GRIM-19及其靶基因产物STAT3在胃癌组织中的表达及其意义

目的:探讨维甲酸-干扰素诱导死亡相关基因-19(GRIM-19)及其靶基因产物STAT3在胃癌组织中的表达及其临床意义,阐明其在胃癌发生和发展过程中的作用。方法:应用RT-PCR、免疫组织化学染色法和Western blotting法检测48例胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中GRIM-19和STAT3的mRNA及蛋白表达水平,并分析其蛋白的表达情况与临床病理特征的关系。结果:GRIM-19 mRNA及蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织较正常胃组织表达减弱(P<0.01),且GRIM-19蛋白表达水平与胃癌分化程度和临床分期有关联(P<0.01);STAT3 mRNA及蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织较正常胃组织表达增强(P<0.01),且STAT3蛋白表达水平与胃癌分化程度、淋巴结转移及临床分期有关联(P<0.01);GRIM-19与STAT3在胃癌组织中表达水平呈负相关关系(r=-0.396,P<0.01)。结论:在胃癌组织中有STAT3持续高表达和GRIM-19低表达共存现象,可能与正常细胞发生恶性转化和异常增殖有关,促进了胃癌的发生和发展。

GRIM-19在小鼠植入前胚胎中的表达及其作用

目的通过研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因(GRIM-19)在小鼠植入前胚胎中的表达及其与胚胎质量之间的相关性,探讨GRIM-19在小鼠植入前胚胎发育中的作用。方法采用实时定量PCR,检测小鼠植入前胚胎(2-细胞期、4-细胞期、8-细胞期、桑葚胚和囊胚)中GRIM-19 mRNA水平(n=16);将小鼠8-细胞期胚胎按卵裂球大小、形态、透明带、胞质碎片分为优胚组和非优胚组,分别检测两组胚胎GRIM-19mRNA水平,并分析其相关性(n=13);制作假孕鼠(23只),并随机分为A组(12只)和B组(11只),采用移植器将优质和非优质8-细胞期胚胎移入假孕鼠的子宫内,观察两组雌鼠妊娠率及产仔率。结果 GRIM-19在小鼠植入前各期胚胎中均有表达,其mRNA水平从2-细胞期逐渐增高,至8-细胞期达高峰,随后呈下降趋势。优质8-细胞胚胎的GRIM-19 mRNA水平明显高于非优胚组(P<0.05)。两组8-细胞胚胎移植后,A组雌鼠妊娠率及产仔率显著高于B组雌鼠(P<0.05)。结论小鼠植入前胚胎中GRIM-19的表达量随发育时程的改变而变化,且与胚胎质量密切相关。

干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因19表达与紫外线诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的关系

背景长期暴露于紫外线照射的环境中可通过破坏细胞线粒体的跨膜电位等机制促进相应组织中的细胞凋亡，包括人晶状体上皮细胞（LECs）。干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）位于线粒体呼吸链Ⅰ上，与紫外线照射诱导的LECs凋亡过程是否有关尚不明确。目的探讨GRIM-19与长波紫外线照射诱导的人LECs损伤的关系。方法将人LECs系SRA01／04用常规培养方法在含质量分数10％胎牛血清的α-MEM培养液中进行培养，当细胞生长至对数生长期并达到80％融合时用长波紫外线照射，时间分别为5、10、15、20、25min，长波紫外线剂量分别为30、60、90、120、150mJ／cm^2，照射后继续培养1h，对照组细胞与实验组培养方法相同，但不用长波紫外线照射。采用流式细胞技术测定各组培养的凋亡率，应用Westernblot法检测各组培养上清液中GRIM-19蛋白的表达强度和相对表达量，采用单因素方差分析法对不同组间LECs凋亡率和GRIM-19蛋白相对表达量的差异进行比较，用Pearson积矩线性相关分析法评估LECs凋亡率与GRIM-19蛋白相对表达量的关系。结果不同剂量的紫外线照射培养的LECs后各组细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义（F=149．32，P〈0．01），其中60、90、120及150mJ／em。紫外线照射组与对照组比较，细胞凋亡率均明显增加，差异均有统计学意义（q=-17．02、-25．20、-29．41、-8．61，P〈0．01）。不同剂量的紫外线照射培养的LECs后细胞上清液中GRIM·19的表达明显增强，各组LECs上清液中GRIM-19的相对表达量（GRIM-19／β-actin）的总体差异有统计学意义（F=6．87，P〈0．05），其中60、90、120、150mJ／cm。紫外线照射组细胞上清液中GRIM-19的相对表达量分别为2．01±O．76、2．98±1．80、3．97±1．61和2．42±1．28，均明显高于对照组的0．56±0．23，差异均有统计学意义（q=-4．12、-5．04、-7．09、-3．85，P〈0．01）。Pearson积矩线性相关分析结果表明，LECs上清液中GRIM-19蛋白的相对表达量与LECs凋亡率呈正相关（r=0．7I，P〈0．01）。结论正常人LECs中可见GRIM-19的表达，但紫外线引起的人LECs凋亡过程与细胞中GRIM-19的表达上调-致；GRIM-19蛋白相对表达量与长波紫外线照射呈剂量依赖性。

