间充质细胞源性骨肉瘤中关键分子标志物鉴定及药物敏感性分析

背景:骨肉瘤发病机制复杂,预后较差,随着医疗技术的发展,其5年生存率有所改善,但仍未取得实质性进展。目的:筛选骨肉瘤中关键分子标志物,分析其与骨肉瘤治疗药物之间的关系,并从分子水平探讨骨肉瘤可能的疾病机制。方法:从基因表达谱数据库中获取GSE99671和GSE28425(miRNA),对GSE99671进行差异表达基因分析和加权基因共表达网络分析(WGCNA)。利用基因本体学(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分别对差异表达基因和与疾病正相关性最高的模块基因进行功能富集分析。将上述模块基因与差异表达基因取交集作为关键基因,构建蛋白质相互作用网络,使用CytoScape软件对关键基因进行相关性分析,筛选枢纽基因(Hub基因)。使用GSE28425数据集对Hub基因进行外部验证,同时对Hub基因进行文本验证。使用CellMiner数据库对Hub基因进行药物敏感性分析,依据关联系数的绝对值|R|>0.3,P<0.05作为阈值进行筛选。结果与结论:(1)差异表达分析获得529个差异表达基因,其中177个表达上调,352个表达下调;WGCNA分析共得到592个与骨肉瘤相关性最高的基因;(2)GO富集结果显示骨肉瘤的发生发展可能与细胞外基质、骨细胞的分化与发育、人体的免疫调控、胶原蛋白的合成与分解相关;KEGG富集结果显示PI3K-Akt信号通路、焦点黏附信号通路、免疫应答等参与骨肉瘤疾病的发生;(3)交集结果显示,共获得59个关键基因,经蛋白质相互作用网络分析,筛选得到8个Hub基因,分别为LUM、PLOD1、PLOD2、MMP14、COL11A1、THBS2、LEPRE1、TGFB1,且均为表达上调;(4)外部验证发现调控Hub基因的miRNA明显下调,其中hsa-miR-144-3p和hsa-miR-150-5p的下调最为显著;文本验证结果显示Hub基因的表达与既往研究基本一致;(5)药物敏感性分析发现甲氨蝶呤、异环磷酰胺、帕博西尼的活性与PLOD1、PLOD2、MMP14的mRNA表达呈负相关关系;而唑来膦酸、雷帕霉素的活性与PLOD1、LUM、MMP14、PLOD2、TGFB1的mRNA表达呈正相关关系,提示唑来膦酸和雷帕霉素有望成为骨肉瘤的潜在治疗药物,但仍需进一步基础实验和临床研究加以验证。

念珠菌菌血症病原菌特点及短期预后风险预测评分模型的构建与验证

目的分析念珠菌菌血症的病原菌特征,构建并验证其短期死亡风险预测评分模型。方法回顾性分析2011年1月1日-2020年12月31日联勤保障部队第909医院收治的念珠菌菌血症患者的临床资料,分析病原菌构成、药敏试验结果和住院患者发生率。选取念珠菌菌血症324例随机纳入建模组(190例)、验证组(134例),采用二元logistic回归筛选危险因素,依据比值比(OR)赋分,构建30d死亡风险预测评分模型。运用预测评分模型对建模组、验证组进行评分,验证预测模型的预测效能。结果336例念珠菌菌血症患者共检出念珠菌356株,其中白色念珠菌126株(35.39%),热带念珠菌79株(22.19%),近平滑念珠菌74株(20.79%),光滑念珠菌48株(13.48%),季也蒙念珠菌14株(3.93%),克柔念珠菌8株(2.25%),其他念珠菌7株(1.97%);住院患者念珠菌菌血症发生率从2011年的0.20‰上升到2020年的0.48‰。念珠菌对两性霉素B耐药率明显低于氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑(P<0.05)。纳入模型分析的324例中,确诊后30d死亡95例,病死率29.32%;建模组男性、发热、肠外营养占比明显高于验证组(P<0.05),慢性肺病、1个月内手术史占比均低于验证组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,慢性肾衰竭、机械通气、重度中性粒细胞降低、72h内未接受抗真菌治疗、急性生理和慢性健康状况Ⅱ评分(APACHEⅡ)≥20分为念珠菌菌血症短期死亡的危险因素(P<0.05),OR值分别为3.179、1.970、2.979、2.080、2.399,风险赋分分别为6、4、6、4、5。风险评分模型对建模组ROC曲线下面积(AUC)为0.792(95%CI 0.721~0.862),Hosmer-Lemeshow(H-L)检验结果为P=0.305;验证组AUC为0.796(95%CI 0.735~0.898),H-L检验结果为P=0.329。风险评分≤8分为短期死亡低风险组,评分9~15分为中风险组,评分≥16分为高风险组。结论住院患者念珠菌菌血症发生率呈上升趋势,病死率较高;构建的念珠菌菌血症短期死亡风险预测评分模型预测效能较好。

