牵牛全草的化学成分研究(Ⅱ)

目的:研究牵牛全草Pharbitis nil(L.)Choisy的化学成分。方法:用无水乙醇浸泡后浓缩得到的浸膏分别用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取,萃取物使用柱层析、HPLC制备、重结晶等方法对牵牛全草乙醇提取物进行分离纯化,依据理化性质和光谱分析鉴定各单体化合物结构。结果:从牵牛全草乙醇提取物的醋酸乙酯和正丁醇部分分离得到10个化合物,分别为:2-甲氧基对苯二酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),红景天苷(2),(6S,9R)-roseoside(3),ampelopsisionoside(4),尿嘧啶(5),尿嘧啶核苷(6),顺式阿魏酸酰对羟基苯乙胺(7),对羟基桂皮酸酰对羟基苯乙胺(8),阿魏酸酰对羟基苯乙胺(9),胡萝卜苷(10)。结论:化合物1～4,6为首次从该植物中分离得到。

GC法同时测定牵牛子脂肪油中5种脂肪酸

目的测定牵牛子脂肪油中的棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸。方法采用毛细管气相色谱法,对被测成分甲酯化后测定。色谱柱为DB-Wax毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm);检测器为FID;程序升温,起始温度170℃,以10℃/min升至230℃后,保持5 min;分流比15∶1。结果棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸质量浓度分别在0.04～0.57 mg/mL(r=0.999 6)0,.01～0.18 mg/mL(r=0.999 6),0.02～0.35 mg/mL(r=0.999 8),0.05～0.82 mg/mL(r=0.999 7)0,.004～0.06 mg/mL(r=0.999 4)范围内,与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.5%,96.4%,97.2%9,8.2%9,5.7%。结论本法简便、准确,重复性好,可用于牵牛子脂肪油的质量控制。

黑丑提取物的体内外抗肿瘤活性及其初步机制

目的探讨黑丑提取物的抗肿瘤活性,并对其作用机理进行研究。方法应用MTT法考察黑丑提取物在体外对人肝癌细胞BEL-7402、结肠癌细胞HCT-8、肺癌细胞A-549的细胞毒效应。为明确其体内抗肿瘤疗效,建立了Lew is肺癌的小鼠模型,通过对比各组小鼠的相对肿瘤增殖率、肿瘤生长曲线、抑瘤率、瘤重等指标考察黑丑提取物的抑瘤效果。通过G-四链体的稳定性实验,初步探讨了黑丑的抗肿瘤作用机制。结果黑丑提取物在体外对上述3种肿瘤细胞均具有抑制作用,对人肺癌细胞A-549的IC50值为30.19μg/ml。在体内的抗肿瘤药效实验中亦表现出明显的抗肿瘤活性,且其可有效稳定G-四链体结构。结论黑丑提取物在体内外均具有明显的抑瘤作用,并可通过稳定G-四链体结构进而抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,最终导致肿瘤细胞凋亡。

海水胁迫对牵牛种子萌发的影响

利用不同浓度的海水处理牵牛种子,观察、分析海水胁迫对牵牛种子萌发的影响。结果表明,30%浓度(体积分数,下同)以下的海水对牵牛种子的发芽率影响不大,当海水浓度达到50%时牵牛种子的发芽率仍有85%;发芽势、发芽指数和活力指数三项指标在10%的海水浓度时基本达到最大,而活力指数在海水浓度为20%时仍超过对照,并且差异显著。试验结果表明,牵牛种子发芽对20%浓度以下的海水具有较强的抗胁迫能力。

裂叶牵牛地上部分挥发油化学成分与生物活性研究

目的研究裂叶牵牛地上部分挥发油的化学成分及其生物活性。方法采用超临界CO2萃取法,得到裂叶牵牛地上部分中的挥发油,并通过气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析其化学成分;研究挥发油对肿瘤细胞MGC-803和A549体外增殖抑制活性,及其抗氧化活性。结果裂叶牵牛地上部分挥发油中已鉴定出的组分占挥发油总量的91.43%,主要成分有1-碘十八烷(29.71%)、二十九烷(17.02%)、亚麻酸(9.91%)等;裂叶牵牛地上部分挥发油质量浓度在200μg/mL时,自由基清除率为29.3%,对肿瘤细胞MGC-803和A549体外增殖的抑制率分别为55.6%和57.4%。结论裂叶牵牛地上部分挥发油没有表现出较好的抗氧化活性,但对肿瘤细胞MGC-803和A549的体外增殖具有一定的抑制作用。