细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤CHG-5细胞中的表达

目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染CHG-5细胞后Western免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达。结果连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用。Ad-GRIM19及Ad-EGFP初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010U/ml与8×1010U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤CHG-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高。结论成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础。

干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠植入前胚胎中的表达

目的研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)在小鼠植入前胚胎中的表达情况,探讨GRIM-19在早期胚胎发育中的动态变化。方法采用Western blot分析和Real-time PCR检测小鼠植入前胚胎(2-细胞期、4-细胞期、8-细胞期、桑葚胚和囊胚期)中GRIM-19蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在小鼠植入前各期胚胎中均有表达,其蛋白和mRNA水平从2-细胞期逐渐增高,至8-细胞期达高峰,随后呈下降趋势。结论小鼠植入前胚胎中GRIM-19的表达量随发育时程的改变而改变,提示GRIM-19在早期胚胎发育过程中具有一定的作用。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在十二指肠癌中的表达及其意义

目的:研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)及其靶基因产物信号转导和转录活化因子3(STAT3)在十二指肠癌中的表达,探讨其在十二指肠癌发生和发展中的作用。方法:32例十二指肠癌组织和30例十二指肠炎及溃疡对照组织,采用免疫组织化学方法检测其GRIM-19及STAT3蛋白表达情况。结果:十二指肠癌组织GRIM-19蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达减弱(P<0.05),且与十二指肠癌的分化程度有关(P<0.01);十二指肠癌组织STAT3蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达增强(P<0.01),且与十二指肠癌的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.01);十二指肠癌组织中GRIM-19与STAT3表达呈负相关(r=-0.470,P<0.01)。结论:GRIM-19蛋白在十二指肠癌组织中的低表达或缺失与十二指肠癌的发生和发展密切相关。十二指肠癌组织中有GRIM-19低表达与STAT3高表达共存现象。

GRIM-19蛋白在乳腺癌组织中的表达

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导的细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)在乳腺癌组织中的表达,分析其与乳腺癌的关系。方法应用免疫组化S-P法检测50例正常乳腺组织及50例乳腺癌组织中GRIM-19蛋白的表达。结果乳腺癌组织中GRIM-19蛋白的阳性表达率为26.00%,明显低于正常乳腺组织的84.00%(P<0.05);GRIM-19蛋白表达水平与乳腺癌TNM分期和组织分化程度有关(P<0.05)。结论GRIM-19的低表达可能与乳腺癌的发生发展密切相关。

食管鳞癌组织中GRIM-19的表达及意义

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因(GRIM-19)在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法检测50例食管鳞癌组织、50例正常食管黏膜组织、30例癌旁不典型增生组织中GRIM-19蛋白表达;应用原位杂交法检测50例食管鳞癌组织、50例正常的食管黏膜组织、30例癌旁不典型增生的组织中GRIM-19 mRNA的表达。结果 GRIM-19蛋白、mRNA在食管鳞癌组织中阳性表达率明显低于癌旁不典型增生组织以及正常的食管黏膜组织,三者比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。GRIM-19蛋白、mRNA的阳性表达率与肿瘤浸润深度、淋巴结转移均有关(P均<0.05),而与患者的性别、年龄均无关(P均>0.05)。结论 GRIM-19表达与食管鳞癌发生、发展有关,其表达的降低可能促进食管鳞癌的发生、发展。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在胰腺癌组织中的表达及相关性研究

应用RT-PCR和Western Blotting法检测干扰素/维甲酸联合诱导细胞死亡相关基因-19(GRIM-19)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)mRNA及蛋白在26例胰腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析两者的相关性。结果显示,胰腺癌组织中GRIM-19mRNA及蛋白表达水平低于癌旁组织(P<0.01);胰腺癌组织中STAT3mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.01);两者的表达呈负相关(r=-0.426,P<0.01)。因此,GRIM-19在胰腺癌中呈低表达,而STAT3呈高表达,这种异常表达与胰腺癌的发生发展密切相关。