人实体瘤抗癌药物敏感试验MTT法的建立

本文探讨用MTT法进行人实体瘤抗癌药敏试验的条件和影响因素,结果表明该法之最适肿瘤细胞浓度为0.5—1×10~5个/孔,最适培养时间为三天.167例实体瘤的八种抗癌药物敏感试验结果说明其与肿瘤细胞生长特性、病理类型和肿瘤标本取材部位等因素有关.MTT法有操作简单、重复性好、成功率较高。

人肺癌细胞原代培养药敏检测及4种耐药相关蛋白表达的研究

目的 采用MTT法对人肺癌细胞药物敏感性进行研究。方法 对 2 6例外科手术标本进行原代细胞培养 ,用MTT法对培养成功者进行阿霉素 (ADM)、顺铂 (DDP)、长春新碱 (VCR)和足叶乙甙 (VP16) 4种化疗药的药敏实验 ,并应用免疫组化法检测其中 10例肺癌组织TOPOⅡ、p5 3、bcl 2和GST π的表达。结果 2 1例培养成功者药敏检测表明ADM、DDP、VCR和VP164种化疗药的有效率分别为 19 0 %、3 8 1%、2 3 8%和 2 3 8%。 10例对上述 4种化疗药有不同程度耐药的肺癌组织有不同程度TOPOⅡ、p5 3、bcl 2和GST π的表达。结论 用手术切除的肺癌组织进行肿瘤细胞原代培养和MTT法检测细胞对化疗药物的反应性是可行的 ,药敏实验的结果对临床用药具有提示作用。检测手术肺癌组织的TOPOⅡ、p5 3、bcl 2和GST π表达 。

癌性胸腹水抗癌药物敏感试验的研究

对５８例癌性腹水及２５例癌性胸水用ＭＴＴ法进行抗癌药物敏感试验。用临床常规方法收集胸腹水，并用肝素抗凝（１０ｕ／ｍｌ）；用不连续密度梯度离心去除渗出液中红白细胞，制成肿瘤单细胞悬液，进行药敏测试。同时观察到卵巢癌患者的实体瘤与腹水之间的肿瘤细胞存活率无统计学意义的不同，相关性较好。应用药敏结果进行胸腹腔给药治疗，效果较好，６０％～７０％患者胸腹水近期得到控制，这对于延长患者生命是有益的。

顺铂、5-氟尿嘧啶、长春新碱配伍对人肝癌细胞株(7721)的相互作用

目的:观察顺铂、5-氛尿嘧啶、长春新碱配伍在体外对人肝癌细胞株(7721)的相互作用.方法:采用MTT法利用中效原理判定两药合用的效果.结果:3种药物单独应用时随着药物剂量增加,其效应也增加;两药大剂量(大于中效剂量)合用时可产生拮抗作用(CI>1);小剂量(小于中效剂量)合用时可产生协同作用(CI>1);两药合用时的浓度比例及给药时间次序不同均会影响效应大小.结论:上述3种药物任何两种合用小剂量产生协同作用,大剂量产生拮抗作用,且效应大小与两药浓度比例及给药时间次序有关.

