活化淋巴细胞与慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型的比较

目的 :将本室建立的用活化淋巴细胞诱导的系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型与国际上公认的用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型进行比较 ,进一步探索SLE的发病机理。方法 :分别将亲代Balb c小鼠淋巴细胞经静脉和用ConA活化的(Balb c×C5 7BL 6 )F1代小鼠淋巴细胞经皮下途径输入F1代小鼠 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)荧光核型和肾小球内免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法检测抗可溶性核抗原 (ENA)抗体。结果 :亲代淋巴细胞免疫F1代小鼠所致的慢性GVHR和活化F1代小鼠淋巴细胞均可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等ANA ,并且肾脏都有明显的IgG类免疫复合物沉积。但亲代淋巴细胞免疫组ANA核型以颗粒型、核仁型为主 ,ENA多肽谱多在 32、47、6 7kD处显色 ;而活化淋巴细胞免疫组以胞浆型、周边型、均质型为主 ,ENA多肽谱在 2 8、47、6 7kD处显色。结论 :这 2种方法均可诱导出SLE样综合征 ,但其抗核抗体谱有所不同。

慢性移植物抗宿主反应诱导SLE样小鼠模型

目的 运用慢性移植物抗宿主反应 (GVHR)诱导系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型 ,为进一步探索SLE发病机制奠定基础。方法 将亲代BALB/C小鼠淋巴细胞经静脉途径输入 (BALB/C×C57BL/ 6 )F1代小鼠体内 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗可浸出核抗原 (ENA)抗体。结果 亲代淋巴细胞所致的慢性移植物抗宿主反应可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等多种ANA ,免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。结论 运用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型 ,小鼠发病迅速 ,抗核抗体的产生与人SLE相似 。

小鼠全身类过敏试验方法及其评价标准的研究

药物类过敏性检测是一个国际性的难题,至今尚无一个成熟而可靠的动物模型或试验方法。为探索和建立一种适用于注射类药物临床前类过敏性评价的试验方法和评定标准,该研究根据静脉注射C48/80或聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Tween 80)导致的小鼠类过敏反应症状,整理出小鼠全身类过敏反应症状表,通过引入能表证类过敏症状强弱的症状强度系数(K)及其计算公式,制订了小鼠全身类过敏症状强度评定标准。以此评定标准为对照,筛选出组胺、类胰蛋白酶和Ig E等3个血液生物标志物作为评定药物类过敏性的实验室检测指标,建立了症状评定与血液指标检测联合评价小鼠全身类过敏性的试验方法。该试验方法评定类过敏性的特征:K值、血液组胺水平与C48/80或Tween 80静注剂量呈高度相关;血液组胺对数值升高与K值呈高度正相关;类胰蛋白酶水平表现为升高、持平或下降,其变化状态可能与受试物特性和取血时间有关;Ig E水平表现为持平或下降,但不会升高,此可明显区别于Ⅰ型过敏反应。在此基础上,选用碘海醇、碘普罗胺、紫杉醇以及血塞通注射液、注射用双黄连、生脉注射液等进行适用性考察,检测结果与临床实际用药后情况呈现高度的一致性。结果提示,小鼠全身类过敏试验方法敏感性高,特异性强,与临床一致性好,建议进一步验证和推广使用。

小鼠耳廓蓝染类过敏检测方法用于注射益气复脉(冻干)的质控研究

目的对小鼠耳廓蓝染类过敏检测法进行方法学的验证和优化,建立注射用益气复脉(冻干,YQFM)质控方法。方法小鼠1次性尾iv含0.4%依文思蓝(EB)的受试物,以耳廓蓝染发生率和EB渗出量作为类过敏评价指标,以Compound48/80为阳性对照,考察了方法的重复性、鼠耳萃取时间等影响因素,并对20140105和20140804两个批次YQFM(1 800 mg/kg)进行了耳廓蓝染类过敏试验。结果 Compound 48/80具有明显的致类过敏反应,模型稳定,重复性好;鼠耳在加入甲酰胺后室温下浸泡2~5 d进行萃取,EB含量未发生显著变化;YQFM 20140105和20140804两个批次均未发生类过敏反应。结论小鼠耳廓蓝染类过敏检测方法较稳定,可用于YQFM质量控制。

基于Lox P-Cre系统的Ronin基因造血系统条件性敲除小鼠模型的构建及鉴定

目的建立Ronin基因造血系统条件性敲除的小鼠模型。方法基于Lox P-Cre系统设计基因敲除策略,获得Roninflox/+(flanked by lox P)小鼠,分别与Vav-iCre+小鼠、Roninflox/+小鼠交配繁殖得到Roninflox/+Vav-iCre+小鼠和Roninflox/flox小鼠,再将后两种小鼠交配获得Roninflox/floxVav-iCre+小鼠。提取鼠尾组织DNA,PCR扩增后鉴定基因型,提取小鼠造血相关组织蛋白,Western印迹检测Ronin表达情况。结果 Roninflox/+Vav-iCre+小鼠与Roninflox/flox小鼠交配所得子代共51只小鼠中,Roninflox/floxVav-iCre+基因型小鼠仅1只,实际出生数量远低于理论值,且小鼠出生1周内死亡。Roninflox/+Vav-iCre+基因型小鼠可正常存活,其造血相关组织中Ronin表达低于野生型小鼠。结论该研究构建了造血系统特异缺失Ronin基因的小鼠,为研究Ronin在早期造血调控中发挥的作用提供了动物模型。