食管鳞癌组织中GRIM-19的表达及意义

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法运用免疫组化技术检测68例食管鳞癌、35例癌旁不典型增生及68例正常食管黏膜组织中GRIM-19蛋白表达;采用TUNEL方法检测食管鳞癌组织中的细胞凋亡。结果 1)GRIM-19蛋白在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为80.9%(55/68)、34.3%(12/35)和11.8%(8/68),两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);2)食管鳞癌组织中肿瘤细胞的凋亡与GRIM-19蛋白表达有关,GRIM-19蛋白阳性表达组中肿瘤细胞AI为(5.06±0.93)%,显著高于阴性表达组的(1.12±0.06)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GRIM-19蛋白的低表达可能与食管鳞癌的细胞凋亡有关。

GRIM-19在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨GRIM-19在肝细胞癌组织中表达的临床意义.方法:用RT-PCR检测40例肝细胞癌及非癌组织中GRIM-19mRNA表达水平,用免疫组织化学pv二步法和Westernblot检测40例肝细胞癌及非癌组织中GRIM-19蛋白的表达情况,分析GRIM-19与临床病理特征的关系.结果:GRIM-19mRNA在肝细胞癌的表达明显低于非癌组织(0.40±0.31vs0.56±0.67,P<0.05).GRIM-19蛋白主要定位于细胞质,肝细胞癌中的阳性率明显低于非癌组织(47.5%vs80%,P<0.05).GRIM-19蛋白在肝细胞癌的表达低于非癌组织(0.30±0.29vs0.57±0.10,P<0.05).在肝细胞癌组织中,GRIM-19的表达在临床分期为Ⅰ+Ⅱ与Ⅲ+Ⅳ组间、门脉有癌栓与无癌栓组间均有统计学差别(0.57±0.38vs0.30±0.20;0.04±0.02vs0.44±0.32,均P<0.05);GRIM-19的表达与AFP数值呈负相关(r=-0.352,P<0.05).结论:GRIM-19表达下降,是肝细胞癌发生过程的重要事件,可能与肝细胞癌的发生、发展、侵袭等有关.

信号转导和转录激活因子3及调控基因与卵巢癌

信号转导和转录激活因子3(STAT3)是细胞因子和生长因子受体信号的下游基因,不仅参与人体的正常生理过程,而且与肿瘤的生长、转移、浸润有关。研究发现,STAT3受到维甲酸-干扰素诱导的死亡相关基因19(GRIM-19),SOCS3,PTEN和PIAS3等基因的调控,其调控基因的异常表达将引起STAT3的持续激活和表达升高,导致肿瘤的发生、发展。在卵巢癌的发病机制中STAT3信号转导通路的持续性激活至关重要,其激活并且有基质金属蛋白酶类、Bcl-2家族成员、血管内皮生长因子、Her2基因的参与,在肿瘤的细胞抗凋亡、血管重建、浸润转移、药物耐药等过程中起重要作用,为卵巢癌免疫治疗方面提供新策略。

GRIM-19基因对肺腺癌耐药细胞株A549/DDP药物敏感性及相关基因表达的影响

目的:本研究旨在探讨干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因19(gene-associated with retinoid-interferon-induced mortality19,GRIM-19)对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP化疗药物敏感度及相关基因表达的影响。方法:采用脂质体法将重组质粒PIRES-Puro2-GRIM-19-Myc和空载体PIRES-Puro2-Myc分别转染顺铂(cisplatin,DDP)耐药的人肺腺癌细胞株A549/DDP。蛋白免疫印迹法检测亲本A549、耐药A549/DDP、转染GRIM-19基因的A549/DDP及转染空载体的A549/DDP细胞中GRIM-19蛋白的表达。MTT法检测稳定转染GRIM-19基因后A549/DDP细胞对多种化疗药物敏感度的改变。实时荧光定量-PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)法检测GRIM-19、信号转导子与转录激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)mRNA在稳定转染GRIM-19基因后A549/DDP细胞中的表达情况。结果:蛋白质印迹法检测结果显示,A549/DDP细胞转染GRIM-19基因后GRIM-19蛋白的表达上调;A549/DDP细胞较亲本A549细胞对DDP的耐药指数为16.86±1.32;A549/DDP细胞转染GRIM-19基因后,较转染空载体组A549/DDP细胞耐药性降低,耐药逆转倍数为3.70±0.91。转染GRIM-19基因后,A549/DDP细胞中STAT3、P-gp和VEGFmRNA表达均下调。结论:GRIM-19能增强DDP耐药细胞A549/DDP对化疗药物的敏感度,这可能与下调STAT3、VEGF和P-gp的表达具有相关性,GRIM-19可能成为逆转A549/DDP细胞耐药性的一条有效途径。