中效原理在顺铂、足叶乙甙对人肺癌细胞株(PAa)相互作用中的应用

目的 :利用中效原理观察顺铂、足叶乙甙配伍在体外对人肺癌细胞株 (PAa)的相互作用 ,判断联合用药的效果。方法 :采用MTT法利用中效原理判断联合用药的效果。结果 :两种药物单独应用时随药物剂量增加 ,其效应也增加 ,两种药物合用时产生协同作用 ,两种药物合用时的浓度比例及给药时间次序不同均会影响效应大小。结论 :上述两种药物合用产生协同作用 。

三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞增殖的研究

目的:体外试验研究三氧化二砷对口腔鳞癌的可能治疗作用。方法:以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞为研究对象之一,采用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察三氧化二砷作用于Tca8113细胞的量效关系、时效关系。采用平皿法姬姆萨染色观察三氧化二砷对Tca8113细胞的克隆形成抑制作用。以舌鳞状细胞癌临床新鲜标本组织块为研究对象之二,消化后细胞悬液与各浓度三氧化二砷、一定浓度的MTX、5Fu、PYM体外培养后MTT法测定临床舌癌细胞生长抑制率。结果:三氧化二砷对Tca8113细胞、临床舌癌细胞均有显著生长抑制作用。1μmolAs2O3台盼蓝染色活细胞计数Tca8113细胞生长抑制率28.57%,克隆形成抑制率31.01%;3μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率58.36%,克隆形成抑制率76.63%;5μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率86.03%,克隆形成抑制率91.30%。体外药敏测定:1μmol浓度As2O3的临床舌癌细胞的生长抑制率39.5%,3μmol浓度As2O3为47.2%,5μmol浓度As2O3为89%,MTX为36.5%,5Fu为41.3%,PYM为58.16%。临床药敏标准一般大于30%为敏感,PYM大于50%为敏感。结论:体外试验表明三氧化二砷可显著抑制人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞的生长,对临床癌细胞也表现了良好的抗增殖作用。

癌性胸腹水MTT法抗癌药物敏感性试验研究

目的 采用MTT比色法测定 39例癌性胸水及 2 7例癌性腹水对 10种常用化疗药物敏感性。方法 用常规方法收集胸腹水 ,并用肝素抗凝 (10u ml) ;不连续密度梯度离心法去除渗出液中血细胞 ,制成肿瘤单细胞悬液 ,进行药敏试验。结果 观察到肺癌患者的实体瘤组织与胸水之间肿瘤细胞相对抑制率有较好的相关性。同时观察到胸腹水中大量血细胞对药敏试验结果有较大影响 ,应预先除去。结论 根据药敏结果进行胸腹腔给药治疗 ,效果较好 ,80 %患者胸腹水近期得到控制 ,对于延长患者生命有重要意义。

一种新的^3H—TdR掺入法抗癌药敏试验

作者对琼脂-液体双层抗癌药敏试验系统加以改进,建立了更为简便有效的试验系统。经对84例临床肺癌患者活标本测试,成功率达85%。将肺癌细胞对长春新碱(VCR),丝裂霉素(MMC),顺铂(DDP)和阿霉素(ADM)的敏感界限,以1/10血液峰值浓度下细胞存活率表示,并分别定为50%、40%、30%和30%时,测试结果与文献报告的肺癌临床单药化疗有效率近似。本法与干细胞法作平行试验测试10个肺癌细胞系对4种药物的敏感性,两法符合率为83%。测试4例肺癌活检标本,两法符合第为100%。作者认为本试验系统具有临床推广应用价值。

恶性肿瘤药敏试验方法研究进展

恶性肿瘤是严重危害人类生命和健康的常见病和多发病,其病死率居各类疾病之首,化疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一。个体化治疗已成为化疗的趋势,肿瘤药敏试验可指导临床用药进行个体化治疗。本文综述了多种肿瘤药敏试验方法的原理、方法、优缺点及其目前在恶性肿瘤化疗中的应用和面临的问题。

59份人脑胶质瘤组织体外培养的药敏分析

目的通过对5种常用脑胶质瘤化疗药物的体外组织培养药敏检测结果分析来选择适当药物进行个体化化疗,选择一种针对性强的化疗药物作为脑胶质瘤术后的辅助治疗。方法对59份手术取得的新鲜胶质瘤组织进行体外组织培养化疗药物敏感性测定,所选药物为脑肿瘤常用化疗药物洛莫司汀(CCNU)、福莫司汀(FCNU)、替尼泊甙(VM26)、尼莫司汀(ACNU)及替莫唑胺(TMZ)。比较5种化疗药物体外抗肿瘤作用的差异,并分析药物敏感性与患者临床资料之间的相关性。结果 ACNU的敏感性与VM26比较.差异无统计学意义.但明显优于其他3种药。患者性别、年龄均对药物敏感性无显著性影响;各种药物的敏感性与病理分级无显著相关性。结论不同个体的胶质瘤标本对同一药物及同一个体对不同药物的敏感性差异很大,脑胶质瘤化疗应优先选择以ACNU为主的化疗方案。

