Identification of Two Cold Water-Soluble Polysaccharides from the Stems of Ephedra sinica Stapf

Two polysaccharides (ESP-A1 and ESP-A2) were isolated from the cold water extract of Ephedra sinica Stapf and purified through ethanol precipitation, deproteinization and by ion exchange and gel-filtration chromatography. Their molecular weight was determined using high performance size exclusion chromatog-raphy and evaporative light scattering detector (HPSEC-ELSD) and their monosaccharide composition was analyzed by high performance capillary electrophoresis (HPCE) based on pre-column derivatization with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP). It was shown that ESP-A1 consisted of xylose, arabinose, glucose, mannose and galactose and ESP-A2 consisted of xylose, arabinose, rhamnose and galactose, in a molar ratio (%) of 3.2: 61.1: 11.1: 12.9: 11.6 and 20.6: 67.7: 5.0: 6.7, respectively. The molecular weights (Mw) of ESP-A1 and ESP-A2 were 5.83 × 104 Da and more than 200 × 104 Da, respectively. To the best of our knowledge, two neutral polysaccharides are now being reported for the first time in this study.

蒙古族利用草麻黄（Ephedra sinica Stapf）资源的民族植物学研究

应用民族植物学的研究方法，记载和描述了蒙古族对草麻黄资源在经济利用、药物利用和文化利用方面的知识和经验，对民间利用的合理性和意义及草原地区草麻黄资源的开发和持续利用作了分析和探讨．

基于网络药理学探讨麻黄活性成分治疗血管痉挛的作用机制

【目的】运用网络药理学和体外细胞试验探究麻黄活性成分治疗血管痉挛的相关分子机制。【方法】从中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)、SwissTargetPrediction和PharMapper数据库获取麻黄的主要活性成分及作用靶点,通过DrugBank、GeneCards、OMIM数据库获取疾病靶点,取交集得到药物成分-疾病交集靶点。利用STRING数据库进行蛋白-蛋白互作(PPI)分析,通过Cytoscape 3.9.1软件筛选得到核心靶点与核心成分。采用Metascape平台进行GO功能与KEGG通路富集分析,AutoDock Vina平台进行分子对接。在此基础上,通过MTT法检测麻黄活性成分对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞(vSMCs)增殖影响的机制。【结果】麻黄的有效活性成分主要包括木犀草素、槲皮素、β-槲皮素、圣草酚、柚皮素、豆甾醇、山柰酚等,这些药物成分主要作用靶点488个,血管痉挛的相关靶点394个。麻黄防治血管痉挛有67个预测靶点,主要包括基质金属肽酶Ⅸ(MMP9)、MMP2、血管紧张素Ⅱ受体1型(AGTR1)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、一氧化氮合酶2(NOS2)等。对上述67个靶点进行富集分析发现,与正向调节细胞迁移、对外来刺激反应、对缺氧反应、血管生成正向调节等生物过程,等离子体膜、突触后膜、突触前膜、树突、膜筏、轴突末端等细胞组分,RNA聚合酶Ⅱ转录因子活性、配体激活序列特异性DNA结合、丝氨酸型内肽酶活性、肽链内切酶活性、酶结合、锌离子结合等分子功能,以及钙信号通路、血管平滑肌收缩、松弛素信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路(PI3K-Akt)、鞘脂类信号通路等途径相关。分子对接结果表明,麻黄主要活性成分木犀草素、槲皮素与关键靶点MMP2和MMP9结合具有稳定构象。体外试验结果表明,麻黄活性成分木犀草素能抑制血管紧张素Ⅱ所致vSMCs增殖,其机制可能与其抑制MAPK1信号转导通路的活化有关。【结论】麻黄多种活性成分通过作用于MMP2、MMP9、血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)、NOS2等靶点治疗血管痉挛,本研究结果为麻黄活性成分治疗血管痉挛的作用机制研究提供了科学参考。

两种珍稀沙生植物草麻黄和沙芦草种子催芽技术研究

草麻黄和沙芦草是我国重点保护野生植物,然而由于自身发芽率低和生境被破坏等原因,导致种群数量减少,为保护并提高两种珍稀植物的数量,本研究通过室内试验进行了两种珍稀植物的种子繁育技术研究。研究结果表明,不同生长激素对于草麻黄和沙芦草种子发芽影响不同。30mg/L的IAA处理可以明显促进草麻黄种子发芽;10mg/L浓度以上的6-BA和100mg/L的GA3均会明显抑制草麻黄种子发芽及活力。同样GA3浓度高于100mg/L均会抑制沙芦草种子发芽,20mg/L的细胞分裂素可以促进沙芦草种子发芽,40mg/L的IAA可以显著提高沙芦草发芽率。DMSO浸泡10min对种子发芽无影响;浸泡20min时,1%浓度DMSO促进效果最佳;当浸泡30min时,0.5%浓度的效果最佳。因此使用30mg/L和40mg/L的IAA分别有助于草麻黄和沙芦草种子发芽,提高种子活力,同时0.5%的DMSO浸泡30min更适合用于沙芦草种子发芽处理。