GRIM-19在胚胎停育患者绒毛组织中表达及其作用机制的研究

目的:探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因(gene associated with retinoidinterferon-induced mortality-19,GRIM-19)与胚胎停育的关系及作用机制。方法:选择50例胚胎停育患者为实验组,50例非意愿妊娠要求行人工流产的正常早孕患者为对照组。用免疫组织化学法对绒毛组织中GRIM-19进行定位检测;采用Western blotting和Real-time PCR检测绒毛组织中GRIM-19蛋白和mRNA水平。应用荧光探针JC-1测定绒毛细胞线粒体跨膜电位,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡率。采用GRIM-19-siRNA转染技术使HTR-8/SVneo细胞低表达GRIM-19,并测定转染后细胞线粒体跨膜电位与细胞凋亡率。结果:GRIM-19在所有患者绒毛中均有不同程度的表达,与对照组相比,实验组绒毛中GRIM-19蛋白和mRNA的表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。实验组绒毛细胞线粒体膜电位较对照组降低,细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后HTR-8/SVneo细胞线粒体膜电位明显降低、细胞凋亡率升高,较转染前均有统计学差异(P<0.05),且线粒体膜电位与细胞凋亡率之间存在着明显的负相关性(r=-0.754,P<0.01)。结论:GRIM-19在早期妊娠中起重要作用,而GRIM-19的低表达可能通过影响线粒体功能,增加细胞凋亡参与了胚胎停育的发生、发展。

干扰素／维甲酸联合应用诱导的细胞凋亡相关基因-19、信号转导与转录激活因子3、髓样细胞白血病-1表达与食管鳞癌细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨细胞凋亡相关基因-19、信号转导与转录激活因子-3（STAT3）、髓样细胞白血病-1（Mcl-1）表达与食管鳞癌细胞增殖和凋亡的关系及其机制。方法 采用免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法分别检测GRIM-19、STAT3、Mcl-1蛋白以及细胞核增殖抗原（Ki-67）在50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型组织以及50例正常食管黏膜组织中的表达；应用原位杂交法分别检测50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生和50例正常食管黏膜组织中GRIM-19、STAT3、Mcl-1 mRNA的表达；采用原位缺口末端标记法（TUNEL）方法检测食管鳞癌组织中肿瘤细胞的凋亡。结果 GRIM-19蛋白和mRNA在食管鳞癌组织中阳性率明显低于癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织（蛋白：χ2＝12.130，P＝0.000；mRNA： χ2＝11.830, P＝0.000）；信号转导与转录激活因子-3（STAT3）、Mcl-1蛋白和mRNA在食管鳞癌组织中的阳性率明显高于癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织（STAT3蛋白：χ2＝4.910，P＝0.000, STAT3 mRNA： χ2＝5.410, P＝0.000; Mcl-1蛋白：χ2＝4.970，P＝0.000, Mcl-1 mRNA： χ2＝5.370, P＝0.000）；GRIM-19蛋白阳性表达组中肿瘤细胞凋亡指数（AI）显著高于阴性表达组（F＝18.355，P＝0.048）；STAT3和Mcl-1蛋白阳性表达组中肿瘤细胞AI显著低于阴性表达组（STAT3蛋白阳性组：F＝19.003，P＝0.036；Mcl-1蛋白阳性组：F＝18.225，P＝0.044）；Ki-67的表达与GRIM-19蛋白、mRNA的表达呈负相关（r＝－0.712，P＝0.040）；与STAT3、Mcl-1蛋白、mRNA的表达均呈正相关（STAT3：r＝0.878，P＝0.039，0.041；Mcl-1：r＝0.653，P＝0.041）。结论GRIM-19低表达、STAT3和Mcl-1高表达可促进食管鳞癌细胞增殖，抑制其凋亡，GRIM-19可能通过下调STAT3表达，并进一步降低Mcl-1表达，从而影响食管鳞癌细胞增殖和凋亡。