羊胎盘提取残余物免疫肽制备工艺的优化

在羊胎盘提取功能活性物质后,测定残余物主要生化组分的基础上,以酶解免疫肽对小鼠脾细胞的单独刺激指数(SI)为评价指标,通过单因素优化、响应面法优化复合酶解羊胎盘提取残余物制备免疫活性肽的酶解工艺。结果显示:在酶添加量2 500 U/g蛋白,中性蛋白酶和风味蛋白酶复配比1.75∶1,酶解时间4 h,酶解温度45℃,p H 7.0和料液比1∶50(g∶m L)条件下,酶解产物的SI值达到0.261 2,较阳性对照增加494%。

采用不同蛋白酶制备羊胎盘抗氧化肽的研究

选取羊胎盘为实验材料,以水解度、多肽含量和DPPH自由基清除率为考察指标,采用生物酶法对羊胎盘酶解制备抗氧化肽进行了研究。采用8种蛋白酶,在最优的酶解条件下对羊胎盘进行酶解制备抗氧化活性肽。结果表明,风味蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解产物对DPPH清除的IC50分别为0.6420、0.7120和0.6781mg/m L。说明该三种酶对羊胎盘酶解制备抗氧化肽的效果比较好。

山羊胎盘肽对幼犬免疫功能和抗氧化功能的影响

将24只健康幼犬随即分成4组,一个对照组(n=6),3个实验组:小剂量(1mg/kg.bw)胎盘肽(Goat placenta peptide,GPP)组(n=6)、中剂量(2mg/kg.bw)胎盘肽组(n=6)、高剂量(4mg/kg.bw)胎盘肽组(n=6)。在口服羊胎盘肽的前1 d和连续口服羊胎盘肽10 d后的第1 d各组采血样一次,测定外周血白细胞数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量、血清溶菌酶活性、血清总抗氧化能力、血清谷胱甘肽过氧化物酶活性、血清超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。结果表明:连续给药10 d后实验组幼犬血液白细胞总数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量、血清中溶菌酶活性与给药前相比均明显增加,并且中剂量组、高剂量组与给药前相比差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01)。同时犬血清总抗氧化能力、血清谷胱甘肽过氧化物酶活性及超氧化物歧化酶活性均较给药前相比有所增强,血清丙二醛含量与给药前相比明显减少,并且中剂量组、高剂量组与给药前相比差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01)。实验结果提示中剂量(2mg/kg.bw)、高剂量(4mg/kg.bw)羊胎盘肽可提高幼犬的免疫功能和抗氧化能力,从而提高幼犬的抗病防病能力。

羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化

目的:从羊胎盘中分离纯化出具有免疫活性的小分子肽。方法:采用常规方法制备羊胎盘超滤液,利用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)对羊胎盘提取液进行分离纯化及纯度分析,并利用E-玫瑰花环实验对各组分进行免疫活性评价,利用Edman降解法对其组分进行N端测序。结果:利用RP-HPLC工艺成功分离出纯度较高的3种小分子肽,并确定其中两者具有免疫活性;对活性较强的肽进行测序、检索,结果表明为未知组分。结论:RP-HPLC是分离、分析活性肽类较理想的手段之一,并证实了羊胎盘含有具有免疫活性的小分子肽。

羊胎盘肽对犬免疫功能的影响

将24只幼犬随机分成4组,1个对照组(n=6),3个试验组(n=6),连续灌服羊胎盘肽10 d,前后各1 d各采血样1次,测定白细胞数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量及溶菌酶活性。结果表明连续给药10 d后幼犬血液白细胞总数、ANAE+淋巴细胞百分率、血清球蛋白含量、血清中溶菌酶活性与给药前相比均明显增加,并且中、高剂量组与用药前相比差异显著或极显著(P<0.05,P<0.01)。试验结果提示羊胎盘肽可提高幼犬的免疫功能。

胎次对奶山羊胎盘提取物抗氧化活性影响

旨在探讨不同胎次的奶山羊胎盘提取物抗氧化活性的差异,为其合理化应用提供技术依据。以1,1-二苯基-2-三硝基苦肼自由基(DPPH·)清除率、羟自由基(·OH)清除率为抗氧化肽活性评价指标,结合胎盘提取物中可溶性蛋白(Water-soluble protein,WSP)含量变化,比较不同存放条件随时间延长各指标的衰变情况,评价不同胎次羊胎盘提取物抗氧化活性优劣。结果表明:1)第1、2、3胎各胎盘提取物冷冻干燥后,其多肽含量分别为(0.201±0.03)、(0.270±0.02)、(0.193±0.02)mg·mg-1冻干粉;DPPH·清除率分别为32.75%、53.20%、37.97%;·OH清除率分别是35.45%、51.94%、39.35%;WSP含量分别为16.63%、23.87%、18.60%,表明第2胎胎盘提取物各指标最佳。2)各胎次提取物4℃保存时,随时间延长DPPH·清除率、·OH清除率、WSP含量3个指标保全率均明显优于常温存放(P<0.05)。3)4℃存放63d,第2胎提取物DPPH·清除率保全了78.85%;·OH清除率保全了71.93%;WSP含量保全率为77.36%。综上表明,第2胎胎盘提取物冷冻干燥,4℃存放比常温保存抗氧化活性好。

响应面法优化羊胎粉中抗氧化多肽制备工艺的研究

选用胃蛋白酶为水解酶,采用响应面法(RSM)优化羊胎粉水解条件,制备抗氧化多肽。研究反应温度、pH、酶与底物浓度比(w/w)对水解度(DH)和产物还原能力的影响,水解条件不同对水解度和铁还原力都有显著性影响(p<0.05)。结果表明,水解产物还原力最强的工艺条件为:温度36.48℃,pH1.05,酶与底物浓度比(w/w)2.03%。

羊胎盘免疫活性肽的制备及其活性

利用枯草芽孢杆菌在发酵过程中产蛋白酶的特点,对羊胎盘下脚料发酵制备羊胎盘免疫活性肽。以产物对小鼠脾脏淋巴细胞的刺激指数为指标,通过响应面法对发酵过程中的重要参数进行优化,考察了不同质量浓度下的发酵液单独和与LPS、ConA共同作用对小鼠脾淋巴细胞的刺激作用。采用超滤技术对发酵产物进行分离,研究不同分子质量范围的组分的免疫与抗氧化活性。研究表明：枯草芽孢杆菌发酵羊胎盘下脚料制备免疫活性肽的最佳发酵条件是：料液pH 5.42、碳源含量1.73%、发酵时间43.45 h,在该条件下的发酵液对小鼠脾淋巴细胞的刺激效果显著,当发酵液蛋白质量浓度为100μg/mL时,小鼠脾淋巴细胞的刺激指数达到23.26%,与LPS、ConA共同作用免疫效果显著,最适质量浓度分别为100,50μg/mL。超滤试验表明,不同分子质量组分的免疫活性和抗氧化活性不同,3-10 ku组分的免疫活性最高;3-10 ku和〈3 ku组分的抗氧化活性最高。