^(1)H NMR ERETIC2结合多变量分析法定量分析生麻黄与蜜炙麻黄差异

目的利用^(1)H NMR ERETIC2定量方法对14个批次的生麻黄和6个批次的蜜炙麻黄进行定性和定量分析,并筛选出差异成分,为麻黄质量标准的提升提供科学依据。方法以特征性成分麻黄碱信号强度为优选指标,对提取方法和复溶溶剂进行优化;建立基于^(1)H NMR ERETIC2方法的生麻黄和蜜炙麻黄特征成分绝对定量方法;采用^(1)H NMR谱图结合多变量分析法寻找不同批次生麻黄和蜜炙麻黄潜在的差异成分。结果最佳样品前处理方法为以甲醇为溶剂,物料比为1∶5(g/mL),超声提取5 min,氘代甲醇作为复溶溶剂。^(1)H NMR图谱共鉴定了11个化学成分,其中8个共有成分被选作定量指标。定量结果显示,生麻黄和蜜炙麻黄中异亮氨酸、蔗糖、葡萄糖和丙氨酸的含量差异有统计学意义(P<0.05);多元统计分析结果也表明,生麻黄和蜜炙麻黄之间存在明显差异,葡萄糖和蔗糖是主要的差异贡献成分,且在蜜炙麻黄中含量较高,而蜜炙麻黄中丙氨酸和异亮氨酸的含量则明显下降(P<0.05)。结论本研究建立的^(1)H NMR ERETIC2定量方法结合多元统计分析,可筛选出生麻黄和蜜炙麻黄的差异成分,能够有效区分生麻黄和蜜炙麻黄,为后续麻黄质量标准的完善提供了科学依据。

盐碱地麻黄种植试验研究初报

在盐碱地上进行麻黄种植试验 ,0～ 30 cm土壤全盐量 1.2 %时 ,麻黄生长良好 ,全盐量 1.6 %以上时生长受抑制。中度盐碱地种植麻黄是可行的。

麻黄非麻黄碱部分中黄酮、生物碱和有机酸的分析

对麻黄的非麻黄碱部分中的主要化学成分进行了初步研究。以芦丁为对照品、Al(NO3) 3作显色剂 ,采用分光光度法测定了黄酮总量 ;以盐酸麻黄碱为对照品、溴百里香酚蓝作显色剂 ,通过酸性染料比色法测定了生物碱的总量。两种方法均具有快速、灵敏、重现性好的特点。并通过颜色反应鉴定了非麻黄碱部分中有机酸类的存在。研究结果为进一步研究麻黄活性成分。

野生与人工栽培麻黄不同部位成分的比较研究

目的比较野生与人工栽培的麻黄不同部位成分的差别。方法以50%甲醇为溶剂,用加热回流法分别提取野生与人工栽培麻黄的茎与根部,再以HPLC测定各个提取液中的麻黄碱的量。采用水蒸气蒸馏法提取麻黄挥发油,用GC-MS测定野生与栽培的麻黄挥发油中的成分。结果HPLC测定野生麻黄的茎与根的提取液中分别含麻黄碱0.55%和0.00057%,人工栽培麻黄的茎与根的提取液中分别含麻黄碱0.26%和0.0017%。用GC-MS确定了麻黄挥发油中的45种物质,其中野生和栽培品共有成分13种。结论野生麻黄茎中含麻黄碱的量约是人工栽培的2倍,而在两种麻黄的根中麻黄碱的量都非常低。在麻黄挥发油中未发现麻黄碱。

中药麻黄根的化学成分研究

目的:研究中药麻黄根(Ephedra root)的化学成分。方法:采用各种柱色谱法分离,运用多种波谱方法鉴定化合物结构。结果:从麻黄根乙醇提取液的乙酸乙酯萃取部位中分离得到7个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、麻黄宁D(3)、麻黄宁E(4)、麻黄酚A(5)、表阿夫儿茶精(6)、辛酸乙酯(7)。结论:化合物1、2、6、7均为首次从该种中药中分离得到。

