在椎间盘退变中的作用及潜在机制尚未明确。方法提取人正常髓核组织与退变髓核组织RNA,通过实时荧光定量PCR方法比较两组样品之间miR-17-5p的表达水平。以白细胞介素6处理人髓核细胞,RT-PCR检测处理前后细胞内miR-17-5p、白细胞介素1、肿瘤坏死因子ɑ、基质金属蛋白酶3基因表达的变化。随后分别用miR-17-5pinhibitor、mimic处理髓核细胞并通过RT-PCR技术检测了IL-1、IL-6、TNF-α的表达水平,此外,Western blotting检测蛋白聚糖、II型胶原蛋白以及炎症通路下游蛋白p-STAT3、MMP-2表达情况。结果RT-PCR结果显示,正常髓核组织相比,退变髓核组织退变的髓核组织中miR-17-5p表达显著降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,miR-17-5pmimics组miR-17-5p的表达明显高于对照组(P<0.01),而WB验证发现,miR-17-5p inhibitor组中蛋白聚糖和II型胶原蛋白与对照组相比生成量显著减少,p-STAT3和MMP-2表达明显增加(P<0.01)。结论miR-17-5p低表达通过IL-6/STAT3通路促进了炎症介质的释放,加速了髓核细胞外基质的降解。