杜梨(Pyrus betulifolia Bge.)多糖提取工艺及其清除自由基活性

通过L9(33)正交试验获得杜梨(Pyrus betulaefolia Bge.)多糖最佳提取工艺。在运用紫外光谱、红外光谱及高效液相色谱等方法研究杜梨多糖(PBP)理化性质的基础上,进一步评价了PBP对羟自由基(.OH)、超氧阴离子自由基(O2-.)和1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基的清除活性。结果表明,在料液比为1∶15,90℃下提取5h的最优条件下,PBP提取率达到18.65%。多角激光光散射仪分析表明,PBP分子质量为392.9kD。单糖组成分析表明,PBP是由阿拉伯糖、半乳糖醛酸、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为49.54∶28.68∶8.81∶8.45∶4.54。PBP不仅具有清除羟自由基和超氧阴离子自由基活性,对DPPH自由基的清除活性更强。

杜梨养生保健价值浅谈

在广泛进行文献检索基础上,综述了杜梨的种属、成分及养生价值,为全民养生保健提供资料。

杜梨果实热水提取物对H_(22)小鼠的抗肿瘤作用

目的探讨杜梨果实热水提取物对H22小鼠的抗肿瘤作用。方法以H22(肝癌实体型)移植小鼠为模型研究杜梨果实热水提取物体内抗肿瘤作用,以及对脾脏、胸腺指数的影响。结果杜梨果实热水提取物对H22有显著的抑制作用,使荷瘤小鼠的脾脏、胸腺指数明显升高。结论杜梨果实热水提取物具有一定的抗肿瘤活性。

杜梨叶片多糖提取方法的研究

分别采用微波、水浴及超声波3种方法提取杜梨叶片多糖,用蒽酮-硫酸比色法测定多糖的含量。结果表明3种提取方法存在明显的差异,以超声波法提取效果最佳,其后依次是水浴及微波,3种方法提取多糖的含量分别是20.01%、10.41%和9.37%。

杜梨胆碱单加氧酶基因克隆及胁迫表达

为了解梨砧木—杜梨对非生物胁迫的防御机制,采用RT-PCR、RACE和长片段PCR技术从杜梨幼苗中获得1个甜菜碱合成相关的胆碱单加氧酶基因(PbCMO),运用生物信息学方法分析序列特点,并通过跨内含子引物进行半定量RT-PCR研究其在非生物胁迫下的表达情况。结果表明:(1)PbCMO基因cDNA序列编码区长1 227bp,编码由408个氨基酸组成的多肽。其对应基因组DNA序列长2 928bp,由10个外显子和9个内含子组成。其推导的多肽预测的等电点为6.19,相对分子质量为46.27kD,具备Rieske型铁硫[2Fe-2S]簇结合区域和非血红素单核态铁配位点序列,与枸杞CMO蛋白相似性最高(71%)。(2)PbCMO在幼苗根和叶中均为诱导型表达,100mmol/L氯化钠、10%(W/V)聚乙二醇、180mmol/L甘露醇或20μmol/L脱落酸处理后其表达量明显上调,表明PbCMO对盐碱、干旱、渗透胁迫和ABA均存在表达响应,可能参与杜梨应对非生物胁迫的转录调节。

杜梨叶片中氨基酸及矿质元素含量的测定

采用氨基酸分析仪测定了杜梨叶片中18种氨基酸,原子吸收分光光度法测定了12种矿质元素。分析结果表明,杜梨叶片氨基酸含量丰富,含有人体必需的8种必需氨基酸,氨基酸总量达到了11.68%;微量元素铜、锰、铁等的含量丰富,分别达到了7.847μg/g、33.97μg/g、375.17μg/g。

不同加工方法的棠梨叶中总多糖含量测定

用苯酚-硫酸法测定了棠梨叶两种加工制品的多糖含量。以葡萄糖为对照品,在波长490 nm处测定吸光度,在0.01968～0.0984 mg范围内吸光度与被测含量具有良好的线性关系。回收实验表明平均回收率为99.02%(n=5),相对标准偏差3.34%。在此条件下,不同加工方法所得棠梨叶总多糖含量测定结果分别为:日晒夜露传统制法7.82%,渥堆变红后日晒法5.27%。实验证明:棠梨叶总多糖含量较高,可作为富含多糖的药物资源加以开发利用。

杜梨生长期内韧皮部和叶片酚类物质含量变化及其相关性分析

以杜梨为试材,研究其新梢韧皮部和叶片生长期内酚类物质含量的变化及其相关性,并探讨了韧皮部中酚类物质含量与新梢生长变化的相关性。结果表明:测定期间杜梨新梢韧皮部中的总酚含量均显著低于叶片;从多酚组成上看,韧皮部以表儿茶素、儿茶素和芦丁等为主,叶片则以绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和根皮苷为主;总酚及各种多酚水平在树体生长期间的动态变化不同。相关性分析表明,所测8种多酚物质中,生长期内仅有绿原酸在韧皮部和叶片中的含量变化呈显著正相关,其余酚类物质无显著相关性;韧皮部中芦丁、槲皮素含量与新梢生长变化呈显著负相关,其余的多酚与新梢生长变化无明显的相关性。