基于中空纤维液相微萃取的麻黄碱和伪麻黄碱优势构象的确定及含量测定

利用中空纤维液相微萃取方法(HF-LPME)分析麻黄碱和伪麻黄碱在不同基质中的优势构象,阐明了麻黄碱和伪麻黄碱的萃取机理;结合高效液相色谱(HPLC)建立了微量麻黄碱和伪麻黄碱的分离测定方法。以聚偏氟乙烯中空纤维为有机溶剂载体,正己醇为萃取溶剂,麻黄碱和伪麻黄碱的NaOH(5mol/L)溶液为样品相,0.01mol/L H2SO4溶液为接收相,在1 200r/min转速下萃取35min,收集萃取液直接进行HPLC分析。麻黄碱和伪麻黄碱在水溶液中的线性范围为5～100μg/L,检出限分别为1.9μg/L和1.2μg/L,富集倍数分别为38和61倍,平均回收率分别为100.6%±1.2%和103.2%±3.5%;在鼠尿液中的线性范围为100～5×104μg/L,检出限分别为30μg/L和42μg/L,富集倍数分别为20和17倍,平均回收率分别为108.4%±4.4%和106.1%±5.4%。研究表明该方法操作简单,选择性高,适用于微量麻黄碱的含量测定和分析。

麻黄多糖中蛋白含量测定及脱蛋白方法的比较

目的:建立麻黄多糖中蛋白的含量测定方法,比较不同脱蛋白方法的蛋白脱除效果。方法:水提醇沉提取麻黄多糖,Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶-Sevag法去除蛋白,考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。结果:麻黄多糖脱蛋白前的蛋白含量为26.30%,Sevag法、三氯乙酸法和木瓜蛋白酶-Sevag法脱蛋白后的蛋白含量分别为15.00%,6.80%和1.70%;三种方法的蛋白脱除率分别为42.97%,74.14%和93.54%。结论:木瓜蛋白酶-Sevag法的脱蛋白效果较好,考马斯亮蓝G-250染色法操作简便,准确性好,不失为多糖中蛋白含量测定的一种好方法。

麻黄多糖中糖醛酸含量的测定

目的:建立麻黄多糖中糖醛酸的含量测定方法。方法:采用咔唑-硫酸比色法,具体为硫酸-硼砂溶液6mL,振摇混合,在沸水浴中煮沸5m in,以冰水浴冷却至室温,分别加入0.1g.mL-1咔唑无水乙醇溶液0.2mL,摇匀后,在沸水与中煮沸10m in,冷却后,以同样处理的重蒸馏水为空白,进行比色,于分光光度计所测得的最大吸收波长530nm处测定吸光度值(OD)。结果:麻黄多糖中糖醛酸含量为45.89%,精密度及重复性良好,回收率为101.10%,RSD为1.42%。结论:此方法操作简便,准确性好,为麻黄的质量控制提供了一个定量方法和参考依据。

甘肃道地药材麻黄指纹图谱的研究

目的:建立甘肃道地药材麻黄的指纹图谱。方法:采用HPLC法分析麻黄药材中的麻黄碱。结果:麻黄药材的指纹图谱有较好的相关性,所有共有峰的参数符合国家药品监督管理局关于有关药材的技术要求。结论:本研究将有助于麻黄药材的标准化种植及麻黄道地药材的质量控制。

麻黄中生物碱类有效成分的非水毛细管电泳含量测定

目的 利用非水毛细管电泳 ( NACE)法对麻黄中各生物碱类有效成分进行含量测定 ,并比较不同提取方法中各组份含量差异。方法 采用 5 0 mm ol/ L 醋酸铵的甲醇溶液 ,未加入任何其他添加剂 ,检测波长为 2 10 nm。结果各组份在 8min内达基线分离。伪麻黄碱在 9.8～ 14 7.0μg/ m L ,去甲基麻黄碱在 6 .8～ 10 2 .0μg/ m L ,麻黄碱在9.4～ 14 1.0 μg/ m L,去甲基伪麻黄碱在 4 .8～ 72 .0 μg/ m L,甲基麻黄碱在 6 .8～ 10 2 .0 μg/ m L 分别有良好的线性关系。各麻黄碱类回收率在 95 .0 %～ 10 0 .4 %。结论 为麻黄中各生物碱类有效成分的含量测定提供了一种快速。

草麻黄高通量转录组分析及黄酮类代谢途径相关基因的鉴定

草麻黄(Ephedra sinica Stapf)植物富含黄酮类和生物碱类化合物,具有重要药用价值,并且适应性强,在防风固沙、改善沙漠环境等方面具有重要作用。通过对已测序草麻黄转录组的原始数据进行重新组装、拼接等生物信息学分析,共得到7 947 954个clean reads,13 389条unigene序列。经过Nr,KOGs,GO,KEGG和Swiss-Prot等数据库分析后,获得10 481个Nr注释,4 533个KOG功能注释,7 121个GO功能注释,5 833个KEGG注释,8 039个Swiss-Prot注释,并利用KEGG通路分析技术发掘草麻黄中参与黄酮类化合物代谢途径相关基因,为克隆草麻黄黄酮合成关键基因、黄酮类化合物的生物合成提供重要的遗传资源,同时为其抗逆机制的研究和药用价值开发提供依据。