口腔颌面部肿瘤化疗方案药物敏感性试验

本文以人舌鳞癌细胞系Tca8113为对象,利用MTT法对口腔颌面部肿瘤化疗常用的八种药物和七种方案进行了药敏试验.ADM、5-Fu、CDDP等抗肿瘤作用较强;而PYM、MTX、VCR单用对Tca8113细胞无明显作用.化疗方案中以MMBD、PF、PVP方案为佳,卡铂与顺铂在化疗方案中的作用无明显差异.实验结果提示:肿瘤化疗不能只凭经验用药,应注意化疗的耐药性问题.

人肝癌细胞系的药物敏感性研究

采用集落形成试验,测定五种人肝癌细胞系的药物敏感性。结果表明,这些细胞系对药物明显抗拒,对ADM、5-Fu、DDP和MEL的敏感性依次降低。各系细胞对PYM均较敏感。与ADM显然不同,PYM对慢增殖细胞具有更强的杀伤作用。该组细胞系似可用于抗肝癌药物的筛选。

肿瘤组织CD_(71)表达率与化疗药物敏感性的相关性研究

目的为探讨肿瘤组织转铁蛋白受体(CD71)表达率在指导化疗中的临床价值。方法采用流式细胞术(FCM)对193例各种肿瘤组织进行CD71表达率的检测,同时采用MTT比色法对8种化疗药物5-氟脲嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、卡铂(CBP)、顺铂(DDP)、环磷酰胺(CTX)、丝裂霉素(MMC)、甲氨喋呤(MTX)、鬼臼(VP16)进行肿瘤细胞药物敏感试验,以相对抑制率和药物敏感率与CD71表达率作相关性分析。结果CD71的表达率与5-FU、MTX、CTX、VP16、ADM及DDP相对抑制率具有明显的相关性(均P<0.01及P<0.05)。胃癌组CD71的表达率与5-FU、MTX、CTX及VP,大肠癌组与5-FU、CBP、DDP、MTX及VP,肺癌组与MTX及VP,乳腺癌组与5-FU、MTX及CTX,肝癌组与CBP的相对抑制率具有相关性;3组不同CD71的表达率中显示CD71表达率越高,肿瘤组织对周期性化疗药物(5-FU、MTX及VP)的敏感率也越高。结论CD71的表达率与化疗药物5-FU、MTX、CTX、VP及ADM、DDP的相对抑制率具有明显的相关性,但各肿瘤组之间的药物相关性存在一定差异;肿瘤组织对周期性化疗药物(5-FU、MTX及VP)的敏感率与CD71表达率呈正相关。CD71的表达检测率能反映细胞的增值状态,对指导选择化疗药物具有重要意义。

柔红霉素长春新碱体外对人急性髓系白血病细胞株的相互作用

目的 :观察柔红霉素、长春新碱联合应用在体外对人急性髓系白血病细胞株 (HL—60)的相互作用。方法 :采用MTT法 ,利用中效原理判断联合用药的效果。结果 :两种药物单用及联合应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加。两药大剂量合用时为拮抗效应 ,较小剂量合用时为协同效应。两药合用时 (除最小剂量外 )与先用柔红霉素24小时或先用长春新碱24小时比较P<0 01 ;小剂量合用时先用柔红霉素24小时与先用长春新碱24小时比较P>0 05。两药合用时浓度变化会影响合用效应。结论 :柔红霉素与长春新碱合用时大剂量为拮抗 ,较小剂量为协同 ;合用效应大小与两种药物浓度比例有关 ;与给药先后次序无关 。

肝癌腹水癌细胞、白细胞体外抗癌药物敏感相关性研究

目的探讨6种抗癌药物对肝癌晚期患者腹水癌细胞、白细胞化疗药敏结果及临床个体选药中的意义。方法采用CCK-8法检测抗癌药物对细胞的抑制率。结果卡铂、顺铂、阿霉素对大部分肝癌晚期患者腹水中癌细胞的抑制率明显高于白细胞(P<0.05),而羟基喜树碱对个别患者的白细胞抑制率明显高于癌细胞(P<0.05),丝裂霉素、氟尿嘧啶对两种细胞抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过体外对比6种抗癌药物对肝癌患者白细胞和癌细胞的抑制率,以减少白细胞杀伤作用和增强癌细胞抑制作用为条件,为肝癌晚期患者优化化疗方案,提高疗效,并为进一步的临床个体化用药的实现提供一定的实验数据。