野生大花牵牛变异植株快速繁殖的研究

以花期长的野生大花牵牛生长点为试材,进行了生长点的生长和分化、试管苗的生根和生根继代培养、试管苗的移植的研究,建立起野生大花牵牛生长点的快速繁殖技术。结果证明:1/2MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA是生长点生长培养的理想培养基;MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA是生长芽分化培养和分化继代的理想培养基;1/2MS+0.1 mg/L IBA是试管苗生根和生根继代培养的理想培养基。试管苗在温室营养钵的河沙中易移栽成活,移植成活的试管苗长势旺盛,并保持了花期长的有利变异性状。

牵牛子不同提取物对小鼠急性毒性的比较研究

目的:探讨中药牵牛子石油醚、氯仿、正丁醇提取物对小鼠急性毒性。方法:制备牵牛子石油醚、氯仿、正丁醇提取物,采用急性毒性替代法-上下法进行毒性比较。结果:牵牛子石油醚、氯仿、正丁醇提取物均不同程度表现出了急性毒性症状,按生药量计算的半数致死量(LD50)分别是455g/kg,32g/kg,9g/kg。结论:牵牛子不同提取物对小鼠的急性毒性强度为正丁醇部位>牵牛子氯仿部位>石油醚部位。

植物细胞吸收镉的机理及镉对植物气孔发育的影响

镉(Cd)是对动植物有严重危害的一种重金属,但关于它如何进入细胞以及它对植物发育影响的研究很少。通过观察Cd暴露下的3种植物——凤仙花、牵牛花、紫茉莉的生长状况,用台盼蓝染根细胞核和通过叶表皮造模技术观察气孔变化,初步研究了Cd进入细胞的可能途径,提出了Cd进入植物体内的细胞模型,并观察了Cd对气孔发育的影响。结果表明:Cd环境暴露下,用台盼蓝染色凤仙花的根可使其根毛细胞核染色,而对照不被染色。根据三种植物在Cd暴露条件下的生长状况和植株死亡时的表现,提出了Cd进入细胞的模型:Cd首先与细胞膜上的蛋白质结合,使细胞膜上形成可以允许Cd2+或其他离子进出细胞的孔,Cd通过扩散进入细胞;与膜蛋白结合的Cd为可逆结合,依据Cd浓度形成平衡。Cd影响气孔的开闭和发育。当Cd浓度变化时,气孔闭合率也发生变化。在叶子的发育中,如果有Cd的存在,气孔的发育偏离原有的进程,牵牛花叶子的副卫细胞消失,同时气孔数量减少。对Cd敏感的凤仙花的气孔密度严重减少,紫茉莉和牵牛花气孔则少量减少。同时叶表皮细胞壁的弯曲形状也发生较大变化,表皮细胞也明显变小。

基于DNA条形码技术探讨中药牵牛子的基原物种问题

目的对中药材牵牛子的基原物种问题进行探讨,以确保药材来源的准确及临床疗效的稳定。方法以核基因片段ITS2序列及叶绿体基因间隔区序列psbA-trnH作为DNA条形码,对研究材料进行PCR扩增并双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,用软件MEGA6.0进行相关数据分析,并构建NJ(邻接)树。结果圆叶牵牛、牵牛及裂叶牵牛ITS2序列种内遗传距离为0,没有遗传差异,而圆叶牵牛与牵牛、裂叶牵牛遗传距离均为0.106,牵牛与裂叶牵牛之间遗传距离为0.018。psbA-trnH序列比对后,牵牛、裂叶牵牛与圆叶牵牛样品间序列完全相同,无碱基差异。结论牵牛和裂叶牵牛亲缘关系密切,但基于两者间稳定的形态差异及遗传变异,不适宜简单处理为同一物种,可作为变种关系或近期分化的近缘物种。ITS2序列作为DNA条形码可为有效解决牵牛子基原物种问题提供重要依据。