麻黄扦插育苗技术研究

以草麻黄为试验材料,从 NAA 浓度及处理时间,扦插基质及茎段生理状态 4个方面研究了对麻黄茎段扦插生根成苗的影响。结果表明,麻黄扦插 NAA 处理最佳浓度为 100 mg/l,处理时间为 10 min,扦插基质为干净的河砂,最佳生理状态为三年生的麻黄茎段。

草麻黄细胞悬浮培养体系的建立

目的:建立草麻黄悬浮培养体系。方法:采用组织培养的方法探讨了水解酪蛋白(CH)、基本培养基、取材时间、和摇床转速对麻黄愈伤组织悬浮培养的影响。结果:MS基本培养基、300mg/l水解酪蛋白、继代25d的愈伤组织、转速110r/min是愈伤组织悬浮培养的适宜条件,愈伤组织细胞增殖量分别为0.76g、0.80g、0.80g、0.80g。结论:初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。

草麻黄种子发芽生理特性研究

目的:研究麻黄种子发芽特性,为麻黄栽培生产提供依据。方法:种子发芽抑制物用流水冲洗法研究,种子活力用TTC法和红墨水法测定,生长物质对种子发芽的影响用琼脂培养基法,不同沙埋深度对种子发芽的影响用沙基培养基法研究。结果:麻黄干种子发芽率为44%,用蒸馏水浸泡处理12h种子萌发率为61%,用流水冲洗处理12h种子萌发率可达79.9%,而带苞片种子发芽率为0%。用40mg/LGA处理可明显促进麻黄种子发芽,2d就能达到最高萌发率94%。而用40mg/LIAA和40mg/L6-BA处理则明显延缓麻黄种子发芽,最高萌发率均延迟到第7d才出现,其发芽指数与对照间差异均达到显著水平(P<0.05)。在0～6cm沙埋深度范围内,随着沙埋深度的增加麻黄种子萌发率逐渐提高。而超过6cm,随沙埋深度的增大麻黄种子萌发率逐渐下降。随着沙埋深度增加,根长度呈抛物线形变化,而茎长度呈增加之势,根冠比递减。结论:麻黄苞片和种子均含种子萌发抑制物,充分的水洗、GA处理等能提高麻黄种子发芽率,加快种子发芽,同时适当深播可以提高麻黄种子发芽和出苗率。

麻黄草中麻黄碱提取的工艺学研究

通过正交设计考察渗漉前的浸泡时间、温度、漉速和渗漉液用量对麻黄草渗漉提取麻黄碱的影响 ,优化了渗漉条件 ;麻黄草中麻黄碱的鉴定及含量测定采用高效液相色谱 (HPLC)分析技术。结果表明 ,在影响渗漉效果的 4因素中 ,温度的影响远远大于其它 3因素的影响 ,浸泡时间的影响最小 ,HPLC技术可以鉴定并定量麻黄草的乙醇渗漉液中麻黄碱 ,用乙醇对麻黄草进行浸泡和渗漉可以得到麻黄碱 ,其含量高于普通的索氏提取法 ,最好的渗漉条件是浸泡 2d、漉速ml·min-1、渗漉用液量 130ml、温度 40℃。

麻黄总多糖可见分光光度法定量方法考察及HPLC-ELSD法测定均多糖ESP-B4含量

目的:建立麻黄总多糖及均多糖ESP-B4的含量测定方法,为有效的控制麻黄多糖质量提供科学有效依据。方法:采用可见分光光度法测定麻黄总多糖含量,检测波长:490nm。采用HPLC-ELSD法测定均多糖ESP-B4的含量,使用日本ShodexTMsugar KS-805+KS-G色谱柱,流动相:超纯水,柱温25℃,流速0.5mL/min,蒸发光检测器参数为漂移管温度116℃,载气流速3.3L/min。结果:麻黄总多糖及均多糖ESP-B4分别在6.25～100μg(r=0.999 8,n=5),2～12μg(r=0.999 8,n=6)范围内具有良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为101.68%(RSD=1.73%),99.655%(RSD=2.9%)。结论:本实验采用的方法简便,精密度高,结果准确可靠,为麻黄总多糖中均多糖ESP-B4含量测定提供了一个新的定量方法,同时为麻黄药材的质量控制提供了科学可靠的参考依据。