不同加工方法杜梨叶中鞣质的含量测定

采用磷钼钨酸-干络素法对不同加工方法杜梨叶中鞣质的含量进行测定。室温浸提过夜提取鞣质,在磷钼钨酸与多酚类物质的显色反应进行到90～120 min时,于760 nm波长处,分别测定供试样品溶液中的总酚和不被吸收的多酚的吸光度,以吸光度之差用标准曲线法求得鞣质含量。在1～10μg/mL范围内,线性关系良好(r=0.997 9)。平均回收率为98.58%(n=6),RSD为0.51%。此条件下,未发酵的杜梨叶鞣质平均含量在0.60%,渥堆发酵的杜梨叶未检出鞣质。

北疆地区杜梨露地育苗技术探析

杜梨原产中国,是中国北方栽培梨的主要砧木资源,也用于园林绿化。总结了适合新疆北疆地区气候与土壤特点的杜梨露地育苗技术,从种子的采集、层积、播种、苗期管理以及分栽移植各环节提出了一套行之有效的技术体系,对梨农和育苗单位开展杜梨的规模化育苗有较强的指导意义。同时,这些育苗技术对于苹果等小粒果树种子的培育也有一定的参考价值。

杜梨实生繁殖群体遗传多样性的SSR分析

为了解不同数量杜梨实生群体组的遗传多样性,从59株人工培育的实生杜梨群体中随机抽取5、8、10、15、20、30和40株组成不同的群体组,利用29对SSR引物对杜梨不同群体遗传特性进行分析。结果表明:(1)7个不同的群体组的多态位点数120～253个、多态位点百分率47.00%～89.83%、Nei’s遗传多样性指数0.128 8～0.145 4、香农指数0.205 8～0.255 4、平均等位基因数1.470 0～1.988 3和有效等位基因数1.196 1～1.203 4。(2)各群体组与对照群体组的遗传多样性指数的比较结果表明,大于15株的群体组与对照群体组相比,群体大小对群体组内遗传多样性水平没有显著性影响。(3)通过对各群体组内的稀有等位基因数目及其变化(增加/减少)分析表明,群体大小可显著影响杜梨种质实生群体内稀有等位基因的数目变化,主要是减少稀有等位基因的数目。研究认为,杜梨种质保存、更新的适宜群体量为15株以上。

继代培养次数对杜梨生根能力和叶形态及其激素水平的影响

为了探索杜梨组培复幼变化规律,对10年生杜梨进行连续继代培养,统计不同继代次数杜梨丛生芽繁殖系数和生根率,观察记录叶片形态变化并测定内源激素含量。结果表明:(1)通过连续继代培养,杜梨丛生芽生根率由0提升到66.70%,繁殖系数由第1代的2.13提升到第10代的4.20。(2)叶片在继代第3次时出现裂刻且随后裂刻程度逐代加深;在继代过程中,丛生芽叶面积和叶脉数显著降低,叶周长和叶形指数呈先下降后上升的变化趋势。(3)丛生芽叶片内源IAA含量在继代第6次时达到46.39 ng·g-1,且显著高于初代丛生芽;随着继代次数的增加,叶片内源ZR呈先上升后下降的变化趋势,内源GA3含量没有发生显著性变化,而内源ABA含量逐渐降低;叶片IAA/ABA和IAA/ZR的值随着继代次数的增加而增加。(4)丛生芽叶片ABA含量和IAA/ZR与其生根率分别呈显著负相关和显著正相关关系,叶片裂刻数和IAA/ABA与生根率均呈现极显著正相关关系,而叶脉数与生根率则呈现极显著负相关关系。研究认为,连续继代培养可显著提高杜梨丛生芽的生根能力,并且与丛生芽叶形和激素含量及其比值有密切的关系,该研究结果为难生根植物无性繁殖以及树木复幼提供了重要技术借鉴。

杜梨根癌病原菌质粒类型鉴定及枯草芽孢杆菌对其抑制研究

以杜梨根瘤为试材,采用分子生物学方法、牛津杯法和指示植物接种法,研究了杜梨根癌病原菌的质粒类型及枯草芽孢杆菌对杜梨根癌病原菌的影响。结果表明:从1年生杜梨根部冠瘿瘤上分离、纯化、培养菌株,得到4株与根癌病原菌相似菌株,对之进行PCR扩增,此4株菌株均获得特异性目的条带,鉴定为根癌土壤杆菌胭脂碱类型。将病原菌接种指示植物向日葵幼苗,4株菌株均有致病性。经室内离体试验,供试的9株枯草芽孢杆菌对病原菌表现不同程度的抑菌效果;接种指示植物试验中,菌株9076和9161过滤发酵液能够完全抑制冠瘿瘤的生长。