三氧化二砷联合木黄酮对人胃癌细胞株SGC-7901的作用

目的:体外观察三氧化二砷及木黄酮对人胃癌细胞株(SGC-7901)的相互作用。方法:采用MTT法检测药物效应,利用中效原理判定两药合用的效果。结果:两种药单独应用时随着药物剂量增加,其效应也增加,呈剂量-效应关系;两药合用时合用指数均小于1(CI<1)。结论:三氧化二砷联合木黄酮对人胃癌细胞株SGC-7901的作用是协同作用。

肺癌细胞株对6种抗癌药物敏感性测定

目的 探讨肺癌细胞株抗癌药物的敏感性。方法 采用体外MTT比色分析法对 10株肺癌细胞进行NVB、GEM、TAX、SN - 38、CDDP、5 -Fu 6种抗癌药物的体外敏感试验。结果 ( 1) 6种抗癌药物对SCLC的显效顺序依次为GEM、NVB、CDDP、TAX、5 -Fu、SN - 38,4株SCLC的敏感性顺序依次为Lu135、N2 31、H6 9、SBC - 3;( 2 ) 6种抗癌药物对NSCLC的显效顺序依次为 5 -Fu、NVB、GEM、CDDP、TAX ,对SN - 38均为耐药 ,3种 6株NSCLC的敏感性顺序依次为Lu 6 5、PC 7、LK - 2、PC 9、PC 14、A 5 49;( 3)SCLC株对 6种抗癌药物敏感性优于NSCLC ,6种抗癌药物对 4株SCLC的总有效率为 87 5 % ,敏感为 6 2 5 % ,较敏感为 2 5 % ,耐药为12 5 % ;对 6株NSCLC的总有效率为 5 2 78% ,敏感为 16 6 7% ,较敏感为 36 11% ,耐药为 4 4 4 4%。结论 10株肺癌细胞株对 5 -Fu最敏感 ,GEM、NVB、CDDP、TAX次之 ,SN - 38效果最差。 6种药物中对 5 -Fu、CDDP未表现出明显耐药性 ,其余 4种均存在不同程度的耐药性 ,表明肺癌细胞株存在自然耐药性。

斑马鱼肿瘤异种移植模型在抗癌药敏感性评价中的应用

目的应用人类肺癌、胃癌和肝癌细胞斑马鱼异种移植模型,分别评价5种临床常用抗癌药的体内敏感性。方法分别建立斑马鱼肺癌A549、胃癌SGC-7901和肝癌Hep G2异种移植模型,顺铂、紫杉醇、长春瑞滨、恩度和贝伐单抗设计3个剂量分别处理斑马鱼肺癌A549移植模型,紫杉醇、伊立替康、羟基脲、顺铂和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)设计3个浓度或剂量分别处理斑马鱼胃癌SGC-7901移植模型,阿霉素、吉西他滨、羟基脲、顺铂和5-氟尿嘧啶设计3个浓度或剂量分别处理斑马鱼肝癌Hep G2移植模型。实验结束后,使用荧光显微镜进行体内肿瘤定量图像分析,计算药物对斑马鱼体内肿瘤生长抑制率,通过与模型对照组相比,分析是否具有统计学意义。结果受试的抗肿瘤药物在斑马鱼肿瘤异种移植模型中均有效,并且基本都呈剂量依赖性。在抗肺癌A549药敏试验中,药效从高到低分别为贝伐单抗(65%)>顺铂(55%)>长春瑞滨(40%)>恩度(39%)>紫杉醇(27%);在抗胃癌SGC-7901药敏试验中,药效从高到底分别为羟基脲(46%)>5-FU(31%)=伊立替康(31%)>紫杉醇(26%)>顺铂(24%);在抗肝癌Hep G2药敏试验中,药效从高到底分别为顺铂(64%)>羟基脲(56%)>吉西他滨(46%)>阿霉素(45%)>5-FU(38%)。结论斑马鱼肿瘤异种移植模型适合用于抗癌药体内药敏试验。