起苗时间对杜梨生长的影响

对定植的杜梨 (PyrusbetulaefoliaBge .)苗进行了假植苗和随栽随起苗的成活率、新梢生长量、叶片生长状况和蒸腾速率、气孔阻抗、叶温、叶温与气温差日变化的测定。结果表明 ,随栽随起苗的成活率和生长状况与各项生理指标均好于假植苗。揭示了影响树木生长的水分生理状况和过程。提出了生产中要提倡采用随栽随起苗 ,或应尽量接近随栽随起的时间。

杜梨PbPEAMT的克隆、序列分析及表达特征

采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增法和长片段PCR技术,从杜梨幼苗中获得1个磷酸乙醇胺N-甲基转移酶基因(Pb-PEAMT),运用生物信息学方法分析它的序列特点,并通过跨内含子引物进行半定量RT-PCR研究其在非生物胁迫下的表达情况。结果表明:PbPEAMT基因编码区DNA序列长为3320bp,由11个外显子和10个内含子组成,cDNA序列长1479bp,推导的多肽包括2个II型甲基转移酶保守结构域,与蓖麻PEAMT蛋白相似性最高(86%),亲缘关系最近。PbPEAMT基因在杜梨幼苗根和叶中均为诱导型表达,100mmol.L-1氯化钠、10%(W/V)聚乙二醇、180mmol.L-1甘露醇或20μmol.L-1脱落酸处理后PbPEAMT表达水平上升,表明PbPEAMT对盐碱、干旱和渗透胁迫存在表达响应,可能参与ABA介导的逆境信号转导途径。

杜梨叶片多糖的超声-微波协同萃取法提取

采用超声-微波协同萃取法和常规水浴提取杜梨叶片多糖,并用蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量。结果表明,超声-微波协同萃取法提取杜梨叶片多糖效果更好,两种方法提取多糖的含量分别是21.52%和10.41%;葡萄糖浓度在25.15～100.6μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.38%,RSD为1.46%(n=5)。超声-微波协同萃取法可作为杜梨叶片多糖提取的首选方法,蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量的方法准确,重复性好。

不同炮制方法的杜梨叶中总黄酮含量测定

采用70%乙醇提取杜梨(Pyrus betulaefolia Bge.)叶中的总黄酮,探讨了以芦丁为对照品,Al(NO3)3为显色剂,分光光度法测定总黄酮的可行性。建立了NaNO2-Al(NO3)-NaOH与芦丁的反应体系,在510nm处测吸光度值,得回归方程Y=0.0024X+0.009,标准曲线相关系数r=0.9995,平均加样回收率98.1%,相对标准偏差0.98。在此条件下,不同炮制方法所得杜梨叶总黄酮含量测定结果分别为:日晒夜露传统制法8.32%,渥堆变红后日晒法6.45%。实验证明:杜梨叶总黄酮含量较高,可作为富含黄酮的药物资源加以开发利用,且从总黄酮含量看,传统的日晒夜露法优于渥堆变红加工法。

杜梨叶黄酮的提取工艺研究及其初步定性分析

目的:优化杜梨叶总黄酮提取的工艺及其初步定性分析。方法:研究了浸提温度、乙醇浓度、提取时间、料液比等因素对杜梨叶中黄酮类化合物提取效果的影响,和正交试验进行优化,所得结果采用方差分析。采用颜色反应的方法进行杜梨叶中黄酮的初步定性分析。结果:确定了最佳单因素水平,正交实验确定了以乙醇为浸提剂的最佳提取工艺条件为:乙醇体积分数60%,料液比1:22,温度80℃,浸提时间1h,在此条件下黄酮含量为5.03%。结论:杜梨叶中含黄酮类化合物,颜色反应试验表明,其成分主要集中在黄酮醇类和二氢黄酮类。

番石榴叶及棠梨降血糖作用的实验研究

目的通过对STZ诱导小鼠生成糖尿病模型评价番石榴叶、棠梨的降血糖作用。方法以STZ对小鼠造模、选取血糖≥11.1 mmol/L的小鼠作为糖尿病模型小鼠。根据血糖随机分组后[正常组、模型组、阳性对照组(格列齐特片)、番石榴叶高剂量组(10 g/kg)、番石榴叶低剂量组(5 g/kg)、棠梨高剂量组(5 g/kg)、棠梨低剂量组(2.5 g/kg)],灌胃给药15 d后,测定小鼠的空腹血糖和葡萄糖耐量。于小鼠葡萄糖溶液灌胃0、30、60、120 min进行眼眶静脉取血,测定各时间点血糖值,并计算血糖曲线面积。结果 STZ腹腔注射可导致小鼠血糖升高,体质量下降,糖尿病造模成功率高,维持时间较长,不易自我缓解。连续给药15 d,番石榴叶高、低剂量组,棠梨高、低剂量组,阳性对照组对糖尿病小鼠的血糖和葡萄糖耐受量有不同程度的影响。结论番石榴叶、棠梨流浸膏有不同程度降血糖作用,以番石榴叶效果较明显。